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Q. astrocyte, microglia
astrocyte 또는 microglia 같이, 뇌와 관련된 신경 또는 면역세포 연구에 관심 있는 석사생입니다. 질문은 다음과 같습니다. 1)astrocyte, microglia cell들은 굉장히 예민하여, culture 자체가 어렵다고 들었습니다. self activation이 일어나고, contaim에 예민하다는데... 다음과 같은 특징들이 왜 culture를 할때 힘든건지, 추가적으로 위의 cell들의 특이사항들을 알고 싶습니다.   2)astrocyte와 microglia cell line 추가적으로 marker들을 알고 싶습니다. 현재 정보 수집 중에 있는데 찾는게 쉽지 않네요 ㅠㅠ 3)위의 cell들 외에 뇌와 관련된, 실험에 용의한 cell이 있다면 추천 부탁드립니다. 저는 운동에 따른 위 cell들의 변화와 관련된 연구를 계획 중 입니다. 석사 신입생이라 아직 많이 부족합니다. astrocyte, microglia와 관련된 어떠한 조언이든 감사히 듣겠습니다! 
회원작성글 척척석사_  |  05.28
Q. macrophage therapy 관련 질문드립니다.
안녕하세요. macrophage therapy에 관심이 있어 질문드립니다. 1. 사람을 기준으로, 혈액에서 macrophage를 분리하고 배양하여 다시 주입 시 GVHD가 나타날까요? (autologous) 2. 사람을 기준으로, THP-1(human monocyte cell line)을 주입하면 GVHD가 나타날까요? 3. 사람을 기준으로, Raw264.7(mouse macrophage cell line)을 주입하면 GVHD가 나타날까요? 4. 쥐를 기준으로, THP-1이나 사람 혈액에서 분리한 macrophage를 주입하면 GVHD가 나타날까요? (vein injection 기준으로 여쭤봅니다) 논문들을 찾아봐도, 어떤 논문은 그렇다, 어떤 논문은 아니다 라고 상이한 내용이 있어, 경험이 있으신 선생님께 부탁드리겠습니다. 간단하게 네, 아니요 라고만 해주셔도 감사하겠습니다.
회원작성글 모자  |  05.23
Q. IP 후에 왜 Western blot으로 확인을 하는건가요?
학부생인데 궁금증이 생겨서 질문 드립니다 왜 면역침강후에 western blot을 하는지 이유가 궁금합니다  구글링을 해도 그냥 ip후에 동정을 위해 western blot을 사용한다고 하는데 구체적인 이유가 궁금합니다   
회원작성글 숨썬  |  05.22
Q. Confocal dish 사용법을 모르겠어요
안녕하세요 세포를 Confocal dish에 배양을 해서 Confocal을 찍으려고 합니다. 논문에서 Protocol을 보고 배우는 중인데 Confocal dish를 사용하면 coverslip으로 안덮고 찍으면 되는건가요??? PFA로 고정 후 DAPI 처리 후 그냥 찍으면 되는건가요??
회원작성글 쩝쩝석사과정  |  05.20
Q. protein solubility test
안녕하세요 최근에 solubility test로 단백질의 folding과 inclusion body에 관해 공부중입니다. 대장균에서 발현하는 단백질이 soluble한가 insoluble한가를 연구중인데 이 단백질이 나중에 항원으로 쓰이려면 왜 soluble해야 한가요? folding 때문이라고만 생각되는데 정확하게 solubility test를 하는 이유를 모르겠어요...
회원작성글 보노보노95  |  05.19
Q. elisa standard 흡광도에 튀는 값이 있습니다ㅠㅠ
안녕하세요.   cusabio의 chicken Estradiol ELISA Kit를 이용하여 competitive elisa를 진행하였는데 결과에 이상이 있어 문의드립니다.   standard 0~5까지 각각의 농도가 0, 40, 100, 200, 400, 1000이라고 명시되어 있습니다.   그런데 흡광도 측정 결과가 0 ->5의 순서대로 커지는 것이 아니라 중간에 튀는 값이 있습니다.   실험에 오류가 있나싶어 다시 진행해보아도 똑같습니다.   흡광도 결과는  첫번째 했을 때 s0: 2.467 / s1: 1.538 / s2: 1.137 / s3: 0.846 / s4: 1.124 / s5: 0.648 두번째 했을 때 s0:1.541 / s1: 1.468 / s2: 1.461 / s3: 1.204 / s4: 1.288 / s5: 0.771 입니다.   1. 이와 같이 다른 standard는 값이 그나마 괜찮은 듯 싶은데 s4값만 유독 튑니다. 이유가 무엇일까요?   2. 키트를 보니 expiration date이 지났던데 그래서 그런 걸까요? 똑같은 회사의 다른 키트(progesterone, testosterone)도 기한이 지났지만 standard 결과는 특이점이 없었습니다ㅠㅠ   3. 이렇게 튀는 값을 포함하는 standard를 이용해 샘플의 농도를 측정해도 유효한 결과라고 볼 수 있을까요?   아직 실험이 익숙치 않아 피펫팅에 오류가 커서 전부 1차로 딸깍 소리가 날 때까지만 로딩했습니다.
회원작성글 notorious..  |  05.18
Q. Antibody 작용원리 질문
면역세포를 stimulation하는 antibody가 있고 Depletion하는 antibody가 있는데 무슨차이인가요?? 예를들어 t cell을 culture하는데 anti cd3가 발려있는 culture plate를 사용합니다 이경우 t cell stimulation용이라 하더군요 그런데 in vivo 상에서 nk를 depletion할때 anti-nk1.1을 사용한답니다 그렇다면 어떤때는 stimulation이고 어떤때는 depletion인가요 Anti nk1.1이 발린 culture plate에서 nk cell을 키우면 다 죽는다는건가요 stimulation된다는 건가요 각각의 작용원리가 다른듯한데 구조상 차이가 있는걸까요 어떤 원리의 차이에 의함인지 궁금합니다
회원작성글 Damien  |  05.18
Q. RPR 과 VDRL 실험 차이
두가지 실험 모두 매독을 검사하는 실험인데 왜  VDRL만 보체를 불활성화 시키는 과정이 필요한지 궁금합니다!!  
회원작성글 해성이  |  05.17
Q. FACS antibody staining
FACS antibody staining 과정에서 dead cell staining을 먼저 한 뒤 surface staining을 하고 나서 fixation, intracellular staining을 하는 것으로 알고 있습니다. 그런데 왜 순서를 꼭 이렇게 해야하는 건가요??
회원작성글 나의라임오렌지나무  |  05.13
Q. IHC-P dab 염색 질문 첨부파일
파라핀 섹션으로 dab staining 을 하는데요~ 첨부사진과 같이 얼룩이 나타나는 현상이 있습니다. 처음에는 signal 인줄 알았는데, control tumor 조직이나 약물처리 tumor 조직이나 antigen retrieval 을 하나 안 하나 안티바디의 종류에 상관없이 무작위로 나타났다가 없다가 하더라구요.  wash 문제같기도 한데 똑같은 날 똑같은 tissue, 똑같은 protocol 로 염색을 해보면 2장중에 1장은 저런게 나타나는 경우가 자주 있습니다. 혹시 이유를 아시거나 이 문제를 해결하기 위해서 조언을 부탁드리겠습니다. 저만 이런 상황을 겪은건지도 궁금하네요
회원작성글 철철대왕  |  05.12
Q. competitive elisa standard absorbance으로 엑셀 standard curve 및 샘플 농도 계산
안녕하세요.   competitive elisa kit를 이용하여 실험한 결과,  standard의 농도는 0, 0.15, 1, 5, 20, 70입니다. 흡광도는 1.050, 0.825, 0.598, 0.336, 0.219, 0.130입니다. kit 설명서에는 4-PL curve fit으로 그리던지 y축의 농도에 대해 x축의 각 standard 흡광도를 표시하여 그리라고 합니다. 데이터는 농도의 log versus 흡광도의 log를 표시함으로써 선형화될 수 있다고 합니다.   1. standard의 흡광도와 농도를 이용하여 엑셀에서 그래프를 그릴 때 지수, 선형, 로그, 다항식 중 어떤 것으로 그려야 할까요? 만약 로그로 해야 한다면 흡광도와 농도를 모두 로그형태로 바꾼 후 그려야 하나요?   2. 흡광도와 농도를 로그값으로 변경하니 대부분 샘플의 값이 음수로 바뀌고, 다항식(4차 또는 5차)로 그리면 농도 값이 터무니없이 커지거나 작아집니다..이유가 무엇일까요?   3. 유튜브에서 competitive elisa 그래프를 그릴 때 1/흡광도로 변경해서 엑셀로 그래프를 그리던데 이 방법이 맞는 건가요?  혹시 맞다면 이렇게 바꿔주는 이유는 무엇인가요?   4. 원래 reader기에서 흡광도 측정 후 농도까지 계산해주는 기계인데 실수로 인해 standard의 농도값을 잘못 입력하였습니다. 이 경우 샘플의 농도를 계산하려면 어떻게 해야할까요?   5. 마지막으로 sigmaplot 14.5를 이용하여 standard 흡광도와 농도 및 샘플의 흡광도를 통해 샘플의 농도를 구할 수 있나요? 매뉴얼을 찾아보아도 어떻게 구해야 하는지 감이 잡히지 않습니다ㅠㅠ   많은 답변 부탁드립니다..
회원작성글 notorious..  |  05.12
Q. [Western blot] antibody 구매할 때
Polyclonal antibody를 구매할지 monoclonal antibody를 구매할지 선택 기준같은게 있나요?
회원작성글 experiment  |  05.03
Q. 조직염색 커버글라스 씌운후에
현미경 확인을 했는데 염색이 많이 씻긴건지 시간이 충분하지 않았는지 확신할 순 없지만 염색이 제대로 되지않았습니다.. 자일렌에 담궈서 마운팅 미디엄 녹여서 커버글라스 제거하고 다시 염색이 가능할까요? 콩고레드염색을 진행했고, 카운터스테이닝은 헤마톡실린으로 진행했습니다ㅠ
회원작성글 오제이  |  05.03
Q. 아토피 실험 β-hexosaminidase에서 BSA-DNP. DNP IgE를 사용하는 이유가 뭔가요??
RBL-2H3 cell로 아토피 실험 β-hexosaminidase 실험을 진행하려고 하는데요 논문을 찾아봐도 다 DNP가 붙어있는 BSA-DNP. DNP IgE를 사용하더라구요,,  BSA-DNP. DNP IgE를 사용하는 이유가 뭔가요??
회원작성글 디비아쥐  |  05.01
Q. ELISA 실험결과 standard를 이용해 샘플의 농도를 어떻게 구하나요?
안녕하세요. competitive ELISA kit(progesterone)를 이용하여 standard와 chicken serum으로 실험하였습니다.   그러나 standard의 농도를 잘못 표기하여 chicken serum의 농도가 부정확하여 다시 구하고자 합니다.   standard의 경우 농도 0일 때 흡광도 평균 1.050 농도 0.15일 때 흡광도 평균 0.825 농도 1일 때 흡광도 평균 0.598 농도 5일 때 흡광도 평균 0.336 농도 20일 때 흡광도 평균 0.219 농도 70일 때 흡광도 평균 0.130   이었습니다.(농도와 흡광도가 반비례하여 competitive elisa라고 생각했습니다)   이 때, 만약 chicken serum의 흡광도 평균이 0.759인 경우 농도는 어떻게 구할 수 있나요?
회원작성글 notorious..  |  04.28
Q. ELISA(chicken serum) 결과 해석 좀 도와주세요.. 첨부파일
안녕하세요.  CUSABIO사의 kit를 이용하여 standard와 측정하고자 하는 chicken serum(Male, 1/10dilution Male, Female, 1/10dilution Female)을 이용하여 ELISA를 진행하였습니다.   참고로 sheet에 competitive enzyme immunoassay technique이라고 써있는 걸 보아 competitive ELISA로 유추하였습니다.    MPM6.exe 프로그램을 이용하여 흡광도를 측정하였으나, 실험결과를 해석하는 데 어려움이 있어 도움을 구하고자 합니다. 첨부파일 확인 부탁드립니다. 1. report 상단에 4-parameters Fit이라고 하여 나온 식은 어떻게 나오게 된 것이며, X, Y, A, B, C, D 값은 어떻게 구해진 것인지 궁금합니다.   2. chi2와 RMS는 무슨 의미인가요?   3. standard report에서 말하는 Std#, Conc, SD, %CV은 무엇인가요? 만약 %CV가 변동계수를 뜻하는 것이라면 샘플 결과에는 왜 안 나오나요?   4. data analysis report의 Conc, SD(Conc)의 의미와 구하는 방법을 알고 싶습니다.   5. 또한 앞에 (1/10)이라고 표기된 것은 1X 혈청 원액을 증류수9혈청1로 희석한 것인데 왜 dilution 한 것과 원액의 흡광도가 크게 차이나지 않는 건가요?   6. Conc에 (+)라고 뜨는 이유와 SD(Conc)에 (*)이라고 뜨는 이유가 궁금합니다.   마지막으로 원래 그래프는 샘플을 제외한 standard만 그려지는 건가요? 질문이 많아 죄송합니다. 
회원작성글 notorious..  |  04.28
Q. ELISA kit
안녕하세요 ELISA kit 를 찾고있습니다.   요새 코팅이 되어서 심플하게 되어 있는 kit들도 많은데  가격이 96test 기준으로 너무 비싸더라구요   직접 코팅해서 사용하는 괜찮은 ELISA kit 제품 있으면 추천 부탁드려요!
회원작성글 민소리  |  04.27
Q. Anti-body 안티바디 형광 붙은 것 형광현미경으로 확인 가능할까요?
형광이 붙어 있는 항체를 용액에 살짝 풀어서 슬라이드 글라스에 올려서 형광현미경으로 관찰 시 형광이 보일까요?     제가 알기로는 확인이 불가능한 것으로 알고 있는데, 이걸 확인하라고 하네요.   확인이 가능한지, 용액에 포함된 항체를 확인할 수 있는 방법이 뭐가 있을까요?   하려는 실험이 용액에 항체를 섞어서 한쪽은 특수한 처리가 없이, 한쪽은 특수한 처리를 하여서  1. 항체의 존재여부와 2. 양의 변화 차이등을 비교하려고 합니다.   어떤 방법이 좋을까요?  형광달린 2차 항체를 쓸 계획인데... 혹시 아이디어가 있으신 분들 공유 부탁드립니다.
회원작성글 비타민B  |  04.27
Q. DAB staining 1차항체 안붙인샘플에서도 발색이 됩니다ㅠ 첨부파일
이전에도 질문했긴한데, 다른 문제로 질문을 또 올립니다ㅠ 1차항체로 ki67을 붙여 hair follicle 관찰이 주 목적이고, 왼쪽 사진은 negative control용으로 1차항체 대신 5%BSA를 붙여 o/n 후, 2차는 동일하게 (2시간30분 반응) 진행하였습니다. dab(vector)시약은 10분 처리하였습니다. 1. 오른쪽 1차붙인 사진 보면 갈색점점이 있는 걸 보아 염색이 안된 건 아닌것 같은데 negative에선 단지 비특이적으로 염색이 된 걸 까요? 혹시 그렇다면 이유가 뭘까요ㅠ 2. 한날한시에 같이 진행한 염색인데 왼쪽오른쪽 사진 발색이 너무 달라서 황당했습니다. 샘플수도 5개 밖에없었어서 염색하면서 delay는 거의 없다고 봐도 되거든요.. 왜그렇죠ㅠ 3. 디지털슬라이드스캐너(image scanner)로 촬영하는데 원래 현미경상으로 볼때 아주아주 연하게 뜨나요? h&e샘플 촬영때는 현미경 auto focus하면 자동인식 아주 잘됫는데 dab샘플들은 너무 연해서 잡히지가 않았습니다. 원래 이런가요..?
회원작성글 12312  |  04.26
Q. light chain (람다/카파)
안녕하세요. 공부하다 궁금한게 있어 질의드립니다.   면역학 책을보면 람다나 카파 체인이 binding면에서 큰 차이가 없다는데   어떤 질환에서는 특정 비율이 높게 발현되고, 항체를 제작할때 람다/카파에 따라 aggregation이 생겨서 바꾸는 것도 있는 것 같은데 이러한 경우는 왜 그런건가요?   관련 지식을 찾고 있는데 잘 나오지 않네요. 
회원작성글 뚜비뚜삐  |  04.26
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