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BioLab 장재봉 교수
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 카테고리: 전체 > Molecular Biology-Protein > Extraction/Isolation
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Q. AU-PAGE gel에서 얻어진 단백질
AU-PAGE gel에서 얻어진 단백질이 6X loading dye로 염색이 되어 있는데, 이것의 색을 없애려면 어떠한 과정을 거쳐야 할까요? HPLC를 진행할 예정입니다.
회원작성글 택운자몽  |  2021.01.27
Q. 조직에서의 soluble insoluble protein
안녕하세요 대학원생입니다. 현재 조직에서 soluble과 insoluble protein 추출하여 bca로 측정하는 실험을 하고 있는데  어떤 논문에서는 조직무게를 잰 후 10% w/v으로 pbs에 homogenize하여 상층액을 soluble 남은 pellet에 1M NaOH를 가해서 나온 상층액을 insoluble으로 측정하고 있더라구요..   하지만 저는 몇개월째 soluble이 normal군과 control에서의 차이가 나야하는데 항상 비슷하게 나오고 있으며 insoluble은 잘나오는 편인데 어디서 잘못되고 있는지 잘 모르겠네요.. 혹시 다른 방법으로 측정해 보신 선생님들 코멘트 부탁드립니다...
회원작성글 초코딸긔맛  |  2021.01.22
Q. SDS PAGE 질문드립니다.
SDS PAGE에 대한 몇가지 궁금증이 있는데, 아시는분은 대답해주시면 정말 감사드리겠습니다.   (1) loading할때 저희 lab실에서는 15람다정도 loading을 하는데, 기준이 있나요? 그리고 sample에 원하는 protein이 많으면 loading을 적게 하는식으로 조절하는건가요? (2) 저희 lab실에서는 running할때, pre-running (stacking에 일자로 맞춰주는)을 안하고 120V에 2시간 running하는데 이렇게되면 결국 같은 MW의 protein이여도 일자로 안내려오지 않나요? (3) 높은 volt로 running하면 저항이 많이 발생하고, 열이 많이 발생하지 않나요? 근데 이럴때 부작용은 어떻나요?
회원작성글 갓석박사  |  2021.01.22
Q. exosome BCA 정량을 하려고 하는데요.
안녕하세요. exosome을 western을 하기 위해 BCA 정량을 진행했습니다.  exosome을 우선 protein으로 lysis를 해야 하잖아요. 그래서 ripa 5ul + exosome 5ul를 넣고 ice에서 30분 진행한뒤, BCA정량을 진행했습니다.  (혹시나 싶어서 ripa를 넣은 샘플과 넣지않은 샘플 둘다 측정을 진행했습니다.) 그런데 ripa로 lysis한 농도값이랑 그냥exosome을 넣은 농도값이  비슷하게 나옵니다. 그럼 lysis가 안된거라 생각해야 하나요? 둘다 OD값이 대략 0.1483 정도 나왔습니다. (양이 작으니 그건 감안해주세요.)   혹시 exosome을 protein으로 인지하는건가요?ㅜㅠ 도와주세요.. 감사합니다.
회원작성글 나는연구자  |  2021.01.19
Q. 단백질 보관법
안녕하세요 석사 2학기차 초보 대학원생입니다.. 단백질 뽑다가 의문이 들어서 질문 남겨요.. a549랑 beas cell을 가지고 INTRON사의 protein lysis buffer로 단백질만 뽑았습니다. 아직 BCA assay랑 western용 sample 제작 (5x sample buffer넣고 끓이기) 하지 않은 상태구요  이 단백질을 -80도씨에 보관하는게 괜찮을까요? 어제 딥프리저에 넣어두고 오늘 보니 얼어있더라구요  지금 현재 다른 실험들이 많아 이 단백질 sample로는 1달쯤 뒤에 western을 할 것 같습니다.. 고수님들 조언 부탁드립니다 1. 5x sds sample buffer 까지 넣고 끓인뒤 -80 보관 2. 단백질만 뽑은 상태에서 -80보관 3. 단백질만 뽑은 상태에서 -20보관  셋 중 어떻게 보관해야할까요? 조언 부탁드립니다. 감사합니다  
회원작성글 돔돔  |  2021.01.13
Q. nupage dye로 cell깬것
nupage dye로 cell깨고 SDS page를 걸고 남은 solution은 어디다가 보관해야하나요?
회원작성글 지니25  |  2021.01.08
Q. chromatography resin wash 할때 centrifuge 해도 되나요?
프로틴 정제를 처음해보는데 레진을 사고, 컬럼을 만들어서 하고 있습니다.  근데 레진 사용하고 나서 워시과정중에 centrifuge 사용해도 될까요? 그냥 워시버퍼에 풀어서 흔들어서 씻고 센트리 돌리고 저장버퍼에 넣고싶은데 (내리는건 시간이 좀 걸리다보니...) 가능한지 모르겠네용  해보신분 있을까요
회원작성글 asefpjv  |  2020.12.24
Q. 울트라센트리퓨즈(초원심분리)시에 샘플 량을 변경하면, 이후의 결과도 달라질까요?
바보같은 후배가,,, 선배님들께 조언을 구합니다. 울트라원심분리 할때에, 넣는 샘플의 량을 달리 할때마다 결과값이 달라질수가 있나요? 같은 스피드에 같은 시간일 경우에요...   1ml 튜브에 400ul 혹은 800ul 의 샘플을 넣고, 30분, 70000rpm으로 원심분리했을때, 층이 다르게 분리가 되더라구요.(같은 샘플이나, 다른 날짜에 원심분리를 실시했어요) 이건, 원심분리한 샘플 량의 차이때문인가요? 아니면 제 손의 실수로 인한 차이 때문일까요?  
회원작성글 penda  |  2020.12.23
Q. Blue Native Gel 내려보신 연구원님들의 조언을 구합니다.
 안녕하세요, 추운날씨 다들 건강들 하신지요.   다름이 아니라 이번에 BN Gel을 내려야 할 일이 생겨서 몇가지 여쭈어 봅니다.   우선 보고자 하는 단백질을 Membrane Protein은 아니고 Soluabe phosphatase 입니다. 단백질 정제 한 후 Complex로 존재하는지 알아보려 하는 실험입니다.   1. Native Gel 의 경우에 Bromophenol Blue를 이용하여 Bis-Tris Gel로 수행하는 Protocol은 많이 나와있어 정리해 놓았는데 BN Gel의 경우에는 유독 Anode와 Cathode Buffer를 나누어 만드는 흔히 Tricine sds page 에 사용하는 방법으로 많이 나와있어서요, 혹시 특별한 이유가 있는지 여쭈어 봅니다.   2. 앞서 말씀드렸듯이 저의 경우에는 Membrane protein이나 Insoluable한 Protein을 Gel상에서 확인하는 것이 아닌 이미 Soluable 한 단백질들만을 정제해서 이용하는데 Aminocaproic acid 같은 것들을 넣어줄 필요가 있을까요 ?   3. 전기 영동 후에 Band를 다시 얻어 주려고 계획중인데요, Dialysis Bag 에 Band 를 잘게 잘라서 전기장을 걸어주려고 하는데 문제가 될까요 ?   4. 마지막으로 아래와 같이 Buffer 만들어 준비하려고 하는데 조언 부탁드립니다. Buffer composition   Electrophoresis Buffer (1L) 3.0g Tris 14.4g Glycine   5x Sample Buffer (10ml) 312.5 mM Tris-HCL(pH6.8) 50% Glycerol 1% Comassie blue   
회원작성글 neto543  |  2020.12.10
Q. 액상시약으로 버퍼 만드는것이 가능한가요?
저희는 현재 ph meter 장비가 없어서 문의 드립니다.ㅠ 버퍼 조성은 0.025 TRIS pH7.4 0.25M Sucrose 1mM EDTA입니다. 시판되는 1M Tris(pH7.4), 0.5M EDTA, 0.5M Sucrose을 이용해서 총 볼륨 500ml를 만든다는 가정하에 12.5ml tris 1ml EDTA 125ml sucrose를 넣고 최종 PBS로 500을 맞춰서 쓰면 가루 파우더로 만드는것과 동일할까요? 이런질문드리는것도 부끄럽긴합니다만.. 조언 부탁드립니다.ㅠ
회원작성글 ojb  |  2020.12.02
Q. 3T3-L1 분화 중인 상태에서 lysis하는 방법 (MDI 처리 후 2일차에 harvest)
안녕하세요. 3T3-L1으로 Western blot을 하려고 합니다.   MDI로 분화를 유도하여 2일차에 harvest하여 lysis를 진행했는데 콧물처럼 찐득한 extraction을 얻어 도저히 정량을 피펫으로 따기가 어렵더군요... PBS로 워싱할 때도 밑부분이 찐득하게 떴어요ㅜㅜ 분화 완료된 상태에서 lysis할 때는 큰 문제 없었습니다.   lysis buffer는 RIPA 1000 ul : protease inhibitor 10 ul : phosphatase inhibitor 10 ul 비율로 6well 기준 200 ul씩 넣었어요. BCA assay 결과 단백질량이 많아서 lysis buffer를 2배 희석해도 괜찮을 거 같은데 문제는 콧물같은 점성이 단백질까지 깨져서 그런건지... 잘 모르겠습니다ㅠ lysis buffer가 강한건지...   혹시 시간대별로 혹은 MDI 처리 후 2일차에 harvest한 3T3-L1으로 lysis 해보신 분 있으신가요?ㅠㅠ 제발 조언 부탁바랍니다!!
회원작성글 펩시콜라  |  2020.11.25
Q. 식물성 단백질을 미생물이나 동물세포에서 발현하여 추출할 수 있을까요?
식물성 단백질의 아미노산 서열을 알고 있다면 플라스미드에 넣어 미생물이나 동물세포에서 발현이 가능할까요? 단백질 folding에서 문제가 생길까요? 전문가분들의 의견이 궁금합니다.
회원작성글 이브지옵프  |  2020.11.24
Q. Iptg
Iptg 를 만든 후 상온에서 이틀 정도 보관했었는데 다시 -20도씨에 넣어서 얼리고 사용해도 될까요? 상온에 오래 있어서 안될까요?
회원작성글 엉금  |  2020.11.20
Q. western blot을 위한 kidney tissue에서 protein을 extraction 할 때 질문입니다.
western blot을 위한 kidney tissue에서 protein을 extraction 할 때 질문입니 다. 제 전에 계셨던 선배님은 마우스 whole kidney를 Lysis buffer와 함께 갈아서, 농도 조절을 위해 D.W에 1/10-5 정도 dilution을 하여 보관했다 사용 했었었 는데요, 시간이 2주 정도 지나니 샘플의 단백질 농도도 떨어지고, 자꾸 샘플이 젤리처럼? 굳어서 ...  저는 이것이 D.W로 희석해서 보관하는 것이 문제라는 생각이 들어서요, 이번에 방법을 바꾸어 whole kidney 말고 조직의 일부를 넣고 lysis 해 볼  생각입니다..  예전에 마우스 골격근에서의 경험으로는 1ml Lysis에 20mg의 조직을 넣었 었는데요, (이 경우 BCA 진행하면 1900ug/ml로 가장 높은 스탠다드보다 살짝 낮았습니다. ) kidney도 동일하게 하여도 될지요 ?  혹시 조직마다 조금씩 다를지 ... 경험이 있거나 조언을 구하려 질문 남깁니다. 감사합니다 ! 
회원작성글 써니22  |  2020.11.19
Q. PBS버퍼 사용방법
단백질이 PH에 의해 변성되는걸 막기 위해서 PBS버퍼를 사용하려고 합니다. 튜브를 버퍼로 wash하고 단백질을 넣어서 써도 완충작용이 되는건가요? 아니면 일정량의 버퍼를 단백질과 함께 넣어야 하나요? 만약 함께 넣어야 한다면 버퍼의 양은 얼마나 돼야 하는지 조언 부탁드립니다.
회원작성글 nebula_  |  2020.11.18
Q. blood plasma separation
국내와 외국에서 plasma separation관련 요청이 와 아래와 같이 고안해 답을 주었는 데 혹시 이런거 하는 국내업체 있는지 알고 싶습니다. 주로 하는 게 전자 분야라 이쪽은 문외한이고 네이처에 논문낸 인도 사람도 자기나라만 해도 수요가 매우 많다고 하네요. 기존 plasma 분리방식과는 좀 다릅니다. 필터도. 이런 필터 제작은 세계에서 가장 정밀하다는 이야기를 듣고 있고, 개인적으로는 미세먼지 제거하는 데 적용하기 위한 특허등은 보유하고 있습니다.  https://www.linkedin.com/posts/s-lionel-cho-2343a745_blood-plasma-separation-filter-a-company-activity-6730329422588723200-7Nnm
회원작성글 산적  |  2020.11.09
Q. enzyme activity 측정
논문에서 enzyme activity를 측정하는데 하나는 GST tag를 하여서 in vitro에서 실험 하였고, 하나는 GFP tag하여서 in situ에서 실험을 하였는데 이렇게 tag를 다르게 해서 본 이유가 무엇인가요? ㅠㅠ 
회원작성글 ahdahd  |  2020.10.25
Q. His tag으로 정제된 protein을 다른 방법으로 정제할수 있을까요??
안녕하세요 단백질 발현을 처음 해보는 학생입니다. His tag으로 정제를 완료한 protein을 sds page로 확인을 했는데 E.coli 내부에 있는 his rich protein이 더 많이 발현이 되어 문제가 생겼습니다. 이 protein만 따로 살릴수 있는 방법이 없을까요??
회원작성글 동동동__  |  2020.10.20
Q. chromatography resin 재사용 방법
 안녕하세요. 처음으로 ion-exchange chromatography를 하고 있는 대학원생입니다.   bio-rad사의 econo column 을 구매하여 ni-nta를 충진하여 사용하고 있는데, purification을 진행한 후 마지막에 ni-nta resin은 계속 column안에 두고 사용하는지, 아니면 따로 빼내는 방법이 있는지 궁금합니다.    ni-nta를 재충전하는 방법만 있고, column에서 빼는 방법은 도저히 찾아볼 수가 없어서 부끄럽습니다만 여쭤봅니다.  
회원작성글 나나스코프  |  2020.10.08
Q. 마우스 근육 Ribosome Isolation 프로토콜
안녕하세요 늘 도움받고있습니다.  혹시 마우스 근육 세포 Ribosome isolation해보신 분 계실까요.  선행논문에 쓰여진걸로 해봤는데 잘 안돼서 프로토콜 있으시면 좀 얻고싶습니다.  댓글 부탁드려요. 
회원작성글 골아파덕  |  2020.10.01
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