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질문/투표/프로토콜 등록
Q. 3T3-L1 Oil Red O staining cell 오염 첨부파일
안녕하세요 3T3-L1으로 Oil Red O 진행하는 학생입니다. 여러 논문을 바탕으로 실험을 진행했는데 세포 모양이 너무 이상해요.. 혹시 이런 경험 있으신분 계시면 답변 부탁드립니다.  
회원작성글 kimmmmmm  |  2021.05.10
Q. 안녕하세요. Clonogenic assay를 혼자 진행해보려고 하는데 질문이 있습니다.
안녕하세요    clonogenic assay를 nature protocol 참고하면서 진행해보려고 하는데   질문이 있습니다.    1. 6 well plate의 각 well에 HeLa cell를 1,000 cell씩 seeding해도 괜찮은지 여쭙고 싶습니다. protocol에는 딱히 cell의 기준이 있지는 않더라고요.    2. cell을 seeding한 뒤 다음날에 Hydroxyurea를 처리하고(0, 20, 40, 60, 80, 100 단위는 uM), 2주 정도 지나면 colony를 crystal violet으로 staining해서 counting 하려고 하는데 괜찮은지 여쭙고 싶습니다.    3. Clonogenic assay 관련해서 참고할만한 자료도 추천해주실 수 있으신가요?    감사합니다. 
회원작성글 레비나스  |  2021.04.26
Q. 3t3 분화 중 mdi, insulin, fbs 역할
안녕하세요 3t3 관련 논문에서 분화 과정 중  Mdi, insulin, 10% fbs 을 각각 넣는데 그 역할이 뭔지 궁금해 질문 남깁니다.
회원작성글 Padx  |  2021.04.11
Q. 1M 로 만드는법 알려주세요ㅠ
10% cpc 만들건데  용량은 각 20ML 필요합니다. Na2HPO4 분자량 141.96   NaH2PO4 분자량 119.98     제 계산으로는 Na2HPO4 2.84G+DDW 20ML                      NaH2PO4 2.40G+DDW 20ML                                이 계산이 맞나요?
회원작성글 우짜라  |  2021.04.02
Q. H&E염색으로 보셨을때 연골분화가 잘 진행되었습니까? 첨부파일
alican blue염색해서 연골분화를 추가로도 보려고 합니다. H&E로 보셨을때 어떤가요? 분화가 되었을까요? 전문가들의 의견 궁급합니다.ㅠ
회원작성글 ojb  |  2021.03.30
Q. 항생제 계산
50mg/ml 농도의 Amp을 3ml에는 얼만큼 따줘야 되나요..? 그 계산 결과가 3 마이크로리터 라는데 왜 3 마이크로리터 인지모르겠어요ㅠㅠ
회원작성글 vmomov  |  2021.02.24
Q. 염증 질문이요
ProInflammatory 와 Anti-inflammatory 차이가 뭔지 알수잇을까요? 그와관련된 유전자는 어떤게잇나요?
회원작성글 kkyymm97  |  2021.02.24
Q. 연골 재생 Cartilage regeneration 관련 slide 제작 업체 추천 부탁드립니다.
안녕하세요 대학병원 연구실에서 cartilage regeneration 관련 연구를 하고 있습니다. MSC 및 Growth factor 여러가지 사용해서 유도 하고 있구요, 본원 slide 제작해주는 곳이 너무 quality 가 떨어져서 외부 업체에 부탁드리려고 합니다.   H&E/ S-O / MT / Td 염색 그리고 Collagen type 1,2 에 대한 IHC 염색 slide 제작을 하려고 하고, 가능하다면 분석도 의뢰드리고 싶은데 혹시 추천 하시는 업체가 있을지요 ?   감사합니다.  
회원작성글 Orthodoc  |  2021.02.16
Q. 이게 말이 되는 결과인가요? 어떻게 생각하시나요
  안녕하세요. 실험결과가 이게 말이 되나 해서 여쭈어보고자 질문드립니다. D0 에 12000 (12K) 개의 HCT116 암세포 seeding 한 후 (in 10 % FBS), D1 부터 D4 까지 serum starvation 시켰습니다 (in 1 % FBS). HCT116 은 doubling time 이 24 시간 입니다. D0~D1 까지 12K 에서 24K 가 됐다 치더라도, D4 에서 100K 가 된다는게 말이 되나요?   1 % Serum starvation 됐을 때 doubling time 이 어느정도 낮아지는지 확인해보신 분 계실까요?     감사합니다.
회원작성글 young9  |  2021.02.08
Q. 공부에 도움을 좀 받고 싶습니다.
현재 대학원생으로 지금까지 랩에 확립되어있는 pathway와 유전자들에 대해서만 공부를 하고 있었습니다.  그런데 이제 새로운 pathway에 새로운 marker gene들을 찾아서 직접 실험을 설계하고 공부해보라고 하시는데... 어떻게 시작을 해야할지 감이 안와서 여쭤봅니다.  이미 저희 랩에 확립되어있는 gene과 관련된 pathway들은 해당 gene을 keyword로 논문을 찾아보거나 하는 식으로 공부를 했었는데 아예 새로운 pathway에서 유전자를 확인을 하려고하니 pathway를 공부할 수 있는 사이트나 방법이 있으면 조언주시면 감사하겠습니다.  다들 하시는 연구 결과 잘 나오시길 바랍니다. 
회원작성글 kameya  |  2021.02.04
Q. RAW 264.7 cell의 Osteoclast 분화 유도시 estradiol 처리할때 배지 관련해서 도와주세요ㅠㅠ
  안녕하세요,  지금 RAW264.7 cell를 Osteoclast로 분화시켜서  positive control로 estradiol을 처리하여 분화 억제효능을 확인하는 실험 진행중입니다.  계속 실험 진행할때 estradiol의 효과가 안나타나서 고민하던차에  phenol-red와 일반적인 FBS에서 estrogen 성분 또는 유사활성이 나타난다는 글을 확인했습니다.  그래서 이번 실험할때 Dextran-Charcoal 처리된 FBS가 포함된 phenol-red free DMEM으로 treat 진행하려고 하는데요.    여기서 궁금한게, 1) 계대 및 seeding 진행할때도 전부 DC-FBS가 포함된 phenol-red free 배지를 이용해야 하는 지 2) 그 phenol-red free 배지는 꼭 alpha-MEM을 사용해야하는건지, DMEM이나 RPMI여도 상관없는지 궁금합니다.    지금까지는 RPMI1640배지에 배양해서 alpha-MEM 배지로 seeding하였고, alpha-MEM 배지에 estradiol (sigma, 100% EtOH 용해 후 0.2um filter) 희석하여 세포에 분주하였거든요    혹시 osteoclast 분화에 사용할 모든 RAW264.7 cell은 세포 thawing시부터 DC-FBS, Phenol red free 배지를 이용해야할까요??  지금 freezing media는 Cellbanker1 (ZenoAQ, cat#11888)을 사용하고있는데, 동결시에도 phenol-red free 배지를 이용해야할까요??    물음표살인마가 된 거같아서 죄송하네요 ㅠ.ㅠ 항상 감사합니다! 
회원작성글 ㅠ.ㅠ!!  |  2021.02.03
Q. Cell proliferation 질문이요~
저희 랩에서 Cell proliferation에 CCK-8을 이용합니다. CCK-8 이외에도 MTT를 이용한다고 하는데 이것 이외에도 사용되는 시약이 무엇이 있고 이 시약의 특성에 대해 알고싶습니다.
회원작성글 옆실험실  |  2021.01.28
Q. T cell activation 시켜보신 분 계신가요
안녕하세요 면역세포 쪽은 다뤄본 적도 없다가 갑작스레 맡게 되었는데 여쭤볼 곳도 없고... 실험 결과가 자꾸만 이상하게 나와서 질문 올려봅니다ㅜㅜ   교수님께서 t cell이 분비하는 cytokines의 변화를 보고 싶다고 하셔서 T cell line인 Jurkat을 키우고 있는데요 cytokine을 분비시키기 위해 PMA와 ionomycin을 각각 16nM과 2uM 농도로 배지에 첨가해 주었습니다. 시약을 첨가한 배지는 24시간 후 일반 배지로 갈아주었고 3일 간 배지 교체 없이 culture했는데요, 세포를 회수해 PCR을 해보면 activation 시킨 실험군이 activation 없이 같은 기간동안 일반 배지만을 사용해 키운 control보다 전반적인 cytokine 발현량이 낮습니다ㅜㅜ 몇 번이나 재실험을 했는데도 마찬가지네요. activation 방법에 문제가 있을까요?   그리고 jurkat을 키워보신 적이 있는 분들께 질문 드립니다만 이전에 시약을 첨가한 배지에 72시간 키운 jurkat 세포는 송이를 이루지 않고 단일 세포로 부유했는데요, 24시간 처리 후 일반 배지로 바꿔주었을 땐 증식하여 송이를 이루더군요. 72시간 처리했을 때 단일 세포로 떠다니던 건 activation 되었을 때의 특성일까요? 아니면 단순히 세포가 죽었기 때문일까요.. 그떄는 control의 cytokine 발현이 더 높게 뜨긴 했습니다. PMA/ionomycin에 독성이 있다고 하여 처리시간을 24시간으로 줄인 것인데 그게 잘못된 판단이었던 건지.....
회원작성글 9383  |  2021.01.12
Q. Sample stock solution
안녕하십니까 선배님들 저는 현재 대학원에서 천연물 샘플을 이용한 항암활성 평가를 하고 있습니다. 주로 D.W. 나 DMSO에 천연물 분말을 녹여서 사용했었는데요 한 선배님이 어차피 DMEM에 샘플 stock 희석해서 처리하지않냐 그럼 그냥 DMEM에 녹여서 쓰면 안되냐 라고 이야기하시는데 혹시 이렇게 실험 해보신분이 계실까요? 가능한지 이렇게 실험해도 괜찮은지 알아보고 싶은데 방법을 몰라서 여쭤봅니다.  
회원작성글 kameya  |  2020.12.22
Q. 3T3-L1 분화 실험
안녕하세요.  3T3-L1 cell 분화 실험을 하던 중 궁금한 점 있어 자문을 구합니다. 현재 분화키트를 사용하고 있으며, kit 프로토콜에 따르면 분화배지(IBMX, insulin등 포함)를 3일간 처리를 한다고 합니다.  이후 배지는 유지배지(insulin)로 교체하며, 완전하게 분화할 때까지 2일 주기로 배지를 교체한다고 합니다.   제가 키우는 3T3-L1은 분화가 완전히 되기 전에 세포가 몇몇 죽는 것으로 보이며, 또한 최종적으로도 분화가 잘 이뤄지지 않아 고민입니다. 1. 그래서 분화배지를 더 오래 둘까하는데 분화기간을 늘려도 괜찮을까요? 분화 배지 교체는 며칠 주기로 하는 것이 좋을까요 ?   2. 또 3T3-L1의 conditioned media(CM)을 얻으려고 하는데, 인슐린이 든 배지를 수집을 하는 것인지, 분화를 다 마치고 100% DMEM로 배지를 바꾼 후, 교체할 때마다 배지를 얻어내는 것인지 궁금합니다 !  
회원작성글 koma1  |  2020.12.17
Q. 초보 대학원생 ㅠㅠ 도와주세요,,,il-6의 mRNA expression이 control 군에서 증가하지 않아요ㅠ
안녕하세요, 이번 학기에 입학한 대학원생입니다. 제가 어느덧 랩실 생활을 한 지도 반년이 넘어가고 있는데요, 아직 결과가 제대로 나오지 않아 두 번째 실험인  RT-PCR에서 넘어가지 못하고 있습니다ㅜㅜㅜ 저는 우선 cell에 stimulent를 처치해 timecourse로  il-6의 증가 반응을 통해 treatment를 처치할 time을 정했는데요, 문제는 그 time으로 treatment를 처치해서 dose dependency를 보려고 할 때 control 군이 계속 증가하지 않고 오히려 감소하는 경향을 보이고 있습니다. 문제는 이게 몇개월째라는 건데,,,,,제가 뭘 잘못하고 있는 건지 도저히 모르겠네요. 참고로 항상 melt curve는 깔끔하게 나오고 있습니다..   처음에 아래 그래프와 같이 timecourse를 진행했고, 3번째 시간에서 염증 반응이 가장 증가해서 3번째 시간으로 잡고 dose dependency를 보려고 했습니다.   아래 그래프는 None, stimulent만 처치, stimulent+treatment 5uM, stimulent+treatment 10uM한 그래프입니다. 보시다시피 dose depedency를 보이길래, 이 실험을 다시 해봤더니 오히려 none보다 stimulent를 처치했을 때 염증 반응이 감소하더라구요. 그리고 이게 지금 계속 반복 중이라 다음 실험을 더 할 수 없는 지경입니다ㅠㅠ 이게 유일한 잘 나온 데이터에요....제가 뭘 잘못하고 있는 걸까요..? 결과가 잘 나오지 않다 보니 대학원 생활이 저에게 맞지 않는 건가 싶고, 출근할 때마다 엄청 스트레스를 받고 있어요ㅜㅜ cell seeding을 잘못하고 있는 건지 의심스럽습니다. 도와주세요 선배님들 ㅠㅠ  
회원작성글 염증아나타나줘  |  2020.12.12
Q. T cell activation 시
안녕하세요, In vitro에서  T cell activation 시킬 때, cd3 항체를 넣어주는데요, 궁금한 점이 cd3는 세포 안쪽에 있는데 어떻게 항체가 binding 되는 것인지요?    
회원작성글 evlauation..  |  2020.12.06
Q. neuroprotection 관련 실험을 위해 Pericyte가 필요합니다.
neuroprotection 관련 실험을 위해 Pericyte가 필요합니다. 분양해주실 수 있는 분 있으시면 yojin92@naver.com으로 연락 부탁드립니다.. 감사합니다.
회원작성글 찌미  |  2020.11.27
Q. 쥐 monocyte로부터 RANKL로 osteoclast 분화시킬 때 ㅠㅠ 첨부파일
안녕하세요.  osteoclast 분화에 능통하신 선배님들께 조언 부탁드립니다.   ICR mouse(5주령, F)에서 monocyte를 채취하여 이를 M-CSF와 RANKL 처리를 통해 osteoclast로 분화시킨 뒤 TRAP staining을 통해 확인하려고 setting 중에 있습니다. 논문들마다 조금씩 프로토콜 차이가 있던데요; 일단 기존 논문 참고하여 1) bone marrow (femur + tibia)를 flushing 한 뒤에 100pi dish에 깔고 2) overnight 한 뒤에 floating cell만 채취해서 다시 100pi에 3일간 M-CSF 30ng/ml 처리하며 키우고 3)  붙어 있는 cell을 scraper로 긁어서 채취후 centrifuge, cell counting 후 24-well에 깔아서 익일부터 osteoclast 분화 유도 osteoclast 분화 유도시 M-CSF 30ng/ml + RANKL 100ng/ml 처리하여 2~3일에 한번 배지 교체하며 5~6일간 보았습니다. 배지는 a-MEM + 10% FBS 사용했고요;; 이렇게 진행시 6일째 TRAP staining했을 때 M-CSF만 처리한 것과 달리 M-CSF 30ng/ml + RANKL 100ng/ml 처리시 분홍색으로 염색의 차이는 있었는데; 현미경으로 살폈을 때 논문에서 나오는 커다란 다핵세포는 없고, monocyte 같은 것과 일부 크기가 살짝 커진 단핵세포만이 그냥 TRAP 염색이 된 것처럼 보입니다. ㅠ   이에 고견 부탁드립니다. ㅠㅠ #1. 어디가 잘못되어서 왜 다핵세포로 안 되고 단핵세포 그대로 가면서 TRAP 염색은 되는지.. #2. floating cell을 3일간 M-CSF 30ng/ml 처리 후 보면 그래도 상당히 heterogenous 한 cell들이 떠다니는 것들도 많은데(cell debris도 있지만) 이걸 washing해 내고 바닥에 붙은 cell만 쓰는 것이 맞는지; 아니면 분화에 도움을 줄 수 있어서 같이 써야하는지;; #3. 24-well에 seeding density는 보통 얼마로 하시는지요; 3 x 10의 5승/ml로 깔았는데 6일 키워도 중간중간 빈 곳이 많더라고요;; #4. RANKL 제품에 따라 차이가 클까요? 농도도 M-CSF와 RANKL 농도가 논문들마다 많이 다르더라고요;;   많이 바쁘신 와중에도 고견 부탁드립니다. 미리 감사드립니다.
회원작성글 고학생  |  2020.11.01
Q. autophagy 논문에 관한 질문 입니다.
논문을 읽다가 ATG7/10을 knock down 시킨 hela cell의 repliacted test를 확인 하는데 왜 test 하는 것인지 왜 helca cell을 사용해서 autophagy 실험을 하는지 궁금합니다. 
회원작성글 ahdahd  |  2020.10.11
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