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웹진 Vol.24, No.10 (2022년 10월) 발간
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 카테고리: 전체 > Cell Biology > etc.
Mol. Biol.-DNA Mol. Biol.-RNA Mol. Biol.-Protein Immunology
Cell Biology Microbiology Plant Biology Laboratory Animals
Omics Chemical biology Bioinformatics Laboratory Equipments
Buffer/Reagent Bioethics Etc.
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질문/투표/프로토콜 등록
Q. Culture-Insert 2 Well dish에 migration 첨부파일
안녕하세요.  혹시 사진과 같은 dish에 Migration을 하신 경험이 있으신 분들 계시면 도와주세요ㅜㅜ  이 dish에 migration을 하고 있는데 protocol이 없어서 헤매고 있습니다.. pue cell로 실험을 하고 있고 seeding 후 starvation 24h을 하고 IGF-1을 처리하여 0h과 2h의 결과를 보려고 하는데 처리후 2시간이 지나고 cell이 아무 변화가 없습니다. 처리 농도는 100ng/ml로 하고 있습니다.  이 dish로 migration하신분들은 실험 순서가 어떻게 되셨나요ㅜㅜ?
회원작성글 oneday  |  05.31
Q. human adipocyte
human origin인 adipocyte있나요?   culture한 뒤에 exosome 추출해보려 합니다. 논문을 보니 보통 patients의 tissue를 이용한 경우가 많았는데 human adipocyte에 immortalised cell line이 있나요?   또한 잘 몰라서 여쭤보는 것은, human adipose derived stem cell은 무엇인가요? 이것도 human adipocyte인가요?
회원작성글 별헤는밥  |  05.30
Q. migration / invasion assay 셀 씨딩양 계산 문의
migration / invasion assay 실험을 하게 되었습니다 upper chamber 에 셀을 뿌리는게 헷갈려 문의 드립니다. 도와주시는 분 없이 전달받은 프로토콜로 해야하는데 셀 씨딩 뿌리는게 헷갈려 부득이하게 문의 드립니다. 1) 1ml로 셀을 희석 후 카운팅을 하니 3.45×10^5 나왔습니다 2) upper 챔버에는 200ul 씩 뿌려야하고 1×10^4 , 2×10^4 , 1×10^5, 5×10^4 이렇게 뿌려야하는데 ㅠ 도대체 어떻게 계산을 해야하나요? 전공자가 아니다 보니 계산에 많이 약해서 ㅠ.ㅠ 기초적인 거지만 문의 드립니다.
회원작성글 나나다다  |  05.29
Q. culture 중 media에 cell을 넣었습니다
실험 중 정신을 놨는지 튜브에 cell을 분주한다는게 실수로 media 병에 분주를 해버렸는데요, 이 media는 다 버려야 하나요? media change 정도는 해도 괜찮지 않을까 싶은데, media 상태에 영향이 갈 것 같기도 하고.. 같은 cell에만 쓸건데 오염된 것으로 판단하고 버리는게 좋을까요? 남은 media가 아까워서 고민되네요
회원작성글 닉네임 짓기 힘드네  |  05.26
Q. 세균의 양과 pH 관련성
영양소에 따른 구취를 측정하는 실험을 계획 중입니다. 구취가 나는 이유가 세균에 의한 부패이라고 생각하는데 세균의 양에 따라 pH가 변하나요? 만약 변한다면 pH 시험지 로도 확인 가능한가요?
회원작성글 하위우ㅣ  |  05.26
Q. autocleave 돌린 50% glycerol은 어디에 보관해야 될까요…?
선배님께서 일시키시고 연락이 안되서요 auto 돌린 후 50%glycerol은 오븐에 그냥 보관하고 선배님 기다리면 될까요?
회원작성글 생명학도  |  05.23
Q. **수지상 세포에 exosome treat 농도의 문제를 해결하고자합니다.
이번에 실험을 하면서 문제가 생겨서 질문을 드립니다. 저는 75T flask에 10ml씩 Dendritic cell을 배양 중입니다. 이번에 10ml DC에 엑소좀을 50ug/ml로 처리하려고하는데 제 엑소좀의 농도가 130ug/ml, 230ug/ml이라 10ml에 처리하려고 하니 엑소좀만 3ml넘게 들어가게되어 전반적인 처리 농도가 바뀌는 문제가 생겼습니다.... 혹시 저랑 비슷한 실험을 하시는 분이 있다면 답변주시면 정말정말 감사드리겠습니다...!!! * 이미 추출한 엑소좀을 한 번 더 농축시키시는건지, 세포 배양시 사용하는 배지로 엑소좀을 현탁하시는 것인지 어떤 방법을 사용하시는건지 알려주시면 감사하겠습니다..
회원작성글 실험 왕왕초보  |  05.10
Q. 응고된 혈액내 적혈구 분리 방법
1) 피가 상온에서 굳으면서 적혈구의 상태가 어떻게 변화하는지 관찰하고 싶어서 굳은 혈액을 tween 80이나 NaCl을 이용해 만든 생리식염수로 굳은 혈액을 용해해서 샘플 안에 있는 적혈구를 관찰하려고 했는데 debris가 많이 생기기도 하고 적혈구가 안보여서 계속 실패합니다..ㅜㅜ 혹시 관련 연구 경험이나 아이디어가 있으신 분이 계시다면 조언 부탁드립니다   2) Plasmin을 구입해서 적혈구의 분리를 시도해볼까 하는데 적당한 농도가 1.0uunit/ml이라고 하더라고요 해당 농도로 만든 plasmin을 혈액에 담구기만해서 용해시키면 될지 의견 여쭤보고싶습니다!   관련 연구 경험이 있으신 분들 도움 부탁드립니다ㅜㅠ
회원작성글 베어스판다  |  05.10
Q. Mast cell과 basophil을 사용하는 이유
안녕하세요 알레르기 반응 실험을 보려고 하는 대학원 석사생입니다. 여러 논문을 찾아보던 도중 주로 mast cell을 사용하고 rbl-2h3 cell도  사용하던데요(mast cell은 잘 기억이 안나는데 rbl은 beta-hexo 어쩌고 효소 방출량을 측정햇던걸로 기억합니다.) 알레르기 반응을 보는데 이 두 cell을 사용하는데 어떠한 차이가 있어서 나눠서 혹은 같이 사용하는 건가요?
회원작성글 YTB  |  05.09
Q. FACS 항체 및 아이디어 문의!!!!
1. 먼저 flow cytometry 용 secondary PE를 구매하려고 합니다. https://www.biolegend.com/en-us/products/pe-goat-anti-mouse-igg-minimal-x-reactivity-1418 minimal x-reactivity 라고 적혀 있는건 어떤 의미인가요?   2. 두번째는 이중항체로 dual positive를 확인하고 싶습니다. 암세포의 antige A와 면역세포의 antigen B와 결합하는  anti A-anti B 이중항체입니다. 두 세포를 coculture후 이중항체를 treat하여  A와 B 동시에 binding 하는 것을 확인하고 싶은데,   이중항체로 두개의 cell이 뭉치니깐 doublet을 gating해볼까 했지만 사실 이건 너무 이론적인 얘기 인것 같고 A와 B 동시에 binding 하는 것을 어떻게 확인하면 좋을까요..?   해보신적이 있으신가요??
회원작성글 cjdmadldi  |  05.04
Q. DCFDA ROS assay 도움 요청합니다!!
안녕하세요? 최근 DCFDA 시약을 이용하여 H2O2와 약물을 처리하고 ROS를 보는 실험을 진행중입니다. 그런에 H2O2를 1mM, 1.5mM 로 4시간을 처리했음에도 불구하고 control과 차이가 없거나 오히려 낮은 형광 값이 나타납니다. 측정은 Tecan plate reader를 형광 파장에 맞추서 사용합니다. bottom reading이 안되는 제품이라서 top reading에서 Z값 스캔 후 진행하기도 해봤고 cell lysis 시켜 solution 상태에서 top reading으로 측정도 해보았습니다. plate는 당연히 falcon 96 well black clear bottom plate를 사용했구요. lysis 전이나 후나 결과의 양상이 비슷합니다. 간혹 plate reader를 사용하면 잘 되지 않아 Facs를 추천하는 글을 많이 보게 되는데 저희는 어떻게든 plate reader로 측정해내야 하는 상황입니다.  경험이 있으신 연구자 분의 조언을 구합니다. 댓글도 감사하고 nanniceguy@hotmail.com으로 연락처 남겨주시면 더욱 감사하겠습니다.
회원작성글 귤여섯개  |  05.03
Q. flow cytometry control (GFP signal & cell size) 구분을 확실히 하고 싶어요 첨부파일
선생님들 안녕하세요. 오랜만에 또 조언을 얻고자 질문을 남깁니다. 요즘 Flow cytometry를 진행중인데, 제가 원하는 목적은 GFP를 발현하는 세균에 감염된 Host cell의 population을 확인하고자 합니다. 그 이전에 예비 실험으로 control sample의 population을 확인하였습니다. 실험은 아래와 같은 샘플을 이용하였고 전부 control입니다. 1. GFP를 발현하지 않는 균주 (Negative) (1-2 um) 2. GFP plasmid를 가지고 있어서 발현하는 균주 (Positive) (1-2 um) 3. 감염되지 않은 Host cell (Negative) (11-15 um) 제 생각에는 우선 크기로 bacteria 와 host를 구분하고 GFP를 이용하여 infected host를 찾으면 될 것이라고 생각했습니다. 하지만 첨부 파일에 나와있듯이, 각 population의 구분이 너무 애매하고 약간씩 겹치는 현상이 보이는데, 이제 막 Flow cytometry를 시작하여서 어떤 부분을 수정해야하는 지 궁금합니다. 혹시나 선생님들 중 경험이 있으신 분들은 알려주시면 감사하겠습니다.   좋은하루 보내시기 바랍니다.  
회원작성글 ghtlr21  |  05.02
Q. 유전자/단백질 표기문의
안녕하세요 유전자 및 단백질 표기에 대해 문의드립니다.  제가 알고 있기에 단백질은 대문자, 유전자는 이탤릭체로 사용하는데  기울임 및 소문자 사용도 유전자가 맞나요?  첫번째 대문자와 소문자도 유전자를 의미하나요?  유전자를 transfection한 세포를 명시할때는 이탤릭체 or 소문자 사용아닌가요?    예를 들면,  ABC 유전자라면  Abc siRNA  ABC siRNA  Abc overexpression vector cells 이 3개가 다 맞는건가요?    답변 부탁드립니다 ㅠ
회원작성글 듈리  |  05.01
Q. 헌팅턴 in vitro model 질문이요
안녕하세요 헌팅턴병 in vitro model을 알아보고 있는데, 많은 논문들을 보니 Yac128 micr model의 striatum영역으로 primary culture를 진행하여 NSC를 확보 후 뉴런으로 분화시켜 진행하더라구요. 실제로 제가 primary culture를 진행할 환경은 아니라 구매를 하고 싶은데 혹시 구매가 가능한 사이트가 있을지... 더불어, 제가 헌팅턴으로 확인하고자 하는분야는 면역관련이라 염증성 사이토카인 분비에 대해서도 확인을 할 예정인데, 그렇다면 헌팅턴병 질환의 특성을 가진 면역세포(macrophage, microglia)를 구축하거나 구할 수 있는 방법이 있을까요?? ㅠ 의견 부탁드립니다
회원작성글 대학원생n  |  04.28
Q. shRNA mini prep
mini prep을 진행하고 있는데 purity는 좋은데 농도가 안나오는 경우도 있고 purity도 안좋은 경우도 있는데 같은 protocol대로 진행하였는데 같은 sample이어도 잘나오는경우가 있고 안나오는 경우가 있을까요? 그리고 mini prep같은 경우는 protocol이 복잡한 경우는 아니라 실수한 부분도 없었는데 purity가 좋지 않은 이유는 무엇인지 잘 모르겠습니다. tip안닿게도 해보고 하나하나 tip바꾸면서도 해보고 신중하게 해보았는데도 결과가 불규칙적이라 너무 답답하네요.. ㅜㅜ  purity는 좋은데 농도가 안나오는 이유와 purity가 안좋게 나오는 이유에 대해서 알려주세요,, 빨리 고쳐서 좋은 실험결과 내고 싶은데 맘처럼 안되네요ㅜ
회원작성글 iceage  |  04.28
Q. 줄기세포 등 세포를 18G 니들로 빨아들여도 괜찮은가요?
줄기세포 등 세포를 실린지를 이용해 18G 니들로 빨아들여도 괜찮은가요?
회원작성글 pseudomona..  |  04.26
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