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질문/투표/프로토콜 등록
Q. 갑자기 생장이 느려진 박테리아......왜그럴까요ㅠ
R2A에서 1/100 dil 후 원래 od 0.3까지 4-5시간이면 자랐던 E. faecium이 어떤 방법을 써도 O/N을 해도 0.2까지밖에 안자랍니다... 이 이유를 아시는 분 혹시 있을까요? 벼래별 용은 다 썼는데 growth가 회복되지 않습니다.... 도와주세요 1. 신선한 R2A 사용 2. stock을 agar에 긁은 후 콜로니 뜨면 broth에 키운 후 dilution 3. stock을 broth에 키운 후 broth에 dilution 4. airation 잘 될수있게 큰 플라스크에 배양 위 방법등을 모두 써도 전처럼 그로스가 돌아오질 않습니다....ㅜㅜㅜㅜㅜㅜ   추가로 BHI라는 고영양 배지에서 배양했을 시 OD값은 높아지긴한다만,  원래는 3시간이면 자라던 게 지금은 6시간 이후부터 반응이 올 정도로 느리게 자랍니다..... 이유를 아시는 분 계시면 알려주세요 ㅠㅠㅠㅠ  
회원작성글 붕어빵슈크림  |  08.16
Q. Bradford Protein 단백질 정량하는법
lab실 마다 정량 방법이 달라서... Bradford로 어떻게 정량해야하질 모르겠어요. 아직 아무도없어서 포로토콜 잡아가는단계되요.. 어떻게 하면  std와 sample을 어떻게 처리해야할지알려주세요. 너무 답답해요... 이해도 잘안되고요 
회원작성글 하윰  |  08.16
Q. Aptamer SELEX 관련
이제 막 대학교 입학한 생명과학 초짜입니다ㅜㅜ RNA Aptamer 관련해서 관심이 생겨 조금 알아보는 중에 aptamer를 SELEX 하려면 우선 DNA library가 있어야 그걸로 RNA로 전사시켜서 압타머를 선별하는 걸로 대충 이해했는데 여기서 DNA library는 어떻게 얻는 건가요? 아무 세균에서 RNA 추출해서 cDNA 합성시킨 후에 sequencing 하면 되는 건가요..?
회원작성글 bb0  |  08.16
Q. PCR nonspecific band 외
안녕하세요? 실험 중 궁금한 것이 생겨 질문드립니다. PCR 진행 후 Gel을 Run 했을 때 나오는 Nonspecific bands을 발견하였습니다만, 이것들이 문제가 되는 근본적인 이유가 무엇인지 궁금해졌습니다. (Nonspecific bands의 존재가 Primer의 Design이나 Temperature setting의 문제를 시사할지도 모른다는 것은 이해했습니다.) 만약 원하는 Amplification target이 명확하게 잘 보인다면, 이를 elusion하여 사용하는 추후의 실험 과정(Cloning)에서 Target과 멀리 떨어진, 상관 없어 보이는 Nonspecific bands는 어떤 영향을 줄 수 있을까요?  
회원작성글 팡피링  |  08.15
Q. Virus plaque assay agarose 제거
안녕하세요. 이번에 처음으로 low melting agarose를 이용한 virus plaque assay를 진행했는데요. CMC media를 사용하면 media를 흡입하여 제거하면 끝이지만 agarose는 물리적 충격을 주어서 떨어뜨려야 한다고 배웠습니다. 실제로 진행하니 잘 안되더라구요. formaldehyde로 fixing 한 후에 2hr을 두고, 제거하려다보니 잘 안되어서 suction기로 끝부분을 살짝 띄워서 제거하는 방식으로 진행하였습니다. 혹시 잘 떨어뜨리는 노하우를 가지고 계신분 도와주실 수 있으신가요? 그리고 CMC media보다 agarose를 사용했을 때 plaque 형성 기간이 길어지는 것 같은데 맞는지도 궁금합니다.
회원작성글 rlaeheod  |  08.15
Q. Miniprep 한 벡터 transformation이 안됩니다.
pDS132 계열 벡터를 S17-1 λ pir에 transformation하려 하는데.. 이 벡터에 cat이랑 nptI 유전자를 넣었습니다.. 이 벡터를 DH5a λ pir 에 transformation 했을 때, colony가 잘 떴지만, S17에서는 하나도 뜨지 않았습니다.. (heat shock transformation 하였습니다) C-cell 문제인가 싶어서 pRK415 벡터를 시험삼아 transformation 했는데 콜로니 잘 나왔구요.. 1. Km 100, Cm 20 plate 를 사용중인데 혹시 S17이 두 항생제에 민감한지.. 2. Heat shock이 잘 안되어서.. Electroporation을 하려 하는데 이 방법으로 콜로니 얻을 수 있는지 여쭤봅니다.
회원작성글 창의적인사람  |  08.15
Q. cell differentiation media change cell loss
세포 분화중에 분화 배지 교체할 때 cell loss가 일어나는데 이게 자연스러운 현상인가요..? 좀 많이 loss가 되는 것 같아서요..
회원작성글 별헤는밥  |  08.14
Q. Doubling time 계산
아래자료로 더블링 타임 구하면 16.3 시간이 나오는거 맞나요?? 36시간 300 48시간 500 60시간 800 72시간 900   단위 콜로니 수   점들 그래프에 찍고 접합직선계산하니 0.43이 나왔습니다
회원작성글 judikeke  |  08.14
Q. In-gel digestion 해보신 계신가요ㅠㅠ
실험 초짜 학부연구생입니다ㅠ 이번에 교수님께서 In-gel digestion이란거 해보라고 하시는데 주변에 알려줄 사람이 없습니다.. 도와주세요ㅠㅠ
회원작성글 jyun1009  |  08.14
Q. Gelatin zymography 도와주세요ㅠㅠㅠㅠㅠㅠㅠ band가 아에 없어요,,,
안녕하세요 zymography를 처음 해보는 석사생입니다ㅠㅠ 도움 받을 분이 없어서 혼자 진행해봤는데요,, Gelatin zymography를 통해서 MMP-9의 활성을 보려고 했는데 밴드가 아에 뜨지를 안습니다,, Sample을 prep은 먼저 6웰 플레이트에 A549 cell을 깔고 부착후 starvation하였고 후에 cell을 자극하고 시료를 처리하여 conditioned media를 모았습니다(starvation부터 모든 media는 SF media를 사용했구요) 이 샘플로 MCP-1 등의 ELISA 측정을 하였고 최종적으로 zymography를 수행했습니다,,!ㅠㅠ Zymography의 모든 젤과 시약은 invitrogen novex제품을 사용했는데요, Conditioned media를 LDS sample buffer(4x)로 4배 희석시켜준 후에 로딩하여 90V로 3-40분 정도 전기영동하였고 후에 renaturing buffer(1x)에 30분, developing buffer(1x)에 30분 상온에 둔 후 새로운 developing buffer로 교체하여 37도에서 overnight 했습니다. 후에 wash 3회 진행하였고 simplyblue safestain으로 1시간 gel 염색 후 d.w로 1시간 탈색하였습니다. 근데 아에 밴드가 뜨질 않아요,, 염색 후에도 밴드가 안보였으나 그대로 진행해봤는데,, 왜 안뜨는걸까요?,,, 도와주세요ㅠㅠㅠㅠㅠㅠ
회원작성글 sjsj3636  |  08.13
Q. 아세트 아미노펜, 아스피린 합성
아스피린 합성 실험과 아세트 아미노펜 합성 실험에서 둘 다 프로스타그라딘의 생합성을 억제해서 통증 유발을 줄이는데 아스피린만 소염작용이 있는 것을 구조적 차이로 설명할 수 있는 건가요?? 고등학생인데 둘 다 실험을 진행해 봤는데 실험으로는 이를 알아 볼 수 없는지 궁금해서요...!!
회원작성글 medddd  |  08.13
Q. '에틸렌이 동물의 노화에 미치는 영향 실험'에 관한 질문을 드리고 싶습니다.
안녕하세요? 분자생물학자를 꿈꾸고 있는 17살입니다. 최근에 식물과 동물의 공통적인 노화 원인을 알아보고자 선행연구를 조사하다가 그 자료가 많지 않음을 알고 실험에 대한 조언을 얻고자 이렇게 질문을 올리게 되었습니다.    지금까지 실험을 통해 해결하고 싶은 질문은 '식물 노화 호르몬인 에틸렌은 동물의 노화에 어떤 영향을 미치는가?'입니다. 에틸렌은 식물의 세포막을 통해 침투되며 호흡 과정에서 발생한다는 점을 사용해 효모나 선충 등의 동물에게 투입하여 그 경과를 관찰하고자 합니다. 에틸렌을 투입한 동물과 아닌 것, 투입한 에틸렌의 농도에 따라 동물의 노화에 영향을 주는지 관찰하는 것이 목표입니다. 동물의 노화 원인인 텔로미어의 마모가 식물의 노화에는 미미한 영향을 끼치는 원인이 아직 규명되지 않은 점, ATM의 활성 정도가 높을수록 식물 노화가 촉진된다는 점이 동물 세포가 활성산소에 의해 세포가 손상되었을 때 노화된다는 점과 유사하다는 것 등 이 실험의 심화 탐구로 알아보고 싶은 것이 많습니다. 그러나 실험을 위해 에틸렌을 어떻게 어떤 동물에게 투입해야 할지, 에틸렌의 상태는 어떻게 해야할지를 결정하지 못하고 있습니다. 호흡 과정에서 에틸렌이 형성되어 에틸렌 수용체가 물질을 수용한다는 것은 찾았으나 노화에 어떤 영향을 미치는지, 동물에 어떻게 수용시켜야 할지 등 실험에 구체적인 요인을 결정할 자료를 제 수준에서는 찾기 어려었습니다.  혹시 실험에 사용할 동물의 종류나 에틸렌 주입 방법을 결정하는 데에 조언해주실 수 있나요? 감사합니다.
회원작성글 김규연  |  08.13
Q. Transfer 도와주세요ㅜㅜ
트랜스퍼를 하는데 37kDa짜리는 혹시 100V, 2시간을 하면 다 넘어가 버리나요? 오늘 두개의 멤브레인을 디텍 했는데 샘플이 만약 6개라고 하면 loading control이라서 6개가 다 나와야 정상인데 일부만 디텍 된다거나 아예 나오지가 않습니다 ㅜㅜ 혹시 37kDa 크기는 보통 어느정도 진행해야 하나요? 그리고 130kDa정도의 protein도 저정도면 너무 오버 된 걸까요? 130kDa도 안 나와서요ㅜㅜ(130kDa은 background는 뜨는데 밴드가 안 떠요) Target protein이 250kDa이라서 100V 2시간 해주고 37,100(130보려고 100에서 잘라줘요)부분만 잘라서 붙여주는데 일부만 보이거나 아예 안 보여요ㅠㅠ (Target protein은 그래도 보이긴 보임) 젤은 10% 사용하고 있습니다! 바뀐점은 로딩 양이 20에서 절반으로 줄은 점 밖에 없는데 이게 요인이 될 수 있나요? 만약 transfer 볼트와 시간이 문제라면 어느정도가 적당 할까요? 단백질 로딩 양도 20으로 해야 할까요? -제가 웨스턴 한 지 별로 안 돼서 정말 혹시나 두 멤브레인을 바꿔서 ab를 붙였나 생각도 해봤는데요. 트랜스퍼 후 membrane에 윗 부분(여유가 있는 부분)쪽부터 크기가 커짐->작아짐 아닌가요?
회원작성글 쿵쿠따리쿵쿠따  |  08.13
Q. 시퀀싱 주문 실수
석사 한학기차 신입 대학원생입니다. 시퀀싱을 보내는데 Pcr product와 프라이머를 동봉하여 보냈습니다 Basic seq이었고 샘플 농도와 프라이머 또한 넉넉하게 보냈습니다 그런데 결과를 확인 했는데 평소 보던 결과와 달라 확인해 보니... 샘플 종류를 pcr product 가 아닌 plasmid로 선택 하여 주문을 했더군요.. 이럴 경우 시퀀싱을 다시 보내야 하는 거겠죠.. 처음엔 샘플 농도가 너무 낮아서 그런거라는 생각이 들었는데 다시 확인해보니 아니더군요.. Pcr product의 경우 결과 확인할때 snap gene 에서 보면 forward, reverse 시작점이 정해져 있는데 그게 아닌 결과가 나와서... Plasmid seq은 보내 본적도 없어서 어떻게 봐야 할지 모르겠습니다.. 혹시 이 경우 law 데이터에서 시작점 설정을 다시 하면 데이터를 볼수 있을까요.. 혹시 이런 경험이 있으신 분이 있는지..ㅠㅠ 다시 시퀀싱을 보내는 방법 밖에 없는지 어떻게 해야 하는지 모르겠습니다..ㅠㅠ
회원작성글 Ehqtf  |  08.13
Q. pcr 관련
  안녕하세요. 분자쪽은 아무것도 모르지만 실험을 진행하게 된 예비 대학원생 입니다.!! 제가 DNA까지는 뽑았는데 PCR을 진행하려 여러 프로토콜을 찾아봤는데 궁금한게 있어서 질문합니다.  master mix 2x 가 있으면 프라이머(F,R), 주형DNA,뉴클리아제프리워터 만 있으면 되는거 맞나요?   만약 맞다면 마스터 믹스는 2X그대로 사용하는게 아닌 몇배 희석해서 사용해야하나요?  
회원작성글 닭튀기는꼬꼬  |  08.12
Q. TSB 배지 제작 중에서..
카테고리는 좀 무시해주세용 ㅠㅠ   TSB 배지를 제작하려고 하는데요   분말을 구매해서 제작하려고 합니다   제작 과정에서 고압증기멸균기(오토클레이브)가 필요한데   학교에 오토클레이브가 없어서 무균작업대에서 핫플레이트를   이용하여 배지를 제작해야한다는데    고압증기멸균기에서 121°C로 15분간 멸균하려 했으면   핫플레이트는 어느 정도 온도에서 몇 분 정도 해야하나요?   혹시 시간이 아니라 직접 판단해야한다면   분말이 어떤 상태라고 판단 될 때까지 핫플레이트에서 멸균해야하나요??
회원작성글 afffdfdee  |  08.12
Q. Phospho ser/thr 선택방법
제가 붙이려는 antibody가 ser/thr이 있는데 이게 무엇인지를 알겠는데 어떠한 것을 보고 선택하는지 모르겠습니다. 아무리 찾아봐도 ㅜㅜ 모르겠어서 질문합니다.ㅜㅜ 제가 셀에 처리한 시약의 data sheet를 보니 source에 ser21-lys166이라고 있는데 그럼 이 셀의 protein을 웨스턴하고 anti를 붙일때는 phospho-ser를 붙이는게 맞나요? 위 내용이 맞다면 다른 시약은 아무리 찾아도 ser/thr에 대한 내용은 없고  The human EG-VEGF gene codes for a 105 amino acid polypeptide containing an N-terminal signal sequence of 19 amino acids. Recombinant Human EG-VEGF is a 9.6 kDa protein consisting of 86 amino acid residues, including ten cysteine residues that potentially form five pairs of intra-molecular disulfide bonds. 이렇게 적혔있는데 어떻게 해야될지 모르겠습니다. 제발 도와주세요!!!!    
회원작성글 oneday  |  08.12
Q. 96well 기포 제거 방법
96well이나 분주하고 나서 기포가 생기는데 팁으로 찔러도 찔리지도 않고 터지지도 않더라고요.ㅜㅜ 분주후 기포 없애는 방법좀 알려주세요  
회원작성글 oneday  |  08.12
Q. Bradford Protein 이후..
막 대학원을 시작하는 학생입니다.. 1mg/ml BSA STOCK 을 표처럼 시약을 넣어서 표준곡선을 그린후 BSA (ug/ml) 0 2 4 6 8 10 12 14 D.W(ul) 800 798 796 794 792 790 788 786 Reagent(ul) 200 200 200 200 200 200 200 200 Total(mL) 1 1 1 1 1 1 1 1 sample은 넣어 sample  5ul D.W(ul) 795ul Reagent(ul) 200ul Total(mL) 1 96well에 595nm로 흡광도를 측정하여 y = 0.0555x + 0.2786이 나왔는데  sapmle x 값이 6.94가 나왔습니다.  근데왜 6.94x2를 해서 13.88로해서 해야하는건지 이해가 안되서요..   5x sample buffer  D.W   total 13.88 4 2.12   20ul   13.88로해서 왜 western loading 해야하나요..? 정말 답을 모르겠어요
회원작성글 하윰  |  08.12
Q. LB Plate위에 Liqud TB에 키운 Cell spreading 해도 될까요?
LB Plate위에 Liqud TB에 키운 Cell spreading 해도 될까요? LB Plate (+amp)에 Liquid  TB에서 키운 Cell spreading해도 별 문제없죠?   단순히 rich media라 그럴 것 같은데요!
회원작성글 ㅁㅇㄹ  |  08.12
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