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BioLab 정래동 교수
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Q. mrs 배지 유산균 배양 질문드립니다.
안녕하세요 실험을 준비하고 있는 학생입니다. 아는것이 많이 없어 최대한 조사하면서 공부하고 있는데 많이 막막해서 의견을 여쭤봅니다.. 저희가 시중에 판매하고 있는 유산균(분말, 캡슐 형태)을 활용해서 실제 썩힌 음식에서 채취한 식중독균을 억제할 수 있는지를 실험하고 싶습니다. 원래는 김치와 같은 식품을 쓰려 했는데 그 속에 유산균 말고도 다른 세균이나 등등이 영향을 줄 수 있다고 해서 시중의 최대한 순수한 유산균 가루를 쓰려고 합니다. (음식으로 해도 가능할까요?)   1. mrs 배지에 판매하고 있는 유산균 가루를 멸균수에 희석해서 도말해서 배양 2. 실제로 썩힌 음식을 멸균수에 넣어서 상등액을 일반 배지에 도말해서 배양 그리고 나서 디스크 확산법을 활용해 배양시킨 유산균이 일반 배지의 균을 억제하는지 확인을 하고 싶은데요...방법을 아무리 찾아봐도 정확히 모르겠습니다 ㅠㅠ Q. 1)여기저기 찾아보니까 mrs 배지에 유산균을 배양시키고 원심분리기 를 이용해서 상등액만 사용해라..는 말이 나오는데 액체 mrs 배지를 사용하는건가요..?? 배양액이 액체 상태의 mrs 배지인가요..? 2)배양시킨 유산균을 어떻게 액상으로 해서 식중독균에 실험하는지 잘 모르겠습니다. 3) 무균 상태 대신 알코올 램프로 대신해도 가능한가요? 4) 원심분리기가 없으면 가만히 오랜 시간동안 두고 상등액만 쓰는 건.. 너무 비과학적인 거겠죠?ㅠㅠ 5) 디스크 확산법에서 한 배지에 여러 유산균을 한 번에 여러 디스크로 테스트해도 되나요? 성장 억제 지대가 서로 막 겹치고 그렇진 않죠..?  너무나 기본적인 내용이라 죄송합니다...! 
회원작성글 생과공부  |  08.08
Q. live imaging
APC gene mutation 된 MACF10를 ctl 10A와 비교하여  b-catenin 의 nuclear translocation을 confocal로 live image 찍으려고 합니다. cell이 살아 있는 상태여야해서 fix는 안될 것 같은데 Ab가 nucleus안까지 들어갈까요? cell에는 damage 주지않으면서  Ab를 넣는 방법 뭐가 있을까요?   의견 부탁드립니다.
회원작성글 새슬  |  08.08
Q. HPLC retention time 및 wavelength 관련 질문
HPLC 관련 실험을 진행하고 있는 연구원 입니다. 관련 공부를 할려고 논문을 보다보니 식물 추출물 관련해서 두가지 다른 물질이 같은 retention time 을 가지고 다른 wavelength를 가집니다. 논문에서는 retention time과 wavelength를 기반으로 분류하였다고 되어 있는데 같은 부서의 연구원 분이 이 부분이 이상하다고 합니다. wavelength의 차이는 피크의 크기 차이만 생길 뿐이지 wavelength차이로는 다른 물질의 구분이 안되고 다른 물질의 구분은 retention time 만으로 한다고 합니다.  그리고 연구원 분의 말씀이 맞다면 retention time이 같은데 어떻게 다른 물질로 판단하는 기준이 뭔지 궁금합니다.  앞선 실험을 하셨던 여러 선배님들의 조언을 구합니다. 
회원작성글 막5  |  08.08
Q. 형광현미경
  96well plate 에 염색한 세포 깔아주고 여러 조건으로 실험 진행 후  형광 형미경 촬영시 한 샘플 당 대표이미지 4~5장 (10x 배율로) 촬영 후 형광 정도 정량하여 분석 진행하고 있는데요,  아무래도 전체 well 을 다 촬영하는 것이 아니라 분석이 주관적인 부분이 있는것 같습니다.    혹시 96well plate -1well 전체를 다 스캔하여 촬영하고 이미지를 얻을 수 있는 형광 현미경이 있을까요??    
회원작성글 jhd2800  |  08.08
Q. 어떤 protein의 E3 ligase가 밝혀져 있지 않았을 때 이를 찾아내기 위해 보통 어떤 step을 거치나요?
어떤 protein의 E3 ligase가 밝혀져 있지 않았을 때 이를 찾아내기 위해 어떤 step을 거쳐서 밝혀낼 수 있을까요?
회원작성글 Dozmal  |  08.08
Q. 유통기한에 따른 성분 변화
식품 일반 성분 분석 실험을 진행중인데요 유통기한이 짧은 식품의 경우 유통기한에 따라서 식품 일반 성분(조지방, 조단백, 회분, 수분, 탄수화물 등)의 변화가 있나요?
회원작성글 mgil48977  |  08.08
Q. 고등학교에서 바이러스와 균 관련 실험을 하려 합니다만 관련 분야의 지식이 부족합니다. 도와주세요
안녕하십니다. 혼자서 실험을 설계해보다 막히는 부분이 있어 도움을 청합니다. 제가 할 실험은 세균에서의 단백분해효소 억제제의 작용을 살펴보는 것 인데요, 여러가지 질문들이 있습니다. 1. 일반적인 고등학교에서 대장균을 배양하는 것이 가능할까요? 배양기 등 장비는 어느정도 갖춰져 있습니다. 혹 대장균이 불가능하다면 어떤 세균들로 대체할 수 있을까요? 2. 단백질분해효소억제제는 시중에서 전문 의약품 형태로만 판매하고 있는 것으로 알고 있습니다. 혹시 따로 추출하거나 구입하는 방법을 아시는지요? 3. 혹시 이와 관련된 선행 연구를 본 적 있으십니까? 실험 설계 과정에서 참고하려고 해도 없는 것 같아서요... 처음으로 실험을 구상해보는 거라 만만치가 않네요.. 많은 도움 부탁드립니다. 
회원작성글 아싸리고등학생  |  08.08
Q. muscle primary cell 분화 실험이 진행이 안됩니다.
chicken 다리 근육에서 얻은 primary cell입니다. sorting은 percoll로 진행하고 있는데요   differentation 실험중에 있는데 Hores serum를 10%, 5%, 2% 로 각각 처리하면서 최적화중에 있습니다. 다른 논문들을 찾아보니 재각각으로 처리하는 논문들이 많고 해서 다양한 농도로 진행하고 있었습니다.   그런데 문제는 P0 즉 바로 얻은 cell에서는 따로 HS를 안쓰고 FBS에서 분화가 자연적으로 발생하는데 P1에서 HS 및 FBS로 분화 유도를 하면 myotube가 형성되기 전에 cell들이 막이 생기면서 바닥에서 떠오르면서 공처럼 뭉치고 있는데 왜 그럴까요?  
회원작성글 정오  |  08.08
Q. fluorescence reader 시 black plate bottom 관련
이번에 ROS 측정을 하려고 protocol을 확인중에 black plate clear bottom을 쓰라고 되어있더라구요   근데 랩실에서는 막힌거만 있고, 현재까지 FL 측정시에 문제 없었거든요 suspension cell 가지고 실험할거라서 clear bottom으로만 측정해야하나요?   다른랩에서 하는 걸 보니, clear bottom을 막아서 측정하시는 분도 계시던데.. bottom reading 하는게 아니면 clear를 안써도 되는 건가요? plate의 종류 때매 너무 헷갈리네요
회원작성글 YeKy  |  08.08
Q. 고분자 석출 후 회수
안녕하세요, 최근에 새로 고분자를 합성하였는데요. 우선 DCM에 최대한 농축된 상태로 녹인 후 250 mL 메탄올에 dropwise로 첨가하여 석출시키고자 했습니다. 시간이 지나고 용액 색은 탁한 주황색이 되었고 벽면에 눌어붙은 것도 조금 보이는 것으로 보아 석출이 진행됐다고 판단했습니다. 그래서 감압여과로 필터 위에 부어서 석출된 고분자를 회수하려고 했는데요.. 처음에 Chmlab, MTF/H Grade, PTFE hydrophobic membrane filter, pore size 0.2 μm, diameter 47 mm 멤브레인 필터를 이용했습니다. 여과액이 노란색인 걸로 보아 여과가 잘 진행되고 있구나 했는데 여과액이 몇방울 떨어지고 얼마 안가 여과가 진행되지 않는 겁니다. 한참 기다려도 너무 느리길래 감압을 풀고 부어놓았던 용액을 다시 회수한 후 필터의 상태를 보니 필터 위에 뭔가 걸러져서 쌓여있다기 보다는 주스나 찌개국물을 엎은 종이처럼 필터 표면에 뭔가 흡착된 것처럼 보였습니다. 아마 그래서 필터의 pore를 모두 막은 것으로 추정하고 있습니다. 혹시 pore size가 문제인가 하여 더 큰 1~2 μm pore size로 시험해봤는데, 이 경우에는 여과액이 용액과 같은 탁한 주황색으로 떨어지고 이마저도 얼마 안가 다시 막혀버립니다. 이러한 상황에서는 원심분리기를 이용하는 것이 답일까요? 만약 그렇다면 원심분리 후에는 똑같이 멤브레인 필터로 감압여과 한 후 메탄올로 씻어내면 될까요?
회원작성글 크랑  |  08.08
Q. AVPR2 유전자 점돌연변이 제거 모의 실험 오류 확인
고등학생입니다. 신장성 요붕증의 원인인 AVPR2 유전자의 점돌연변이를 잘라내는 모의 실험을 계획했는데요.  10-23 DNAzyme을 이용해 제거하고 AVPR2 유전자의 점돌연변이 부분을 제거하여 제거가 잘 되었는지 확인하는 실험입니다. AVPR2 유전자 돌연변이로 280번째 아미노산이 치환되어 신장성 요붕증이 발생한 것이므로 ncbi에 들어가 정상인의 280번째 아미노산을 확인한 정상인과 신장성 요붕증 환자의 염기서열을 비교해 돌연변이 위치를 파악합니다. 그 후 이 돌연변이만의 10-23 DNAzyme를 설정하고 제대로 절단됐는지 확인하고자 AVPR2 유전자의 점돌연변이 mRNA 절단 여부를 판단합니다. 잘라낸 부분의 mRNA를 증폭시키기 위한 primer를 설정하고 전기영동의 각 Lane에 대조군인 AVPR2 유전자의 돌연변이 mRNA, AVPR2 유전자의 돌연변이로 인한 신장성 요붕증 환자의 DNA, 증류수를 넣는다고 가정했습니다. 실험군으로는 직접 설정한 DNAzyme을 이용해 돌연변이를 제거한 환자의 mRNA를 넣고 프라이머 등을 넣는다고 가정했으며 RT-PCR 후 전기영동을 통해 증폭 여부를 판단하여 가설의 성립 여부 확인으로 모의 실험이 종료됩니다. 이 모의 실험에서의 오류가 있을까요??
회원작성글 꺅꺅  |  08.08
Q. 젖당 오페론 실험
고등학교 학생인데 젖당 오페론이 작용할 때와 억제될 때의 차이를 농도에 따라 비교해보려고 합니다 원래 대장균은 젖당이 아니라 포도당을 에너지원으로 쓰지만 포도당이 없을 때 오페론이 작동하여 젖당을 분해하는거니까 포도당만 있는 배지와 젖당만 있는 배지에 각각 대장균을 배양하여 젖당 오페론의 작용을 확인하고 두 에너지원 중 어떤 것이 더 효율적인지 실험을 통해 확인하고 싶습니다 (아마 포도당이겠죠?) 만약 포도당만 있는 배지에 있는 대장균과 젖당 대장균의 콜로니를 평판계수법으로 비교하면 더 콜로니가 많은 쪽이 에너지원으로 효율적이라고 볼 수 있는가요?
회원작성글 luxxuria  |  08.08
Q. 액체 배양 진탕배양과 정치배양
바실러스 튜링겐시스와 백강균을 액체 배양 하려고 하는데요.   진탕배양과 정치배양이 있잖아요   이 둘 중 어느 배양이 더 빠르고 안전한가요?   모두 호기성 미생물로 알고 있는데   호기성은 진탕배양이 맞다고 하는데    정치배양은 아예 안 되나요? 시간이 오래걸려서 안 되는건가요?   그럼 정치배양을 할 때 걸리는 시간을 어느정도 인가요?   진탕배양을 하면 또 미생물의 성상이 변한다는 말도 있어서   정확하게 알고 싶습니다ㅠㅠ
회원작성글 afffdfdee  |  08.07
Q. immunization 시 조건
안녕하세요 면역원으로 쓸 항원을 정제 중입니다. 근대 이 항원의 insolubility가 높아서 pbs 나 carbonate같은 buffer에 dialsysi 하면 침전으로 다 떨어져서 정제가 안됩니다. 그래서 dialysis buffer에 L-glutamic aicd와 L-arginine을 넣어서 solubility를 높여보려고 하는데요 문제는 이 항원 정제의 최종 목표가 면역이다 보니 dialsysi 에 저 두 amino acid가 있어도 면역에 문제가 없을지 고민입니다. L-arginine의 경우 면역용 buffer에 쓰는 논문을 하나 찾긴 했는데 glutamic acid의 경우 관련 논문을 찾지 못해서 혹시 면역 경험이 많으신 분들 중에 아시는 분이 있는지 질문 드립니다. 감사합니다!
회원작성글 pico  |  08.07
Q. 생쥐 행동실험
학부생 인턴입니다 Atg7-NSC cKO 마우스한테 인지와 기억을 확인할수있는 행동실험을 해야하는데 어떤 실험을 해야할까요?
회원작성글 우노  |  08.07
Q. LightCycler 96 software
안녕하세요. 최근에 사용하던 ABI7500 PCR 기기가 폐기되면서 급하게 Roche사의 LightCycler 96을 사용하게 되었는데 해당 기기의 소프트웨어를 도대체 어디서 구해야 하는지를 모르겠어요....ㅠ   혹시 소프트웨어 구매처 혹은 다운로드 링크를 어디서 얻을 수 있는지 아시는 분 계실까요? 부탁드립니다ㅠㅠ   소프트웨어를 구해야 조건 test를 끝마칠수가 있어서요ㅠㅠ
회원작성글 lyg  |  08.07
Q. 중금속시험 PPM 계산 질문좀요
1. STD1,STD2,SMP를 만드는 시험법에서 3개 각각에 일정 농도의 검액 15mL를 넣고 (STD1, STD2에만 표준이온 일정량을 넣고) 물로 희석해서 25mL를 만드는 시험법이 있는데 표준액의 ppm을 검액의 농도 x mL 해서 검체의 mg수를 총 희석량인 25mL로 나눠줘서 ppm을 구했는데, 그렇게 하면 안되고 표준이온의 mg을 검체의 mg로 나눠주고 백만분율을 곱해줘서 계산해야 한다고 하더라고요. ppm이 백만분율로 계산하는법과 mg/L로 계산하는법이 있는건 아는데 어떻게 구분해서 사용해야되는건가요?? 2. 그리고 중금속 ppm이랑 일반물질 ppm이랑 계산하는 방식이 다르다는데 이건 무슨소린가요
회원작성글 Brleua  |  08.07
Q. Antigen retrieval 전자레인지
안녕하세요! 지금 조직 염색 하려고 하고 있는데   슬라이드에 조직 붙인 다음에 Antigen retrieval 어떻게 진행하시나요?   큰 비커에 슬라이드를 다 넣고 전자레인지에 돌리라고 많이 말씀하시는데 ㅠㅠ 혹시 슬라이드가 겹쳐도 되는 건지.... 걱정 되어서요.. 그리고 전자레인지로 antigen retrieval 할 때 저는 해동 5분씩 4-5번 (총 20-25 분)하는데 끓진 않고 뜨거운 정도인데 괜찮나요? Abcam protocol 보면 boiling하라고 되어있는데 슬라이드 랙(carrier)에 꽂아서 돌리다 보니 버퍼는 아낄 수 있지만 끓으면서 2-3분만 되도 다 증발되어서 ㅠㅠㅠ    의견 부탁드립니다 ㅎ
회원작성글 뚠뚜딘  |  08.07
Q. Mouse Brain Paraffin section IF staining 섹션 두께
안녕하세요!   현재 mouse brain에서 IF staining을 시도하고 있는데요..   먼저 brain은 PFA 고정 후 Parrafin으로 embedding 하였습니다. 선배랑 제가 따로 section을 진행하였고, sample 모두 받아서 제가 IF staining을 하였습니다. 선배는 5 um으로 section을 하였고 저는 8-10 um으로 section을 진행하였는데요. 일반적으로 parrafin section의 경우에는 5-8 um로 많이 한다고 하더라구요. IF staining 결과 (IF staining 모두 한번에 진행) 선배 slide에서는 signal 이 굉장히 약하고 specific 하게 staining이 되지 않았습니다(거의 staining이 안 되었다고 봐도 무방). 조직 염색의 경우 section이 얇으면 얇을 수록 resolution이 좋고 깔끔하게 data가 나온다고 생각했는데 조직에 따라서는 두꺼울 수록 결과가 잘 나오는 경우도 있나요?  제가 8-10 um로 section을 다시 해서 IF staining하는 게 trouble shooting 이 될지 궁금합니다. 모든 step은 똑같은데, section한 사람만 다르니 ㅠㅠ..   그리고 paraffin section의 경우 8-10 um가 mouse brain 혹은 lung 보기 너무 두꺼운지도 의견 부탁드립니다 ㅎㅎ
회원작성글 뚠뚜딘  |  08.07
Q. 유산균 접종 발효시킨 우유 배지 배양
1. 유산균을 37도~40도에서 4시간동안 중탕으로 증식시킨 우유를 희석해서 mrs 배지에 spreading 평판 도말법을 이용해서 도말하고 뚜껑 닫히는 부분에 진공그리스를 바른 락앤락에 배지를 넣고 48시간 기다릴 계획입니다. 쓸 예정인 동결건조 유산균 제품은 유산균 100%로 혐기성, 호기성 유산균이 둘 다 있다는데요 제가 알기론 혐기성은 산소를 차단해줘야 하고 호기성은 산소 있어도 괜찮다고 알고있는데 진공그리스 발라서 산소 차단해줬으니까 배양 가능할까요… 2. 락앤락에 진공그리스를 어떻게 얼마나 무엇으로 발라야 할까요 정확하게 알 수 있었으면 좋겠습니다 3. 우유에 유산균 넣어서 요거트 만들 때 꼭 일반우유를 사용하라고 하는데 칼슘 우유나 저지방 우유 멸균 우유 유당분해우유 등은 발효가 잘 안된다고만 나와있고 그 이유 원인은 무엇인지 찾을 수가 없어요. 잘 아시는 분 설명해주시면 정말 감사하겠습니다. ㅠㅠㅠ 4. 유산균을 접종한 직후의 우유와 4시간 중탕 후의 우유를 도말할 계획인데 나중에 colony 수를 세어서 어떤 그래프나 표로 비교 분석하는 게 좋을까요 탐구의 목적은 유산균이 가장 많이 증식한 우유와 가장 증식하지 못한 우유를 찾고 그 우유의 다른 우유와의 차이가 되는 성분이 뭔지 조사해서 증식에 도움이 되는/억제가 되는 요소를 예측? 하려합니다.
회원작성글 무지개빛  |  08.07
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