[DEBUG-WINDOW 처리영역 보기]
즐겨찾기  |  뉴스레터  |  오늘의 정보 회원가입   로그인
BRIC홈 실험
필코리아테크놀로지
배너광고안내
이전
다음
스폰서배너광고 안내  배너1 배너2 배너3 배너4
[우당탕탕 석사 적응기] 석사 1학기 - 새로운 환경, 그리고 후회
전체보기 안전점검 LABox
 카테고리: 전체 > Molecular Biology-RNA > Purification/Isolation
Mol. Biol.-DNA Mol. Biol.-RNA Mol. Biol.-Protein Immunology
Cell Biology Microbiology Plant Biology Laboratory Animals
Omics Chemical biology Bioinformatics Laboratory Equipments
Buffer/Reagent Bioethics Etc.
카테고리 전체보기펼치기
질문/투표/프로토콜 등록
Q. RNA prep
안녕하세요. RNA prep중 RNA 추출을 trizol을 이용해서 합니다 그리고 chloroform으로 층분리해서 상층액을 추출해서 사용하는데요  다른 실험과 겹쳐 이 단계까지하고 냉장보관한 상태입니다. 실험에 영향이 없는지 궁금합니다..
회원작성글 thduddl  |  2021.02.25
Q. Trizol(TRI reagent) 적정 사용량
RNA를 뽑을 때 Trizol(TRI reagent)을 쓰고 있는데 1ml을 넣으라고 되어있습니다.   혹시 1ml보다 적게 넣어서 사용하시는 분들 있나요?? 적게 넣어서 사용한다면 어느정도까지 적게 넣어도 될까요?? (invitrogen꺼 사용합니다.)
회원작성글 서eee  |  2021.02.24
Q. RNA agarose gel 전기영동
RNA를 DNA 전기영동하는것처럼 일반 0.8% agarose gel에 내려 확인을 하였습니다.  대충 투밴드로 보이긴하나 좀더 정확하게 확인하려면 RNA 전용 젤을 만들어 확인하여야 할까요? 일반 agarose gel로는 불가능한가요??
회원작성글 만듀  |  2021.02.22
Q. RNA 확인 GEL
저희 LAB에서는 RNA 측정 후 GEL 확인을 안 하고 cDNA합성 후 바로 REAL TIME PCR을 돌립니다. 그런데 자꾸 HPRT가 튀어서요... RNA확인을 하고 다음 단계를 진행하고 싶어서 고수님들께 질문드립니다. 제가 RNA 측정시 1.9~2.26까지 나와서요...  RNA를 DNA처럼 GEL 확인 후 cDNA합성을 해보고자 합니다. 만약 RNA를 DNA GEL에 SAMPLE을 걸게되면 DNA만들듯이 RNA를 만들게 되면 RNA sample을 2ul 넣고 rnase free water 17ul 넣고 만들면 되나요??? 그리고 agarose gel % 가 1%어야 하나요...???? 저희 lab에서는 dna bioneer 6x loading dye 사용하고 있습니다.
회원작성글 연구원지망생  |  2021.02.21
Q. RNA agarose gel 전기영동
cell line total RNA를 일반 1.5 % agarose gel에 전기영동한 사진입니다. 28, 18S 투밴드로 나와야 하는것으로 알고 있는데 다 degradation된것일까요..?  일반 agarose gel에서 RNA확인하는법에 대해 자세히 알려주실수 있으실까요ㅠㅠ
회원작성글 만듀  |  2021.02.16
Q. RNA extraction에서 RNA-salt-silica membrane 결합 후 elution 질문입니다.
silica membrane method를 활용한 RNA extraction의 마지막인 elution 단계에서 궁금한 점이 있어 질문드립니다. RNA-salt-silica membrane 이 있을거고 여기서 필요한 것은  RNA이므로 elution buffer를 사용하여 각 물질의 이온결합을  끊어주는것까진 이해가 되었는데 그럼 salt와 RNA 모두 column 밑으로 떨어지게 되어 pure RNA라고 할 순 없을 것 같은데 그렇다면 이러한 salt가 이후 실험에서 문제가 되지 않아서 그냥 이런 방법대로 하는 것인가요? 
회원작성글 Minuate  |  2021.01.28
Q. RNA 260/230 순도가 너무 안좋아요 ㅠ
Rna 추출 방법은 Chang 1993 방법을 기본으로 합니다 RNA 뽑을때 시료가 오염된거면 아무리 뽑아도 잘 안뽑힐 수가 있나요!??? 항상 농도는 1000-2000ng/ul 나왔었고 순도도 실수 안하면 나노드랍 에서 2.0-2.2 사이로 잘 나왔구요... 1. 저희 실험실에서 항상 잘 뽑았는데 어느순간 갑자기 안뽑혀요 ㅠㅠ 농도도 300-500ng으로 나오고 순도는 260/280은 좋은데 260/230이 1.5-1.6 사이로 나와요 달라진건 장소랑, 디프리져 냉동고를 옮기면서 10-20분 정도 전원 꺼진거에요 (안에 시료가 있었구요) 혹시 그때 녹아서 문제가됐나 싶기도 하고요...... 아니면 2. C:l 나 에탄올이 오염돼면 그럴 가능성도 있나요? 따로 덜어서 사용하지 않았거든요.. 쓰면서 오염됐을 가능성이 있는지 ㅠ 그외 시약은 전부 다시 만들었어요 주로 식물 잎이나 가지를 마쇄해서 디프리져에 보관해놓고 사용합니다. 3. 근데 또 이해안가는건 지금 한 시료를 30개 정도다시 뽑았는데 28번은 실패하고 2번은 또 제대로 나왔거든요.... 그런거 보면 시료문제는 아닌거 같긷한데.... 추측되는건 1. 시료 오염 가능성 2. C:I나 에탄올 오염 가능성 3. 그외.... 시료를 너무 적거나 많게써서...? (2ml 튜브에 200ug정도 넣습니다.. 근데 500ug 넣어도 실패하네요 ㅠㅠ) 뭐가 클까요 ㅠㅠ 4. 마지막에 에탄올 넣을때 볼텓싱안하고 인벌팅 만 해서? Lici넣고 볼텍싱안하고 인벌팅만해서? (원래 프로토콜은 인벌팅만 하는건데 잘 나왔어요) 5. 순도만 안좋으면 상층액 잘못땄다고 생각하면 되겠는데 농도는 예전처럼 그대로 높게나와어 할텐데 왜 300-500ng밖에 안나오는지 궁금하네요 ㅠㅠㅠ 같은 시료입니다 ㅠ
회원작성글 실험은  |  2021.01.27
Q. silica column RNA extraction에 대해 질문드립니다.
silica membrane RNA extraction 과정중에  cell을 lysis 시켜주고 RNA을 뺀 나머지 molecule을 제거하는 단계에서 궁금한 점이 있어 질문드립니다. 1. cell 안에는 단백질, 인지질, RNA, DNA 등 여러 분자가 있고 RNA, DNA뿐만 아니라 다른 물질들도 (-) charge를 띄고 있어서  salt bridge에 붙을 것 같은데 RNA, DNA만 붙는 이유가 무엇인가요? 2. 최종적으로 RNA-salt-silica 이렇게 membrane에 붙어있을텐데 EtOH을 넣어서 wash를 시켜주면 salt만 떨어지고 RNA만  membrane에 남는 원리가 무엇인가요? 고수님들의 답변 부탁드립니다.
회원작성글 Minuate  |  2021.01.27
Q. RNA A260/A230 ratio가 낮게 나오는 이유가 뭘까요?
cDNA합성하기에 앞서서 RNA를 nano drop으로 측정하였을때, A260/A280은 1.9정도 나오는데,  A260/A230은 1.41, 1.67이 나옵니다. cDNA합성진행해서 qRT PCR해도 될까요? 실험실에서는 A260/A280이랑 A260/A230이 둘다 1.8이상이 나와야된다고 하셨는데,, purity가 1.41 1.67 이렇게 낮게 나오는 이유가 무엇이 있을까요? 유기용매를 충분히 날리지 않았다고 하기엔 꽤 오래 말렸거든요.....아니면 상층액을 딸때 침전물이 따라왔을 가능성이 있을까요? 조언해주시면 감사드리겠습니다.
회원작성글 quddlsms  |  2021.01.27
Q. extracted RNA 를 특정 길이만 분리하는 법이 있을까요?
안녕하세요, Sigma-aldrich 에서 구매한중인 torula yeast RNA 를 사용하려 하는 학생입니다.   당연하겠지만, 아래 전기영동 사진에서 보실 수 있듯이 torula yeast RNA는 여러 길이의 서로 다른 RNA의 혼합물입니다.   저는 5000mer, 7000mer ,9000mer RNA 가 각각 따로 필요한데 혹시 분리할 수 있는 방법이 있을까요?   전기영동으로 하자니 분리하고자 하는 양이 g 단위라서 어려움이 클 것 같습니다.   선배님들의 조언 부탁드립니다.  
회원작성글 목스트레스풀때는목캔..  |  2021.01.26
Q. RNA 추출 서비스 업체가 있나요?
마우스 tissue에서 RNA를 추출하고 실험을 진행해야 하는데 제가 혼자서 감당할 수 없네요... 혹시 RNA를 추출해주는 업체가 있는지 궁금합니다.
회원작성글 난인간  |  2021.01.25
Q. RNA 뽑을때 마쇄된 시료를 얼마정도 넣으시나요?
  RNA 뽑을때 2ml튜브에 CTAB 버퍼 넣기전에 마쇄된 시료 담을때 어느정도 까지 담으시나요? 따로 무게는 안재고 그냥 스푼으로 밑에서 부터 맨처음 표시된 줄 (그니까 0.5 ml 줄에서 밑밑줄) 까지 담는데 rna 가 너무 안뽑혀서요 ㅜㅜㅜ 시료양이 작아서 그런건지 많아서 그런건지 ㅠㅠ 실험안한지가 오래돼서 가물가물 하네요  
회원작성글 좀잘하자아  |  2021.01.23
Q. RNA isolation 실험 중 centrifuge 후 흰색 단백질 층이 너무 두껍습니다.
trizol을 넣고 조직을 파쇄한 후 chloroform을 첨가하여 centrifuge에 돌렸습니다.   층이 세 개로 분리가 되긴 하나 반은 trizol, 반은 흰색의 단백질층으로 나뉘고 위에 정말 소량만 분리가 되었습니다. 이유가 무엇인가요 ㅠ?
회원작성글 지구왕  |  2021.01.21
Q. RNA 전기영동 실험할 때 GEL 제조
RNA 추출하고나서 잘 뽑혔는지 확인 차원에서 전기영동을 한번 내려보고 싶은데요 제가 DNA 전기영동밖에 안해봐서 RNA도 DNA처럼 Agarose 넣어서 gel 만들고 내리면 될까요?  그렇게하면 band가 2개 나오는 걸로 RNA를 확인하는 것이 맞나요..?
회원작성글 v^^V  |  2021.01.13
Q. mRNA 전기영동
안녕하세요   요새 plasmid Vector를 가지고 IVT를 진행해서 mRNA를 합성하는 일을 하고 있습니다   근데 mRNA가 제대로 합성 되었는지 lenth를 확인하기 위해 gel에 loading 해서 보려고 하는데요   우선 지금 환경이 denaturing gel이 없어서 그냥 DNA를 내릴때 쓰는 agarose gel을 가지고 실험을 했었습니다   검색을 해보니 RNA를 내려서 확인할 때 band가 보이는 경우가 있는데 18s 28s 가 보이는 경우는 rRNA를 지칭하는건가요?   그리고 mRNA 를 일반 agarose gel에서도 확인이 가능할까요?   RNA ladder가 따로 있다고 그러던데 그것과 함께 denaturing gel을 이용해서만 mRNA가 보일까요?
회원작성글 Arctrus  |  2021.01.11
Q. chloroform 을 사용할 일이 있어서 따로 분주해서 보관하려는데 괜찮나요??
RNA 추출을 위해 사용 될 chloroform을 50ml tube에 분주해서 보관하려는데 괜찮을까요? 밖은 호일로 감싸고 입구주변은 파라핀으로 봉해놓고, 냉장보관 하려고합니다. 아니면 그냥 작은 유리병에 보관해야할까요??
회원작성글 보로몽  |  2020.12.28
Q. RNA 분리와 정량
RNA 정량값이 너무 낮게나와 질문드립니다   먼저 RNA isolation시 (Thermo) Trizol을 사용했구요 Trizol 제조자 메뉴얼 그대로 실험을 진행했구요   RNA 정량시 (Amersham) ultrospec 2100 pro 사용한 결과  260 nm 0.065 280 nm 0.047   나중에 cDNA 합성시 5ug 정도를 넣어야 하는데 RNA 농도가 너무낮아 희석한것보다 더많은양의 RNA 가 들어가야되는데 뭐가 문제일까요.. 계속해서 컨디션을 잡기위해 몇개씩만 isolation 후 정량을 해보아도 260, 280nm 값 자체가 너무 낮게나오네요.. 고수님들 좀 알려주세요  
회원작성글 animal214  |  2020.12.02
Q. RNA washing 후 drying
안녕하세요! 대학원 신입생입니다. RNA extraction 과정에서 가끔 RNA 농도가 낮게 나올때가 있는데, 아마 ethanol 제거 과정에서 RNA 유실이 있는것 같습니다. 일단 프로토콜은 다음과 같습니다. -75% ethanol 1mL 추가 후, vortexing하고 7500g / 7min / 4C 센트리 -상등액은 따라 버리고, 잔여 에탄올은 syringe needle / pipette tip으로 조심스럽게 제거 -10~15분 상온에서 drying 1. 다른 랩 친구들은 vortexing을 하면 RNA pellet이 갈기갈기 찢겨지기 때문에 센트리를 돌려도 쉽게 떨어질거라고 합니다. Inversion mixing을 하면 덩어리로 펠렛이 나와서 편하다는데, inversion mixing으로도 washing이 충분히 되나요? 2. 상등액을 따라 버린 후 짧게 센트리를 돌려서 (1분가량) 남아있는 에탄올을 pipette으로 조심스럽게 제거해봤었는데, 펠렛이 쉽게 떨어집니다. 더 좋은 방법이 없을까요? 3. E-tube 밑부분에 큰 방울이 맺혀있어서 상온에서 말려도 없어지지 않습니다. 온도를 높여서 말리는 건 RNA degradation이 걱정이 되는데, 더 안정적인 방법이 없을까요?  4. 에탄올이 남아있는 상태로 cDNA 합성을 하고, RT-qPCR을 돌리면 RT-qPCR 결과에 큰 영향을 주나요?? 제가 너무 과민반응하는건지 잘 모르겠습니다. 선배님들 조언 부탁드립니다! 감사합니다!! 
회원작성글 wassupyall  |  2020.11.30
Q. RNA 농도측정 관련
안녕하세요 연구초보입니다 RNA를 cell에서 extraction을 trizol을 이용하였습니다. 그런데 마지막 depc water로 rna를 녹여서 나노드랍을 이용해 측정하려고 하는데 잴 때마다 값이 다르게 나오는 이유를 모르겠습니다. 고수님들의 답변 기다리겠습니다.
회원작성글 브루스웨인  |  2020.11.26
Q. RT-qPCR에서 궁금한 것이 있습니다.
 여러 논문을 읽는 도중 RT-qPCR에서 Poly(A)-purified RNA를 사용했다고 나와 있는데요. rna를 정제했다는 것 같은데 Poly(A)-purified RNA가 정확히 뭔가요? 아데닌만 중합되어 있는 RNA인가요?  
회원작성글 adni  |  2020.11.25
이전  01 02 03 04 5 06 07 08 09 10  다음
실험 회원 등급이란?
실험Q&A 회원등급안내
위로가기
실험 홈  |  실험FAQ
 |  BRIC소개  |  이용안내  |  이용약관  |  개인정보처리방침  |  이메일무단수집거부
Copyright © BRIC. All rights reserved.  |  문의
트위터 트위터    페이스북 페이스북   유튜브 유튜브    RSS서비스 RSS
진스크립트 광고