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BioLab 장재봉 교수
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 카테고리: 전체 > Immunology > etc.
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Q. Dynabeads로 T Cell activation 후 CD25 확인 방법
안녕하세요. T cell activation 실험 중인 연구원 입니다.   Dynabeads로 Activation 시킨 후에 CD25와 PD-1을 보려고 하는데. 궁금한 것이 CD3+ 를 먼저 잡고 CD4/CD8+ Cell을 보는 것입니다. CD3/CD28에 의해 CD3가 Block 되어 있는 상태라고 예상이 되는데 여기에 CD3 항체 염색해서 보는 것이 맞은지.. 아니면 그냥 CD3+를 잡지않고 바로 CD4+/CD8+로 분리해서  CD25등을 보는 것이 맞을까요?
회원작성글 지구별1호  |  2021.06.09
Q. antigen presentation efficiency를 측정하는 방법
BMDC를 이용해 cancer immunotherapy 연구중인 대학원생입니다. antigen presentation을 위해 antigen을 treat했을 때 surface marker 발현 정도나 cytokine level 측정을 통해 DC가 maturation 된 정도를 측정하는 방법 이외에  antigen이 실제로 DC와 얼마나 결합하는지나 그 antigen presentation의 효율성을 정량할 수 있는 방법이 있을까요?  답변 부탁드립니다.  감사합니다. 
회원작성글 여보세요  |  2021.06.08
Q. CSF 와 peripheral blood 의 B 세포의 유래 확인방법
안녕하세요,  문의 드립니다.    자가면역질환 환자의 뇌척수액(cerebrospinal fluid, CSF) 샘플에서,  Ig secreting B cell을 게이팅 해서, 얻은 것이 ,  peripheral blood 에서 기원한것인지, 아닌지 확인할 수 있는 방법이 있을까요?    질문의 구체적이지 않아서, 죄송합니다만,  개인적으로 찾아본 것으로는 Immunoglobulin repertoire 분석하는  식으로 비교하는 논문들은 있는데,  이게 제가 할 수 있는 실험인지 모르겠네요.       
회원작성글 Fargo  |  2021.06.01
Q. mouse Bone marrow derived dendritic cell
안녕하세요 선생님들. 저는 마우스의 골수에서 세포를 분리하여 BMDC로 분화시킨 후 LPS를 처리하여 나타나는 surface molecule marker를 flow cytometry를 통해 분석하려고 합니다. 실험은 골수를 분리한뒤 GM-CSF 20ng/ml이 들어간 배지를 이용하여 3일, 6일째 배지를 adding해준 뒤 9일째에 suspension cell을 분리하여 3*10^5 cell/ml로 seeding해주었습니다. 그 후 LPS를 10ng/ml로 처리한뒤 세포를 걷으려고 하는데 immature BMDC에 stimulation이 되었는 지 plate 바닥에 붙은 부착세포형태로 변해있었습니다. 위 세포를 취득하여 Flow cytometry를 하려고하는데 Trypsin-EDTA를 사용하거나 Cell scraper를 이용하면 세포에 물리적 손상이 가해져 원하는 만큼의 세포양이 나오지 않을것같은데요.. 혹시 실험방식에 문제가 있는 건지, 일련의 과정이 나타나는 현상이 자연스러운건지 궁금합니다. 바쁘신와중에 도움주셔서 감사합니다.  
회원작성글 참치왕  |  2021.05.31
Q. facs dead cell도 형광 염색이 되나요?
안녕하세요 석사 1년차 대학원생입니다. 지금 실험한 세포를 가지고 FACS 찍고 분석중입니다. 맨 처음 ssc-a, fsc-a로 live cell, dead cell을 구분한다고 하는데, fsc-a에서 50k 밑으로는 dead cell이라고 알고 있습니다. 그런데 dead cell이면 dye 염색이 되지 않아서 gating해도 다 negative로 들어가는 것 아닌가요? 20k정도부터 잡아서 gating 해봤는데 50k부터 잡은 것보다 염색 되는 cell들이 더 많았습니다.  그리고 논문 찾아보면 50k 밑으로 lymphocyte 잡는 사람들도 있던데 어떤게 맞는지 궁금합니다.  
회원작성글 Crea  |  2021.05.15
Q. Plasma 보관시 DMSO는 안 쓰나요?
아............멘붕입니다.  혈액으로 DNA 뽑는 것 밖에 안해봐서 plasma를 일반 cell 얼리듯이 DMSO를 넣고 질소탱크에 보관해두었는데요... 어디를 찾아봐도 그렇게 하라는 얘기가 없네요.  이거 이제 못 쓰는건가요? ㅜㅜ 
회원작성글 pjy25n  |  2021.04.29
Q. 면역학 관련 질문 드려요..
제가 논문을 읽던 와중 어떤 특정한 암세포의 항원에 대해 binding affinity를 확인했다고 하는데 혹시 binding affinity를 확인 할수 있는 방법이 뭐가 있나요..? 
회원작성글 w3749  |  2021.04.17
Q. 면역학 관련 질문드립니다(MHC Class).
안녕하세요. 면역학 관련해서 공부하다가 모르는게 있어 여기다가 여쭈어봅니다.. 사진에서 보시다시피 항원이 수지상세포에 들어오면 MHC Class가 이를 인식하고 항원을 밖으로 제시하게 되잖습니까? 몸에서 해로운 항원이 들어와 수지상세포가 인식해서 면역반응이 일어나게 되는건데 몸에 해롭지 않은 항원이 들어 오게되거나 혹은 해로운 항원과 비슷하지만 인체에 유해하지 않은 항원이 들어올시에는 어떻게 구별하는지 궁금합니다.. 혹시나 만약 이글이 문제가 된다면 바로 지우겠습니다!!
회원작성글 w3749  |  2021.04.14
Q. DAB과 AP로 Double stainig을 해보려고하는데 질문이 있습니다.
저번에 질문을 올렸는데 넘 장황하기도 하고 굳이 그렇게 해야했나싶어서 다시 좀 더 공부해서 써봅니다.. 1. 먼저, Endogenous enzyme blocking 과정인데, DAB의 3% 과산화수소수와 AP의 1mM Levamisole을 같이 섞어서 진행해도 될까요? 아니면 과산화수소수 먼저 5분 처리하고 3~4차례 Wash 후 Levamisole을 처리하는게 나을까요?   2. 1차 안티바디까지 같이 섞어서 처리하게 되면 나중에 2차 안티바디나 ABC-AP Kit 처리 후에 Non-specific하게 많이 잡힐 것 같은데, A 1차 안티바디 처리 후 > Biotinylated 2차 안티바디 처리 후 > ABC kit 사용 후 > DAB 발색 > Wash 후 > B 1차안티바디 처리 후 > AP tagging 2차 안티바디 처리 후 > AP Kit 사용 후 > AP 발색 (Fast red로 볼 예정입니다. Hematoxylin으로 핵을 염색할꺼라...) 후 > Wash 하면 될까요?   아, 참고로 Frozne section을 Free-flaoting방식으로 염색하느라 나중에 Slide glass에 붓으로 붙이는 작업을 거칩니다. AP 액체가 혹시 너무 진한 색을 띄어서 Free-floating작업이 번거로우면 DAB까지 발색 후, Glass에 붙이고 Humidchamber를 이용해서 그 내부에서 항체반응을 진행시키려고하는데 그렇게 해도될까요?
회원작성글 토라  |  2021.04.07
Q. 논문 용어 첨부파일
이번에 입학하여 논문을 읽다가 막막함을 겪고 있는 학생입니다. 논문 중 MFI 가 무엇을 의미하는지 궁금하여 사진과 함께 질문 올리게 되었습니다. 아시는분이 계시다면, 답변해주시면 정말 감사하겠습니다ㅠㅜ
회원작성글 leeani  |  2021.04.06
Q. 그람염색으로 세균의 항생제내성을 확인할수있나요?
그람염색을 통해 세균의 일반적인 모양?을 관찰할수있다고 알고있는데요,  항생제를 투여한 후 내성이 생긴 세균을 관찰하였을때 모양변화 등을 관찰할수있나요? 그 모양의 변화로 무엇을 알수있을까요??
회원작성글 amethyst33  |  2021.04.04
Q. immunohistochemistry와 histology가 같은 건가요? 다른 건가요?
  안녕하세요. 석사 1년차인 대학원생입니다. 이번에 저희가 mouse의 pancreas로 histology를 찍는다고 하는데, 찾아보니 immunohistochemistry 실험이랑 방법이 같더라고요 저희가 하는 실험이 immunohistochemistry 인건지 아니면 histolgy라는 실험은 IHC와 다른점이 있는지 궁금합니다!  
회원작성글 Crea  |  2021.03.15
Q. 포도상구균 UV처리 실험 질문
학교에서 소논문으로 포도상구균을 폴리에스터, 면 원단에 배양하여 UV처리해 그 효율을 알아보는 실험을 진행하려 합니다.  그런데 아직 실험에 미숙한지라 몇 가지 의문이 있는데, 먼저 폴리에스터 원단은 열에 약하다고 들었는데, 그럼 autoclave 말고 멸균을 할 수 있는 방법이 무엇이 있나요? 그리고 두 번째로 UV를 쬐이는 실험 전과 후의 원단의 포도상구균 분포와 개수?를 확인해야 하는데, 그것도 어떻게 구하는지 잘 모르겠습니다.(먼저 배지에 포도상구균을 배양한 후 멸균한 원단에 접종하려 하는데, 접종할 균의 양을 조절하는 것도 모르겠습니다..) 친절한 답변 기다리겠습니다..!
회원작성글 생실초보  |  2021.03.06
Q. 수지상세포 maturation시에 사이즈가 작은 peptide말고 fibrillary form을 사용하는 이유가 있을까요?
immature DC에 antigen 처리하여 maturation DC를 만드려고 합니다. amyloid beta(42)를 사용하려고 하는데 abeta 42를 그냥 사용하는 것과 fibrillization 시킨후에 하는것에 차이가 있을까요.? 알츠하이머가 fibrillization된 amyloidbeta가 질병의 원인(?)이 되니 수지상세포에 항원제시시에도 fibrillization한 amyloid beta를 사용하는것이 더 좋아서 그런걸까요..?  단일 peptide와 fibrillization에서 APC에 antigen capture에 차이가 있을런지요...
회원작성글 바랑  |  2021.03.04
Q. permeability 의 정확한 의미가 궁금합니다.
안녕하세요. Blood brain barrier 관련하여 permeability 라는 용어가 있는데, 이 용어의 의미를 투과성으로 해석하는 것이 맞는지 확인받고 싶어 글을 올립니다. 제가 해석한대로 해석하면 되는 걸까요? 아니면 다르게 해석해야 하나요?
회원작성글 자몽맛남  |  2021.02.25
Q. 건선 유도에 대해서 궁금합니다!
건선유도를 할 때 5% aldara cream을 이용하는 것으로 알고 있는데, 귀에 건선을 유도하고자 할 때 보통 어떻게 발라주는지 알 수 있을까요?  그리고 1회 도포시, 어느정도의 양을 도포하는지 알 수 있을까요?  
회원작성글 건선실험궁금  |  2021.02.25
Q. THP-1 cell culture 질문 ..
THP-1 cell 키우고 있습니다.  media는 RPMI+10%FBS(heat-inactivation)+0.05mM 2-mercaptoethanol 사용하고 있습니다. 세포주은행에서 새로 받은지 얼마 안되었는데 제가 알기로 THP-1은 뭉치면 상태가 안좋은것으로 알고있는데  현미경으로 보면 포도송이처럼 뭉친 애들이 많은 것 같습니다.   seeding은 T75에 3*10^6/20ml 로 seeding 하는데 seeding number의 문제 일까요 ? 뭉쳐서 자라는것 해결할 방법이 있나요 ?  culture해보면 95%정도 viability 입니다.
회원작성글 qwertt  |  2021.02.19
Q. B16F10, B16F1, B16-OVA 차이가 뭔가요?
셋다 B16 계열인 것 같은데 세 암의 차이가 뭔지 궁금합니다. 같은 암인데 갖고 있는 antigen 이 다른건가요?
회원작성글 ykown  |  2021.01.14
Q. 희석 배수 문제 질문입니다
원액의 100mg/ml 농도 항체 튜브에서 1:1000으로 1번 항체를 10ml 만들고 거기에서 다시 덜어 1:20000으로 2번 항체를 10ml 만들었습니다. 1번과 2번 항체를 만들기 위해 필요한 이전 튜브에서 덜었던 항체의 양은 얼마일까요..? 그리고 2번 튜브 속 항체의 농도는 얼마가 될까요..?ㅠㅠ
회원작성글 just7758  |  2021.01.14
Q. IHC staining에 관련해 질문이 있습니다. 첨부파일
IHC에 대해서 공부를 하다보니 staining과 관련해서, 간접적인 방법으로는,,, single staining으로 하는 방법(DAB)과 double staining으로 하는 방법이 있다는걸 알게되었습니다. (IF 방법 X) 보통은 IHC할때 double staining하지않고 single staining으로 진행한다고들 하는데 도대체 왜 그런건가요?? double staining으로 한번에 두개를 보는게 더 좋을것같은데 왜 굳이 single statining으로 진행하는건지 아무리 생각해도 잘 모르겠습니다..... (double staining할때 쓰이는 효소들 색이 흑색(니켈), 갈색(DAB), 파란색, 적색, 보라색 등등이 있는걸로 알고있습니다!)  
회원작성글 뿡빵스  |  2021.01.08
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