안녕하세요. hepa1-6에 lipid accumulation시키고 oil red O staining 시험 중인데 잘 안됩니다ㅠㅠ 그래서 여러 프로토콜을 찾아보고 있는데 60% isopropanol 5분 incubation 한 다음 dry하고, ORO 염색 후 용출시키기 전에도 dry하는 프로토콜이 있더라고요. 왜 말리는지 알 수 있을까요? 말리면 염색이랑 용출이 더 잘 되나요?

실험 너무 오랜만에 해서 노르말과 퍼센트 농도를 까먹었습니다... 0.5%NaOH 300ml을 넣어야하는데 현재 제가 1N NaOH를 가지고 있습니다. 이걸 그대로 300ml 넣으면 되는거 맞을까요?

  현재 RBL-2H3 세포를 이용하여 Hexosaminidase 실험중입니다. 24-well plate에 적절한 농도로 seeding하여 20시간 배양한 뒤 sample 1시간 전처리 후 IgE를 처리하여 또 20시간 정도 배양하는데요 이 때 sample 처리 전에 세포가 떨어질까 wash 단계는 생략하였고, 샘플 처리 전 후 모두 세포가 잘 붙어 있었는데 전처리 1시간 뒤에 IgE를 처리하기 위해 세포를 꺼내서 현미경으로 보면 배지 교체만 해준 control군 중에 몇 well은 잘 붙어있는데 몇 개의 well은 또 떨어져 있더라구요. 오히려 샘플을 처리한 well에는 또 모두 세포가 잘 붙어있는 걸로 보아 샘플의 독성 때문은 아닌 것 같고, 단지 핸들링 문제인 것 같습니다. 여기서 제가 생각해 본 트러블슈팅은 1. Media suction : 1 ml 팁 끝에 10 ul 팁을 꽂아 석션, 석션 후에 세포 상태를 보았을 때 문제 없었음    2. 배지 교체 시 분주의 세기: 샘플은 벽면에 분주함, 분주 직후 incubation 하기 전에 현미경으로 보았을 때 잘 붙어있었음  이렇습니다. 1, 2번 모두 저의 생각은 이러한데 제가 잡지 못한 문제가 있을까요? 모든 well에서 세포가 떨어지면 plate 코팅 문제이지는 않을까 생각 해보겠는데, 세포가 너무 불균일하게 떨어져서요 plate는 corning (#3526) 사용중입니다.  조언 부탁드립니다.   

안녕하세요.  nanoparticle을 만들고 동결건조 시킨 후 powder 상태로 챔버에 보관중입니다. 동결건조 시키기 전 물에 분산된 상태로 DLS(dynamic light scattering)  입자 크기를 측정하였을때보다, 동결건조 시킨 후의 입자 크기가 거의 2배 증가 합니다. 이유가 뭘까요 ? ㅜ ㅜ

안녕하세요. 현재 학부생입니다. 몇가지 질문이 있어 이렇게 질문은 남깁니다.   1. 20U/ul 제한효소를 1U/ul로 희석하려면 그냥 19ul buffer+1ul 제한효소 넣으면 1U/ul로 희석되는 게 맞나요?   2.프로메가 사 BamH1 제한효소 구경 중에 storage 버퍼가 있던데 이게 어디쓰는 건가요? 이걸로 효소를 희석하는 게 맞나요?   부탁드립니다.

하이드로겔 같은 재료는 media에 둥둥 뜨던데 이런 재료는 보통 cell test 할 때 어떻게 하나요? 의료용 접착제 같은 것으로 바닥에 고정시키나요?ㅠㅠ

안녕하세요. 이번에 쿠마시 블루로 염색시킨 겔을 사진 찍고 싶습니다.  사진을 찍으려고 보니 흰 판에다가 찍어야하는데 그냥 아크릴판에다 찍으면 되는지 궁금하네요 ㅜㅜ 사진 처럼 저런제품도 구매해볼까 생각하고 있는데 명칭이 뭔지 모르겠어요.. 혹시 이름이랑 판매처 아시는분 계실까요?ㅜ

mouse의 피부조직을 채취하여 염색을 하려고 하는데요, 피부조직을 자르면 돌돌 말려지는데  어떻게 펼쳐서 고정액에 담가 고정시키시는 지 궁금합니다. 

졸업 논문을 써야 할 시기가 다가옴에 따라 제 실험을 하나 해서 졸논을 써보고 싶어 준비중에 있습니다. 다양안 메탈 옥사이드 나노 입자를 합성해서 해당 입자들의 항균 능력과 농도를 비교 분석해보고 싶은데, 메탈 옥사이드 나노 입자 합성법을 찾을 방도가 막막하네요. 논문도 찾아보고 있는데, 어떤 키워드를 이용해서 찾아야 할지를 모르겠어서 혹시나 논문 찾을때 제가 원하는 논문을 찾을 수 있는 팁 좀 알려주시면 감사하겠습니다.

안녕하세요, 면역학 전공이지만 어찌저찌 바이러스 실험을 하고 있는 초보입니다. 요즘 influenza A virus로 plaque assay를 진행하고 있지만 plaque이 안 보여서 고생하고 있습니다. 여기저기 찾아보았는데 잘 안나와서 여기에 질문 드립니다. 1. overlay만드실 때 antibiotics를 넣나요?  2. 현재 cell을 5e5을 6well에 seeding중인데 protocol상 20h incubation하라고 했지만 고르게 깔지 못한것도 있어서 confluency가 70~80%정도 되더라고요,  보통 plaque assay를 하실때 confluency를 어느정도로 잡고 가는지 궁금합니다. 또한  incubation time을 늘려서 cell을 키워주는게 좋을지 아니면 처음부터 seeding number을 늘릴지도 궁금합니다. 3.제가 처음에 멋모르고 plaque assay를 진행하면서 overlay를 만들때 실수로 1x antibiotics를 1/100로(제가 받은 protocol은 1x anti-anti사용) 적게 넣은적이 있는데 plaque이 아주 잘 떴었습니다. 혹시 plaque잘 안나오는 원인이 antibiotics사용과 관계가 있는지 여쭤봅니다. 

안녕하세요 RNA 추출 관련해서 궁금한 점이 있습니다. 먼저 RNA가 DNA보다 많이 안정성이 떨어져서 실험하는 과정도 주의하며 빨리 끝내야한다는 것은 알고 있는데   혹시 추출하고자 하는 식물체 잎을 미리 액체 질소로 분쇄하여 딥프리저에 보관 후  2주 정도 뒤에 분쇄해 둔 잎으로 RNA추출이 가능할까요?   불안하긴 한데 분쇄 후 생기는 loss 양이 있기에 샘플을 너무 버리는 것 같아서요.. 

RFP protein의 일부를 잘라내 subcloning하는 실험을 하고 있습니다.   Sal1, kpn1 제한효소 사용하여 forward primer, reverse primer를 디자인 해야 하는데 제가 맞게 했는지 잘 모르겠어서 질문 올립니다.   Forward primer(랜덤서열(5bp) + Sal1 제한효소 + DNA 서열(15bp)) 5' - GGTATGTCGACATGGCCTCCTCCGAG - 3'   Reverse primer(랜덤서열(5bp) + kpn1 제한효소 + DNA 서열(15bp)) 5' - TAAGAGGTACCGGCGCCGGTGGAGTG - 3'

안녕하세요. western blot 결과가 너무 왔다갔다해서 질문드립니다...ㅠ 거의 50퍼의 확률로 제대로나올때도있고 밴드가 휘어서 나올때도 있는데 도무지 원인을 모르겠습니다. SDS PAGE 까지는 항상 제대로 되기때문에 transfer 단계에서 뭔가 잘못되고 있는것같습니다....ㅠㅠ 현재 trasfer 실험 방법은 다음과 같습니다.  - sds page 할때 gel은 bio rad 사에서 만들어서 나오는 젤 사용, 러닝버퍼       도 시판 제품 사용  - 트렌스퍼 버퍼도 전부 10x로 파는 버퍼 1x로 희석해서 사용  - 트렌스퍼 버퍼는 전날 만들고 냉장고에 넣어둔 후 다음날 차갑게 사용  - 트렌스퍼 버퍼에 트레이에 부은 후 트렌스퍼 카세트에 얇은 스펀지 한장     적셔서 깔고 3M paper 3장 적셔서 깔고 전기영동된 gel(sds page 진행 후     트렌스퍼 버퍼에 담궈서 10분정도 씻어줌) 올리고 pvdf 멤브레인( 20분전     에 메탄올에 넣어서 10분간 활성화시켜주고 10분정도 트렌스퍼 버퍼에       워시해서 사용) 올리고 롤러로 기포빼줌, 그다음 적신 3M paper 3장 올리     고 적신 스펀지 한장 올린 후 살살 들어서 카세트 고정, 기기에 넣어주고       트렌스퍼 버퍼 끝까지 부어준후 100V 로 50분~1시간 트렌스퍼진행.(열       발생 최대한 막으려고 아이스로 기기 잔뜩 덮어주고 진행) - 성공했을 경우 밴드 경향 (원래 나와야하는 밴드 모양) - 실패했을 경우 나오는 밴드 경향 항상 위와 같은 방식으로 동일하게 진행하는데 어쩔때는 맨위의 사진처럼 밴드가 예쁘게나오고 어쩔때는 아래 사진들처럼 엉망으로 퍼져서 나옵니다.ㅠㅠㅠ 트렌스퍼 카세트가 헐거워져서 제대로 잡아주질 못해서 그런가?하고 카세트도 새로 구입해봤는데 여전히 성공비율 50%로 똑같고, 3M 종이 3장,3장 깔아주는게 너무 적나 싶어서 몇장씩 더깔아도 똑같습니다.  transfer 끝나고 검체부분은 안보여도 마커는 pvdf 멤브레인 상에 보이는데 마커가 일렬로 예쁘게 trasfer 되었어도 다음날 찍어보면 밴드가 엉망일때도 있고, 마커가 찌그러지고 엉망으로 나와도 다음날 찍어보면 밴드가 의외로 제대로 나올때도 있습니다. 뭐때문에 이러는지를 알아야 실험이 잡힐텐데 계속 이러니 버퍼도, 젤도 두배로 사용하고 실험시간도 두배로 걸려서 너무 힘드네요... 혹시 왜이러는지 아시는분있으실까요?

황화물계 고체전해질 연구중인데,  예를들어 원재료인 Li2S에서 Li이랑 S의 함량(wt%), 그외 나머지 불순물원소들(ppm)을 알고싶어서 ICP-OES 분석을 한다면 Li2S가 대기중에 노출되면 산화가 엄청 빠르게 진행되는 물질인데 그럼 시료 전처리 과정에서 원래라면 Li2S 중에서 Li랑 S 함량이 99.9% 이상이였는데 (불순물 0.1%) 산화되면서 99.9%보다 낮아질 수 있는건가요??   궁금합니다 ㅠㅠ  

Styrene에 core-shell 구조를 만들기 위해 acrylic acid를 이용하여 carboxylated styrene을 합성하고 있습니다.   그런데 합성을 마친 후에 solution (colloidal) 상태에서 washing을 하기 위해 원심분리기를 돌려도 hydrophilic해서 모이질 않는데 이런 경우에는 washing을 어떻게 진행해야 하나요 ???    

안녕하세요 저는 현재 셔틀벡터를 이용해서 E. coli와 환경균주에서 분리한 Pseuarthrobacter에 사용되는  pSVJ21 vector를 이용해서 cloning을 하고있습니다.   여기서 제가 관련된 유전자를 transformation 한 뒤에 insert 양쪽 50 bp 씩 떨어진 곳에 primer을 제작해서 size를 확인을 완료한 상태입니다. (아래 confirm 사진) 여기서 이상한게 액체에서 키우면  cell 상태가 좋지 못하고 plasmid도 unstable해 지는것 같습니다.   셔틀백터를 처음 다뤄서 그러는데 제가 알지못하는 이유가 있는걸까요?