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 카테고리: 전체 > Cell Biology > Cell Culture
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Q. 근육세포 western blot
안녕하세요. 근육세포 및 근육조직(c2c12 cell) 관련해 실험하는 대학원생입니다. Murf-1, MAFbx 등 같은 근위축 인자들을 wb로 관찰을 해보면 잡밴드가 우선 많이 뜨고, 명확한 위치를 찾기 어려운데.. 혹시 실험해보신 분들 중 단백질 농도를 어느정도로 했는지 알수있나요? 또 원래 잡밴드가 많이 뜨는건지도 알고싶네요!
회원작성글 똑똑해지자  |  10.27
Q. 24 well plate에서 cell이 계속 죽습니다.
24 well plate에 cell을 키우는데 계속 가장 아래에 있는 줄에 seeding한 cell이 죽습니다. 동시에 seeding하고, 동시에 transfection한 다른 줄의 cell은 멀쩡한데 맨 아래 줄이 계속 죽고 있습니다. 마치 cell이 마른 것 같이 죽길래 media 양도 늘려주었는데도 죽는게 눈에 보여요. 이런 경우는 무엇이 문제인걸까요?
회원작성글 밍푸  |  10.27
Q. 특정단백질을 cell cutlrue plate에 코팅
제가 키우는 세포에 자극을 주기위해서    특정 단백질을 plate에 coating 해서 사용 하고 싶습니다.   특정 단백질은 당연히 FC가 달려 있는 형태구요   일반 PBS로 해서 incubation overnight 해서 사용 해도 상관 없을 까요?   농도는 ELISA coating할떄의 기준으로 하려고 합니다. 
회원작성글 m881119  |  10.27
Q. nk cell expansion
안녕하세요.  사람 혈액에서 pbmc를 분리하여 nk cell을 expansion 하는 실험을 setting 하기 위해 계속 논문을 보며 protocol 을 확인하고 있습니다. 일단 실험 목표는 nk cell을 대량으로 expansion하는게 목표이고 임상적으로 사용 가능한 것을 원하는데요. 궁금한것 질문 드립니다. 1. 논문은 보다 보면 혈장이라는 것을 넣는데 이것이 혈액에서 분리한 혈장인가요? 아니면 시약회사에서 구입해서 넣는건가요?  2. 배지가 RPMI 1640을 많이 사용하는데 효율이 좋은가요? 3. Thermo Fisher의  CTS™ NK‑Xpander™를 사용하신 분 계실까요? 4. nk cell을 flow cytometry 말고 다른방법으로 확인할수 있나요?    
회원작성글 편의점  |  10.26
Q. 급합니다 고등학생실험하는데 콜로니가 없습니다
고등학생인데 강아지털에서 채취한 미생물 배양실험하고있습니다(목욕전후비교) 1.강아지털을 칫솔로 10번정도 빗는다 2.칫솔모를 증류수20ml에 5분정도 담가놓아 희석액을 만든다 3.마이크로피펫을 이용해 희석액 100nl를 일반세균배양용 고체배지에 넣고 루프로 도말한다(spreding) 4. 배지를 배양기에넣고 35도 20시간배양한다 이과정으로 했는데 콜로니가 하나도 없습니다 어떤곳에서 문제가 생긴걸까요 희석이제대로안된걸까요? 희석방법도 알려주시면감사하겠습니다
회원작성글 pmbnb  |  10.26
Q. HaCaT cell의 뜻을 알고 싶습니다
HaCaT cell을 현재 키우고 있는 대학원생인데  우선 HaCaT의 full name의 뜻이 이해가 안되고 인터넷에 찾아지지 않아서 질문 드립니다ㅠㅠ Human adult 까지는 이해했는데 low Calcium, High temperature이 cell name에 있는걸로 보아 cell의 특징일 것같은데 혹시 자세하게 설명해주실 분 계신가요ㅜ
회원작성글 실험하수  |  10.24
Q. cell 실험 중 media 제조 질문 입니다!
HaCat cell 실험 할 때 Media를 DMEM + 10% FBS + 1% penicillin 이렇게 만들고 있는데요 냉동된 페니실린을 해동 후에 원래는 이물질이나 오염 등으로 filtering을 진행 해야하잖아요? 만약 그 과정이 생략된 media로 cell 실험을 진행하면 어떻게 되나요?
회원작성글 로빙  |  10.24
Q. C2C12 Cell culture 6well 뜯기는 현상
안녕하세요  C2C12를 1X10^5 / well로 6well seeding 했습니다.  이틀 후 약 95% 되어 DM(DMEM(high)+2%HS+1%PS)으로 DPBS wash 없이교체해주었고(D0), 또 이틀 후(D2) Media change(DM)하기 전에 확인 했는데  D0에 석션 한 부분 정 반대쪽 cell이 뜯긴 것을 확인 했습니다.  이렇게 된 이유를 알 수 있을까요? 석션시에는 cell에 최대한 영향을 주지 않도록 호스에 화이트팁을끼우고 추가로 엘로우팁을 끼워 진행했습니다.   동시에 seeding 한 6well plate 사이에서 전부 같은 위치의 well이 뜯기다거나 하는 경향성은 나타나지 않았습니다. 석션 후 공기에 노출 되는 시간을 최소로 진행했습니다.  미디어 교체 할때는 well 벽면에 분주하여 cell 충격을 최소화 시켰습니다.    고수님들 도와주세요! 
회원작성글 헤업미  |  10.24
Q. 안녕하세요. 세포주 관련 문의드려요ㅠㅠㅠ 초보자입니다
제가 실험 구상을 해서 이것저것 알아보는 중인데   C2C12 (골격근) MC3T3-E1 (뼈)   세포주가 필요해서 코람에 문의해봤는데 C2C12만 답변이 왔고 ATCC여서 생각보다 비용이 엄청나네요.. 한국세포주은행에는 제가 찾는 세포주가 없다고 하는데 그러면 ATCC 밖에 방법이 없는걸까요?   전부 사비로 실험을 해야해서 (물론 그러신분들 계시겠지만 죄송합니다ㅠㅠ)   예산짜는 것 때문에 이래저래 고민이 많네요ㅠㅠ   혹시 조언주실분 계시면 감사드리겠습니다.
회원작성글 ullabunge  |  10.24
Q. 부유세포 배양 관련하여 궁금한 점이 있습니다.
안녕하세요! 부유세포 (THP-1) 배양 관련하여 궁금한 점이 생겨 이렇게 글을 씁니다. 다름이 아니라, 이 세포를 non-treated 175T flask에 잘 키우고 있었는데요. 이 flask를 거의 다써가서 주문 넣었는데 업체 사정상 늦어지고 있습니다..   그런데 마침 treated 된 175T flask는 많이 가지고 있어서 여기에 THP-1을 배양해볼까 생각 중인데 괜찮을지 궁금합니다. 이렇게 배양해도 문제가 없을까요? (부유세포지만 바닥에 붙는다던지..) 이 부분에 대해서 조언해주신다면 매우 감사드리겠습니다. 
회원작성글 프롬이  |  10.24
Q. cell contamination 어떤 컨탐인가요? 그리고 해결방법이 있을까요?
HCT116 colorectal cancer cell culture를 하고 있습니다 RPMI1640 FBS 10% P/S 1%에서 키우고 있는데 아주아주 작은 검은 점처럼 보이는 것이 있길래 400배 현미경으로 확인해보니까 조금씩 움직이더라구요 그래서 Contamination 관련해서 찾아보았는데 yeast는 확실히 아닌 것 같고 mycoplasma 혹은 bacteria인 것 같은데 어떤 것인지 알려주실 수 있을까요? 그리고 컨탐을 해결할 방법이 있을까요? 참고로 cell과 제가 동그라미친 부분 이외에 검은색들은 배율이 높아서 생긴 흠집같은 background인 것 같습니다 400배인데도 눈에는 보이지 않을정도이고 사진 찍으니까 저런게 뿌옇게 보이네요 확대하였을 때 잘 보이지 않더라도 사이즈만으로 유추할 수 있을까요?
회원작성글 탱탱볼  |  10.24
Q. Cell seeding시 media 넣기
Cell Culture 왕초보자입니다. 셀 카운팅 하고 일정양 키울때 6well plate나 100pi plate에 media를 넣을때 파이펫으로 넣던데요. 플라스크에 셀 키우고자 할때도 파이펫으로 미디어 넣어야만 하나요? 50ml용 팔콘튜브에 aliquot 해서 미디아 담아뒀다가 플라스크에 일정양 부어서 사용은 매우 위험한 발상인가요? 스탁 media통에서 여러차례 파이펫담궈서 꺼내는 방식을 쓰던데 이건 공용으로 쓰니까 초보자 제가 오염시킬까 우려되기도 하구요. 50ml팔콘튜브에 덜어서 여기서 부어서 쓰거나 파이펫으로 꺼내거나 이런 방법은 안되는건가 해서요. 그리고 50ml에 남은 media는 4C에 뒀다가 다음에 또 쓰면 될까요?
회원작성글 BBlue  |  10.23
Q. primary fibroblast morphology
skin에서 fibroblast를 뽑았습니다.  같은 방법이여도 개체마다 morphology이 약간씩 다르게 나오는데 이번 실험에서는 morphology가 너무 이상해서 질문드립니다. ㅠㅠ  fibroblast가 아닌거처럼 보이시나요? 어떤 셀인지 잘모르겠습니다  
회원작성글 내가만든쿡희  |  10.19
Q. Cell seeding
Cell counting 했더니 1.8 * 10^6 cells/ml이 나왔습니다. 총 7ml 있는 상황이구요. 근데 얘를 6well에 well당 500ul씩 1*10^6 cells로 seeding 하려면 어떻게 계산해서 해야될까요? ㅜ 일단은 빨리 해야돼서 500ul씩 넣어주긴 했는데 그렇게 되면 0.9 * 10^6 cells/well로 seeding 해버린 꼴이 되니까 불안하네요 ㅜㅜ
회원작성글 남홀  |  10.19
Q. plate incubator 다시 들어가도 괜찮을까요?
colony가 뜬 plate를 4도씨에 보관해놨다고 후배분이 말씀해주셔서 그럼줄 알았는데 지금 보니 colony 크기가 많이 작더라고요 다시 incubator 안에 넣어도 괜찮을까요?
회원작성글 학헉학도생  |  10.19
Q. Brdu cell labeling
Brdu 를 이용해서 난자 DNA에 labeling을 할려고 하는데 쥐를 mating 시킨후 다음날 암놈의 생식기에서 plug가 확인되면 암놈의 복강에 brdu를 주사시켜 난자 DNA에 brdu를 표지시킬려고랍니다. 이때 정자 DNA에는 labeling 이 이루어지질 않을것으로 생각 하기에 추후 수정란의 DNA를 조사하면 얼마만큼의 난자 DNA가 수정에 관여되는지 알수 있을것 같은데 본 방업에 대한 조언 부탁 드리며, brdu를 한번도 사용해 보질 않았기에 혹시 추천해 주실 브렌드 즉 다소 초보자가 쉽게 접근할수 있는 방법적으로 조언과 추천 부탁드립니다.
회원작성글 kingston  |  10.19
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