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Q. western blot 실험
한달차 학부연구생입니다. HCT116 Cell 에서 물질처리에 의한 Apoptosis에 대한 Western blot 실험을 진행하였습니다. P53, MDM2를 확인하였고 P53에선 변화가없었으며 MDM2에선 물질처리에 의해 감소하였습니다.  Control을 확인하였으나 과도한 Stripping으로 제대로 확인이 불가하였습니다. 그래서 P-P53(S15)와 P14ARF를 확인하였고 P-P53은 물질처리에 의해 감소하였다고 보이며 P14ARF는 원인은 모르나 밴드가 detection되지않아  Control을 찍어볼 예정입니다.    gene들이 제가 생각하던 것과 다르게 나타나서 너무 당황스럽습니다. Control을 제대로 확인할 수 없으니 실험을 다시 진행하는것이 맞는것인가요?
회원작성글 OPQ  |  07.23
Q. 바실러스 튜링겐시스를 배양할 때
카테고리 분류는 어떻게 해야할지 정확하게 모르겠어 우선 아는 단어를 골랐습니다 죄송해요ㅠㅠ 바실러스 튜링겐시스를 배양할 때 사용할 수 있는 배지는 무엇 무엇이 있나요? 바실러스 튜링겐스시를 배양하여 생물 농약을 만들고자 합니다! 이왕이면 구하기 쉬운 배지로 답변 주세요ㅠㅠ
회원작성글 afffdfdee  |  07.23
Q. un-paired t test 통계질문이요!
안녕하세요!  통계질문이 있어서 처음으로 글 올려봅니다.  Wild type (WT) vs Knock-out (KO) 보통 두 그룹을 un-paired t test를 이용하여 비교분석하고있습니다. 그런데, 아래 사진처럼 Fast 와 Fed라는 조건에서 저런식으로 비교를 하려면, multiple t test를 보통 사용하시나요? multiple을 사용하게 되면, 검정오류에 걸릴 수 있어서 ANOVA를 사용하는 거 같던데, 어떤 통계방법이 적용되어야 하나요?  감사합니다.   
회원작성글 독거노인  |  07.22
Q. Primary chicken 근육줄기세포(Muscle stem cell) 상태 좀 봐주실 분 계신가요? 첨부파일
안녕하세요,   Primary chicken의 뒷다리 살에서 Isolation 후 preplating을 거쳐서 근육줄기세포를 획득한 후, 세포증식 및 세포분화 실험을 하고 있는 연구원입니다.   제가 알기로 해당 cell은 쭉쭉 길게 뻗는 cell shape이 이상적이라고 하는데, 제가 키우는 cell은 조금 잘려져 있는 모양이어서, 주위에 도움을 요청해보니 apoptosis 혹은 necrosis가 많이 일어났으며, 이는 세포 배양 시 오염 발생으로 인한 것으로 추정된다고 조언받았습니다. p/s. 세포배양액 : Ham'sF10 media + 20% FBS + 1% penicillin/streptomycin + 5 ng/ml FGF2 (성장인자)   1) 이러한 상태가 apoptosis/necrosis가 맞나요? 2) 사용 시약들은 all fresh하게 사용했으며, 실험시 늘 라텍스장갑과 알코올 소독을 습관화하고 있습니다. 그렇다면 인큐베이터 내부 오염이 가장 크게 생각되는 게 맞을까요?   전문가분들이 세포 상태를 봐주시면 크나큰 영광이겠습니다.   감사합니다.
회원작성글 하우아이  |  07.22
Q. SDS-PAGE 실험에서 LDS samplebuffer와 reducing agent 넣는이유
현재 시험실에서 SDS-PAGE 시험을 진행하고있는데, 샘플 전처리시 LDS sample buffer와 reducing agent를 넣고 실험하고있습니다. LDS samplebuffer에는 mercapto ethanol이 들어가있어 di sulfide bond 끊는걸로 알고있고, reducing agent에는 DTT가 들어가있어 di-sulfide bond 끊는걸로 알고있습니다.   LDS 샘플버퍼가 s-s 본드 끊어주는 역할을 하는데, 굳이 동일한 역할을 하는 reducing agent까지 넣는 이유를 찾질 못하겠네요..
회원작성글 goooda  |  07.22
Q. migration할때 FBS 얼마나 넣나요
cell migration 실험을 하려고 합니다. 실험실에 protocol이 없어서 열심히 찾아보고 주변에 물어보고 해서 여러번에 실패 끝에 성공을 했는데요. 실패원인이 제가 FBS를 첨가하지 않아서 cell이 migration하지 않았더라구요. 그래서 지인이 10%FBS를 넣으라고 해서 24시간 starvation하고 treatment를 첨가한 media를 넣고 30분 뒤에 총 volume의 10%FBS을 첨가해서 0h으로 하고 이후 2시간마다 확인하고 있습니다. 저희가 실험하는 cell이 migration이 금방되서 IGF을 처리하면 3~5시간이면 완전 migration이 됩니다. 근데 다른 지인이 10%FBS를 넣으면 증식이 되는거 아니냐며 3%가 적당하다고 합니다. 여러분들은 FBS 얼마나 넣으시나요?
회원작성글 oneday  |  07.22
Q. NK92 K562 proliferation counting
media 갈아주지않고 냅둔지 4일차입니다 원래 이쯤되면 죽어야 정상이라는데 제껀 왜 두배씩 불어나가는건가요..?   K562 DAY1 2.1*105 DAY2 9.45*105 DAY3 19.5*105 DAY4 32.4*105   NK92 DAY1 2.85*105 DAY2 4.35*105 DAY3 8.4*105 DAY4 19.2*105   둘다 DAY0에 1*105로 seeding했구요 특히 NK92는 이렇게 잘자라지 않는다는데 제가 뭘 잘못한걸까요ㅠㅠ..
회원작성글 카리나  |  07.22
Q. (뀨 쌤, Coolzinc 쌤) NK 세포 사진 배율별 올려 봅니다. 첨부파일
사진이 하나 밖에 안올라 가서 답변에 사진 더 올려 보았습니다.  T75 와 T175 이구요. 현 5일째 배양중입니다. sub-culture 할때 IL-2 와 IL-15 해주었습니다.  저번에 말씀 드린것 처럼 PBMC 에서 NK cell 수를 올려주려고 하는데 지금 NK가 잘 크고 있는건지. T cell 이 크고 있는 건지 소견 부탁드립니다 ^^    감사합니다 선생님들~
회원작성글 Derick  |  07.22
Q. 지속가능한 발전
지속가능한 발전을 큰 주제로 하고 환경오염을 소주제로 하여 팀을 구성하였는데 고등학생 수준에서 할 수 있는 환경오염관련 실험 추천해주세요
회원작성글 alice_s  |  07.22
Q. elution buffer pH변화
안녕하세요, 단백질 정제하는 석사 1학기입니다. 제가 elution buffer 조성을 바꿨더니 sample buffer가 노란색이 되며 산성을 띄는것 같습니다. 기존 elution buffer 조성은 20mM Tris(pH 7.5), 150mM NaCl, 5mM MgCl2, 0.5mM DTT, 300mM Imidazole에서 20mM Tris(pH 7.0), 150mM KCl, 10mM MgCl2, 0.5mM DTT, 5% Glycerol, 300mM Imidazole로 바꿨습니다. 현재 하루 지난 elution buffer가 완전 갈색으로 바뀌었는데, 어떤 화학반응이 일어났는지 자문좀 구할 수 있을까요?ㅠㅠ Imidazole과 DTT와의 반응인건지, MgCl2와의 반응인건지 잘 모르겠습니다...
회원작성글 동성애는후천성  |  07.22
Q. 항암효과 측정
항암효과를 측정하는 방법 알려주세요. 쉽고 자세하게 부탁드립니다.
회원작성글 단치  |  07.21
Q. cell lysate에서 DNA 제거
저희는 tumor cell lysate를 가지고 vaccine 실험을 하고 있는데 결과가 잘 나와서 임상 연구를 시작하려고 합니다. 그런데 문제는 tumor cell lysate에 DNA가 포함되어 있어서 환자한테 쓰기가 위험할 수 있을 것 같다는  comment를 받아서 cell lysate에서 DNA만 제거하려고 하는데 QIAGEN colum에 내리니 DNA가 제거되기는 하는 것 같은데 단백질 성분도 같이 걸리는 것 같아서 혹시 좋은 아이디어 있으시면 공유 가능하실까요? 감사합니다.
회원작성글 새슬  |  07.21
Q. Cell stock 보관 방법 질문
안녕하세요. Cell stock 보관에 대해 여쭤보려고 합니다. 저희 랩실은 질소 탱크 대신 deep freezer에 stock을 보관하고 있습니다. 본래 원칙은 isopropanol box에 넣어 overnight 후 다음 날 deep freezer로 옮기는 건데, 제가 부득이하게 다음 날에 출근을 못할 것 같아 혹시 overnight하지 않고 5-6시간 정도 지난 뒤 deep freezer로 옮겨도 되는지 여쭤보고자 합니다. 감사합니다.
회원작성글 eunseuli  |  07.21
Q. mouse fibroblast subculture 질문입니다!.
안녕하세요 ! 초보 석사생입니다. 현재 mouse에서 fibroblast를 추출하여 배양하고 있습니다. plate가 꽉찬 상태에서 subculture를 진행하면 cell이 이상하게 너무 안나옵니다 ㅠ.  100mm plate를 subculture하였을 때 cell이 3x10^5 개밖에 나오지가 않습니다. subculture는 먼저 PBS로 plate를 wash해주고, 1x trypsin/EDTA를 넣고 5분간 인큐베이션하는데, 중간에 한번 꺼내어 tapping을 해주었습니다. 그리고 media로 중화시킨 후 centrifugation을 하고 카운트를 진행했습니다. media는 1% antibiotic, 10%FBS, DMEM을 사용하였습니다. 혹시 트립신처리시간이 문제인지, media가 문제인지 궁금하여 찾아보았지만, 찾아볼 수가 없어서 이렇게 질문드립니다 ㅠ
회원작성글 태태태  |  07.21
Q. 농축적혈구에서 PBMC 분리
안녕하세요, PBMC 를 분리해서 lymphocyte/monocyte 에 대해 연구하려고 세팅하고있는 중입니다.   다름이아니라 처음 해보는 실험이라 감이 좀 안잡히는데, 우선 농축적혈구를 유상구매해서 Ficoll 과 같은 방식으로 PBMC 를 분리하고자합니다.   해당 프로토콜들을 보니 보통 혈액과 PBS 를 1:1 로 섞어 dilution 하여 진행을 하던데, 농축적혈구 같은 경우도 똑같이 1:1 로 하면 될지, 아니면 혈장이나 혈소판 등이 제거된 양만큼 PBS를 더 넣어주어야할지 감이 안잡힙니다.   BRIC 에서 검색해봤을 때 PBMC isolation 에 관한 질문들에서는 어떤 혈액을 사용하는지 잘 기술이 안되어있는 것 같아 헷갈립니다. 선생님들은 어떤 혈액을 사용하시고, 어디서 공급받는지 여쭤볼 수 있을까요?   혈액원을 통해서 공급받으려하는데, 전혈, 농축적혈구, 백혈구제거필터(그 필터에 백혈구 다수), LRS chamber (성분채혈기기의 챔버) 이렇게 종류들이 있던데 PBMC 를 분리하려면 어떤 것들을 사용해야할까 싶어서 여쭤봅니다.
회원작성글 메기수염  |  07.21
Q. siRNA 제작
  siRNA 처리 시 오토파지의 inhibition 실험 design 중인 대학원생입니다 siRNA를 주문해야 하는데 감이 안잡혀서 질문드립니다 reference를 보다보니 'The sources of siRNAs were Atg5, Atg7, a control (no. 102655310, 102655373, and 1027280, respectively; Qiagen)' 문구가 있어서 qiagen site에서 검색하여 보니 나오질 않습니다.. 웬만하면 reference에서 사용한 제품을 쓰고싶은데.. 또 시그마에서 Atg5, Atg7에 대해 똑같이 검색했는데  Sequence Start에 따라 관련 제품이 엄청 많더라구요ㅠㅠ 무엇을 봐야하고 어떻게 주문해야하는지 감이 안잡힙니다 ㅠㅠ 도와주세요..      
회원작성글 ㄱㄱ팡  |  07.21
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