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웹진 Vol.24, No.10 (2022년 10월) 발간
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 카테고리: 전체 > Laboratory Animals > Surgery
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Q. 랫드 꼬리 채혈 시 정맥, 동맥 구분법..
랫드의 미정맥에서 채혈을 하였습니다.항문 바로 위에 있는 혈관 기준으로 좌측과 우측에 있는 정맥을 주로 이용하잖아요.항문 바로 위 혈관의 우측 정맥에서 채혈하기 위해 메쓰로 그었는데,꼬리를 쓸지 않아도 피가 철철철 나오더라구요. 랫드의 몸이 전체적으로 따뜻했구요.피가 너무 잘 나와서 깜짝 놀랬습니다.제 경험상 미정맥 채혈 시, 다른 랫드들은 꼬리를 좀 쓸어줘야 피가 나오곤 했는데요.오늘 채혈한 한 마리의 랫드는 전혀 그렇지 않았습니다.그리고 지혈 하는데 걸린 시간도 다른 때 보다 좀 더 걸렸습니다. 개체차에 따른 이 랫드의 특성인 것일까요?아니면 제가 채혈한 혈관이 동맥일 확률이 높은가요?
회원작성글 ㅇㅇ  |  2012.03.09
Q. helicobacter 문의요
마우스에다가 helicobacter 감염시킨 후에위 조직을 homogenate 해가지고 일부는 urea broth에 분주해서 배양하고일부는 고체배지에 도말하고, 일부는 그람염색을 실시하라고 논문에 써있던데요..이렇게요...The stomachs were removed and the antral mucus layer was scraped. Part was used to prepare Gram stain slides and part was inoculated in urea broth while the remainder was homogenised in a test tube containing 500 µl of BHI. The homogenate was inoculated by flooding on CA-Vitox -DENT plate. 근데 위 적출후 점막층을 긁어내서 배지에 담아 homogenise 한 후에 그것을 바로 그람염색해도 균을 관찰할 수가있나요?
회원작성글 쭈  |  2012.03.05
Q. Tissue homogenize method...
 Rat에서 비복근을 적출하여 tissue total RNA를 extraction 하려고 합니다...tissue를 homoginize 시켜야 하는데 지금 homogenizer 상태가 좋지 않아..다른 방법을 사용 하여야 할것 같습니다..tissue를 RNA degradation없이 잘 homogenize시키는 method가 있다면 조언 부탁드립니다..
실험실꼴통  |  2012.02.03
Q. 조직을 적출한후 fixing해도 스테이지? 반응이 지속적으로 일어날까요?
제목 그대로입니다.갑자기 궁금해져서요.. 증식이 활발히 일어나는 조직을 생명체에서 적출한후 fixing하게 되면 그 상태 그대로 멈추게 될까요? 아니면 좀더 지나고 나서 멈출까요... 조직을 생명체에서 적출하면 그대로 멈출거라고 생각은 합니다만 조직을 ihc한후 그 결과를 보면 조금 이상한거 같기도해서 여쭤봅니다.
회원작성글 완소호돌  |  2011.12.27
Q. matrigel에 대해 궁금한게 있어요..
mouse tumor의 영상을 얻을 때나, 조직을 얻을 때 방향성을 표시해야 해서 tumor옆에  matrigel을 주입하려고 합니다.matrigel을 처음 알게되어 잘 모르는 것이 있어 질문드립니다.궁금한 것은, 1. bd사의 matrigel을 구입하려 합니다. matrigel에 methlyene blue용액이 잘 녹을까요?methylene blue는 EtOH에 녹이는데.. 저온으로 온도만 맞춰주면 matrigel과 섞일 지 궁금합니다. 2. matrigel은 동물체내에 주입 시 거의 바로 굳는다고 알고 있습니다. 종양 옆에 matrigel을 동그랗게 주입 한 뒤, 약 2주 뒤에 종양을 적출한다 했을 때, matrigel이 보통 굳은 그 모양 그대로 유지되어 있습니까? 연구자가 matrigel을 직접 눈으로 확인할 수 있을 정도로 보존되어 있는지 궁금합니다. 
회원작성글 초보초보  |  2011.12.26
Q. 동물조직 H&E stain 의뢰 가능한 곳 찾습니다.
안녕하세요. 마우스에서 대장을 적출하였습니다. 이 샘플을 H&E stain을 의뢰하려 합니다. 대전이나 청주 지역정도에 의뢰가능한 업체 혹은 학교 등이 있는지 찾기가 쉽지 않네요. 아시는 분이 계시면 도움 부탁드립니다. 감사합니다. 즐거운 하루 되세요.
회원작성글 %자 가는거야%  |  2011.11.23
Q. edema 형성 실험
rat 이나 mouse 로 부종을 만든 후, 치료효과를 보려고 하는데간단한 edema 를 만드는 수술방법, 처리방법이나 관련 Ref. 가 있다면추천부탁드립니다. ^^
초보  |  2011.11.22
Q. 누드마우스 xenograft에 대해 궁금합니다..
누드마우스에 Human hepatocellular carcinoma cell line을 주입해 US/MRI영상을 얻으려고 합니다. Cell line은 Huh7을 쓰고 있고, 1x10^7cells/100ul 로 뒷다리에 심었습니다.DPBS로 희석하였고 메트리제같은건 쓰지 않았어요. 1. 문제는 종양이 한달이 되어도 자라지 않습니다. cell은 최소 2~3번 계대하여 안정적인 걸로 사용했고 needle에 남을 vol.도 고려해 충분히 넣어주었습니다. needle을 넣었다 뺄 때 피가 나거나 새지도 않았고.외국논문들 보면 1x10^6cell/100ul로 해도 1~2주면 1cm씩 자랐다고 써있는데.. 뭐가 다른걸까요.?2. 종양 내 혈관생성을 보는 실험이라 교수님께선 s.c말고 좀더 깊이 찔러넣을 수 없냐고 하시는데 그럼 근육주사가 되는건가요-.-; ? cell이 들어갈 공간이 어디있을까요..? 아시는대로.. 경험해보신대로 답변 부탁드립니다. ㅜ.ㅜ
sss  |  2011.11.22
Q. mouse에 spleen에서 nk cell 분리 방법이 굼긍합니다..(제발 헬프..ㅜㅜ)
현재 mouse에서 spleen을 적출하여 nk cell의 활성을 보기위해 실험 준비중입니다..YAC-1을 이용하여 LDH활성을 보려고 하고 있습니다..제가 봤던 논문에서는 splenocyte를 그냥 YAC-1 cell과 비율을 다르게 하여 측정을 하였는데좀더 찾아보니.. FACs를 이용하여 sorting하는 방법이 있는거 같아서 찾아보고있는데..도저히 nk cell만을 splenocyte 에서 어떻게 분리하는지를 모르겠습니다...ㅜㅜ혹시 kit가 있다면 알려주시겠습니까??...ㅜㅜ아님 방법이라도 좀 알려주시면 감사하겠습니다.언능 실험 하고 싶은데 어떻게 해야 할지를 모르겠습니다..
회원작성글 24k매니아  |  2011.11.09
Q. frozen tissue에서 rna추출
병원 수술실에서 위 조직을 채취하고 있습니다. rna 추출은 다른 사람이 하는데, 결과가 좋지 않아 채취 시 주의사항을 알고싶습니다.지금까지 총 3가지 방법을 시도해 보았습니다.1. 멸균된 e-tube에 조직을 넣어서 액체질소로 이송 후, 액체질소 탱크에 보관2. 멸균된 e-tube에 rna later 200㎕를 넣어서 냉장실(4℃)에 overnight한 후, rna추출. 참고로 rna later는 실온에 보관중입니다.3. 멸균된 e-tube에 rna later 200㎕를 넣고, 조직을 넣은 후 액체질소에 넣어서 이송한 후 액체질소탱크에 보관보통 채취된 조직은 30mg 이하입니다. 수술실에서 적출된 위조직에서 tissue를 채취하고, 액체질소에 노출하는 시간은 30분 이내입니다.
채취자  |  2011.10.27
Q. peritoneal macrophage 적출시, 쥐 사료는?
Isolation of peritoneal macrophage 하는중에 한가지 궁금한 점이 있네요.일반적으로는 C57BL/6를 Normal chow(일반사료) 먹이는데, High Fat/High Cholesterol 를 먹여서 적출을 해봤더니 그건 Pure macrophage 가 아니라고 하는데 뭐가 다른건지 알고 싶네요. 논문을 검색해보지만, 이를 사용해서 적출한 경우는 Apoe mice를 사용한 경우말고는 찾을 수가 없네요. Over-expressed 가 되어진 macrophage 이면서 Cholesterol 이 염증유발 과다하게 시킨것이라 pure macrophage 가 아니라는 정도만 알고있네요. 정확한 차이를 알고 싶네요. 선배님들, 따끔한 조언 부탁드립니다.
회원작성글 흑기사  |  2011.09.26
Q. 수상생물 수술후 접합에 관한 질문입니다.
생물 수술후 접합을 하려는데.. 그동안 순간접착제를 이용하여 실험을 진행하였습니다. (록타이트) 근데 생각보다. 많이 죽네요.. 좀 괜찮은 방법 없을까요?? 물고기로 실험하는 거라서. 당연히 순간접착제가 좋지는 않은데요.. 다른 방법이 없어서 이방법을 사용하고 있습니다. 도움을 주실만한분 계신가요?  
회원작성글 완소호돌  |  2011.09.14
Q. dorsal root ganglion 적출 가능하신분 ㅠ도와주세요
어떤 약물을 처리하고  neuropathy를 확인하는 방법으로 dorsal root ganglion에서 어떤 유전자 발현을 보고자 하는데 으 DRG 어떻게 적출해야하는지 모르겠습니다.ㅠ혹시 DRG적출하는 방법 상세하게 알려주실수 있나요?ㅠ
석사생  |  2011.09.07
Q. mouse immunization (peritoneal injection) 할 떄에
antibody를 만드는게 목적이 아니라, immune response 를 유도한 후에필요한 tissue들을 적출해서 실험하려고antigen을 PBS에 녹여 FCA와 섞어 emulsion을 만들어복강주사했습니다. immunization시킨거죠.그런데mouse를 해부할 때에 가죽과 복막 사이에그 emulsion들이 그대로 남아있는겁니다...injection이 잘 못 된건지, 애초에 antigen solution을 잘 못 만든건지, 아니면 원래 이런건지 잘 모르겠습니다. 경험자 분들 가르쳐 주세요자세하게 말씀드리면요...BSA와 PBS를 1mg/ml이 되게 섞은후, 이 BSA/PBS solution 500ul를 FCA 1ml과 잘 섞어 stable한 emulsion을 만들었습니다. 이 용액 1.5ml중 150ul를 취해서 (antigen이 50ug이 되게끔) injection하였습니다.
회원작성글 상큼한 스타트  |  2011.08.23
Q. rna 추출을 위한 조직 보관방법..
사람의 조직을 적출해서 보관하려 합니다.조직을 보관할 떄 -70도에서 보관하기도 하지만,rnalater(qiagen 사)라는 용액을 이용해서 보관한다고도 하더군요위 용액을 사용할 떄, 용액에 조직을 넣고, 얼려서 보관해도 되나요??
회원작성글 언제나궁금  |  2011.07.01
Q. PBS로만 관류시 4% PFA 에 담궈두어야 하는 시간은 어떻게 되는지요? 조언 부탁드립니다
mouse brain을 PBS and 4% PFA로 perfusion을 시행한 다음 brain을 4% PFA에 24시간 담궜다가 sucrose 용액으로 옮깁니다.그런데 이번에는 mouse brain을 관류시 PBS만 사용하고 , 4% PFA로 관류를 시행하지 못하고 바로 brain을 적출해서 4%PFA에 담궈야 하는데, 얼마정도 담궈두어야 할지 궁금해서 조언을 얻고자 올립니다.너무 오랫동안 PFA에 담궈두면은 염색에 영향을 미칠까봐 걱정되고, 24시간 이후에 꺼내자니 고정이 잘 안되었을 까봐 걱정입니다. 많은 조언 부탁드립니다또한 cyrosection을 해서 free floating샘플을 0.02% NaN3/PBS에 바로 담궈서 영구 보관해도 되나요? 아니면 중간에 거쳐야 하는 과정이 있는 건지요?
회원작성글 drmjm  |  2011.06.30
Q. liver H&E staining 분석에 대해 질문드립니다!ㅋ
앗녕하세요ㅋ현재 간독성 평가를 위한 실험을 진행 중입니다.6.5주령의 SD rat에 sample을 2주간 경구투여하였구요..그후 적출해두었던 간조직의 상태를 보기 위해 formalin에 고정해두었던 조직을10㎛로 frozen section하여 H&E staining 후, 관찰하던 중에 의문이 생겨 질문을 올립니다.(참고로 첨부하는 사진의 배율은 지금으로써는 정확히 알지 못하겠고ㅠㅠ; 첫번째 사진이 저배율, 아래 두장의 사진이 고배율입니다.)궁금한 점은..먼저 첫번째 사진에서 보라~자주색으로 염색된 조직의 사이사이에 동그란 빈공간이 관찰되는걸 보실 수 있는데,저희가 찾아본 논문들에서는 그 동그란 빈 부분이 "지방구"에 의해 생긴 것이며간독성이 심해질수록 그 크기가 더 커진다고 나와있는데..이것이 과연 정확한 것인지.. 저 동그란 여백의 정체는 과연 무엇인지 알고 싶습니다.그리고 아래에 두 사진을 보시면..두번째 사진에는 조직 사이에 뻥뻥 뚫린 부분이 많습니다.한마디로 조직이 굉장히 성긴 형태를 띄고 있다는 건데요..그에 반해 세번째 사진은 비교적 조직의 구조가 촘촘한 것을 볼 수 있습니다.(두 사진은 각각 서로 다른 투여군에서 찍힌 것입니다..)저희가 얻은 liver tissue 절편들은 대체로 두번째 사진처럼 빈 공간이 많은 편입니다.궁금한 것은 간조직에서 이런식으로 보이는 것이 정상적인지..;저희가 찾아본 다른 논문들에서는 이렇게까지 성긴 그림은 없었거든요;;뭐가 잘못돼서 이런식으로 나타난건지..아래의 두 사진의 차이는 무엇이기에 이렇게 나타나는건지..궁금합니다ㅠ 조직병리에대해 잘 몰라서 결과를 두고 해석하기가 참 너무 난감하네요. 도움주시면 정말 감사하겠습니다!!ㅠ
질문자  |  2011.06.27
Q. mesenteric lymphnode 분리질문
mesenteric lymphnode 분리를 첨하는데제가 구글에서 찾아서 대략적인 위치를 찾았지만 맹장과 소장 그리고 대장가운데에 줄줄이 소세지같은 그게 lymphnode가 맞나요? 물위에 띄어보고도했지만.. 누가 사진첨부좀 해주시면 안되겠습니까 적출된 사진과 대략어느 위치에 어느정도의 크기인지요..제가 그것이라고 판단한 림프절의 크기는 약 1cm 정도인데요. 모양은 줄줄이 소세지 모양이구요.. 이게맞는지..ㅠ.ㅠ
회원작성글 초보  |  2011.06.16
Q. cryosection 프로토콜이 제각각..
동결절편 처음 하는 초보입니다. 실험실에 선배가 없어서 인터넷에서 프로토콜 찾아보고 있는데●어떤 분은 조직 적출 후 바로 oct에 담궈 얼린 후 섹션해도 된다고 하시고●어떤 분은 퍼퓨전, 고정 후 sucrose에 infuse 후 oct에 담궈 얼려 섹션해야 한다 하시고ㅜ.ㅜ저는 mouse liver 절편에서 Oil-red-O로 fat 염색을 할 예정입니다.perfusion은 하지 않을 것이고 적출 전 전채혈을 하기 때문에 간이 적출 전에 이미 하얀 상태입니다. liver는 섹션이 비교적 쉬운 조직임을 알고 있습니다.위 두가지 중 전자로 그냥 해도 될까요?
cryosectio  |  2011.03.07
Q. cryo section 처음 하는데요..
적출 후(mouse liver) ice에 박았다가 -80도에 그대로 얼려 놓았죠.그런데 지금, cryo section 계획이 급 생겼어요.그 샘플을 늦었지만 otc compound에 담아 다시 -80도에 얼려 두면, 다음날 이라도 section가능해 지나요?(frozen section에서 oil red o staining 하여 fat 볼 겁니다.) 
frozen sec  |  2011.02.23
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