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BioLab 장재봉 교수
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 카테고리: 전체 > Immunology > etc.
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Q. Spleen으로 실험 해보신 분들께 조언을 구합니다.
  안녕하세요. Spleen으로 실험을 진행을 할 때 선배님들께 조언을 구하고자 이렇게 글을 적습니다. 제가 향후 실험에서 Spleen으로 FACS, 조직학 실험, qPCR 등 여러 곳에 사용하려고 합니다. 하나의 조직을 여러 등분을 하여 사용하면 실험에 용이할 것이라 생각하여 서칭을 하였습니다. 그런데 몇몇 FACS 실험에서 whole spleen을 사용했다는 것을 봤었어서 FACS 실험에는 half spleen을 사용하면 안되나 라는 의문이 들어 질문을 드립니다. germinal center가 spleen에서 랜덤하게 생성되기 때문에 half spleen을 쓰더라도 FACS 실험에 충분한 양의 세포만 존재한다면 크게 문제가 되지 않을 것 같다고 생각하는데 선배님들께서는 어떻게 생각하시는지 그리고 half spleen으로 실험을 해보신 경험이 있으신지 궁금합니다. 혹시 FACS 실험을 할 때 반드시 whole spleen을 사용해야 하는건가요? 감사합니다.
회원작성글 지얀  |  2022.01.18
Q. 농도 희석 계산점요 ㅠㅠ
초짜 대학원 신입입니다 ㅠㅠ 아 농도계산은 할때마다 너무 어렵네요;; 50uM 농도로 500ul 의 약물이 있습니다. 이 약물을 DMSO를 이용하여 100nM 50ml로 희석하고자 합니다. 약물과 DMSO를 얼마나 섞어야 하나요?ㅠㅠ 부탁드립니다.
회원작성글 대학원생n  |  2022.01.17
Q. qRT-PCR 분석 질문드려요
안녕하세요! 모르는게 너무 많은 대학생입니다. 다름이 아니라 qRT-PCR 실험을 했는데요   제가 이 실험을 맞게 이해한건지 확인부탁드립니다.   아무것도 자극하지 않은 control군의 2^-(△△Ct mean) 값을 기준점 1로 잡았을 때 target 군의  2^-(△△Ct mean) 값이 1보다 크면 gene expression 증가, 1보다 작으면 gene expression 감소라고 분석하면 되는 걸로 이해를 했는데요.   제가 실험을 통해서 얻은 값은 만배~4만배가 훨씬 뛰어넘는 값입니다... 결과가 이렇게 나오는거는 잘못된게 맞죠ㅣ..? 심지어 melting curve도 2개 정도도가 튀었더라고요....ㅠㅠ 제가 다른 질문을 찾아보니깐 control sample값이 엄청 낮으면 값이 4만배가 차이난다고 하는데 이게 무슨 말인지 이해를 못하겠어요~!   그리고 RNA 추출할때 순도가 1.75~ 1.87 사이로 좋지 않은 상태였고, 핵산 농도도 굉장히 낮았거든요. 그런데 PCR 자체가 증폭을 해서 발현정도를 비교하는 실험으로 이해를 했는데, 추출한 핵산 농도와 관련이 있나요?   쥐똥만큼 모르는 대학생을 살려주세요......
회원작성글 황해칼국수  |  2022.01.13
Q. sodium citrate buffer에 대해 질문있습니다.
당뇨관련 실험을 하고 있습니다. 당뇨를 유도할때 STZ를 사용하면서 sodium citrate buffer도 사용하는데, 컨트롤모델에도 sodium citrate buffer를 넣는 이유가 무엇인가요? 
회원작성글 태태태  |  2022.01.11
Q. EMSA를 진행중입니다. 근데 샘플이 well에서 안내려 옵니다.
최근 EMSA 를 진행하였습니다. 쓰고 있는 제품은 Thermo의 20148kit이고 TBE buffer는 만들어쓰고있고요 그런데 진행하였는데 위 사진처럼 sample 로딩한쪽 well에 흰색이 뜹니다. 전 처음한거이기에 EMSA를 해봤던 다른 랩실 친구한테 물어보니 EMSA를 하면 membrane에 sample band가 흰색으로 뜬다고 하는데 전 안내려가고 well에만 남아있더라구요  샘플은 kit내 있는 ctl 샘플이고요 실제로 찍어 봤더니 다 well내에만 몰려있습니다. 도대체 뭐가 문제일까요? 그리고 그 친구 말대로 membrane에 저렇게 흰색 뜨는게 맞나요?   참고로 제 gel 상태는 다음과 같습니다. 30% 아크릴아마이드 2.67ml 10x TBE 1ml 50% glycerol 1ml 10% APS 0.2ml TEMED 20ul add dH2O to 20ml
회원작성글 노트북  |  2022.01.06
Q. PBMC 분리 후 IFN-gamma자극 nk cell 활성화 시킬 수 있는 방법 도와주세요ㅜㅜ
안녕하세요. 현재 nk cell 관련하여 연구 중인 학생입니다.. PBMC 분리 후 NK cell에서 분비되는 IFN-gamma 를 최대한으로 활성시킬 수 있는 방법 조언 해주실 수 있을까요? ㅠㅠ phorbol-12-myristate-13-acetate (PMA) + Ionomycin으로 자극하는 방법이 효과가 있다고 하는데 혹시 해보신 분들 계시면 조언 부탁 드립니다..! 그리고 NK cell 배양하면서 CD56,335,프로류킨,IL-15를 넣어 배양 중인데 이것보다 효과적으로 NK cell을 배양할 수 있는 방법이 있을까요? 배지로는 EALI 와 KBM502 중에 어느것이 더 좋을까요 ㅠㅠ 이 밖에도 NK cell 활성에 관한 조언 많이 부탁 드립니다!!!
회원작성글 병아리인턴  |  2021.12.27
Q. PI staining 시 고정 방법
PI staining 해서 cell cycle 분석하려고 합니다.    고정할 때, EtOH나 4% paraformaldehyde로 fix 하라고 하는데 실험실내에  eBioscience™ Intracellular Fixation & Permeabilization Buffer Set (cat# 88-8824-00) 가 있더라구요    고정하고 구멍 뚫어서 염색하는 건 비슷하니까 PI 염색시 해당 buffer를 사용할 수 있을 것 같은데... 사용 가능한가요? PI 염색 방법중 해당 buffer 쓴 건 못찾아서..아니면 Foxp3/Transcription Factor Buffer Set (cat. 00-5523) 로 하면 되는 건가요?
회원작성글 YeKy  |  2021.12.22
Q. IL-2 제조 방법을 찾고싶습니다
IL-2 제조를 하고싶은데, 인터넷에 찾아보니 잘 안나오네요ㅠㅠ 참고할만한 논문이나 방법가지고 계신 분이 있으실까요?
회원작성글 라리아이하히  |  2021.12.21
Q. IHC 실험 시 DAB 발색이 되지 않습니다.
안녕하세요. 마우스 대장 조직을 이용해 IHC 진행하고 있습니다. 근데 문제는 DAB 발색이 안돼요 ..  1차 안티바디를 1:50으로 희석해서 사용했고  2차 안티바디를 1:500으로 희석하였는데 2차 항체 희석 비율이 너무 낮아서 그런걸까요 ?!  2차 안티바디는 1차 항체 host가 rat이어서 goat anti-rat인 제품을 사용하였습니다.. 또한 ABC을 위해 HRP-conjugated 제품을 사용하였어요 ..  제가 실험한 method는  1.탈파라핀 2. 3% H2O2 30분 RT 3. washing (1X PBS) 4. 2% BSA in PBS 90분 RT 5. 1차 안티바디 4℃ O.N 6. washing 7. 2차 안티바디 90분 RT 8. washing 9. ABC solution 90분 RT 10. washing  11. DAB 발색  DAB 용액은 사용 직전에 제조하였고, 전혀 이상없음을 확인했습니다.. 10분 이상 했는데도 발색이 전혀 안되요 ㅠㅠ  왜 그런지 알 수 있을까요 ..?  
회원작성글 ㄴㄷㅁㄹ  |  2021.12.14
Q. 논문 초보 figure 이해
안녕하세요. CAR T, lenti, retro virus  실험실 초보석사입니다.  논문을 아직 많이 접하지 못한 상황이라 아직 이해가도 낮은데요. 읽어보라고 받은 논문 figure에서 이해가 안되는 것이 있어서 조언을 얻고자 글을 쓰게 되었습니다.   우선 논문 전문이 있어야 답을 찾을 수 있을 것 같아서 링크를 올리겠습니다. https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S2589004221005873   1. figure1A에서 CAR vector와 control vector에 NGFR CMV 위치가 다른데 이유가 있는 것인지 궁금합니다.   2. figure2A에 그래프를 특히, SKBR3부분을 이해하지 못하겠습니다. 정확히 어떤 실험의 데이터(FACS?)이고, 왜 이 데이터를 보였으며, 회색 피크와 shift된 부분을 HER2와 어떻게 연관지어 해석해야하는지 알고싶습니다. SKBR3, MDA-MB-231, BT-474 : beast cancer SKOV-3 : 난소암 cell line   감사합니다.  
회원작성글 leeani  |  2021.12.07
Q. 혈액 도말 분리 후 얻은 세포 첨부파일
혈액 도말 분리 후 얻은 세포입니다. 사진에서 보시면 자색으로 염색된 윗 부분의 세포는 제가 보기에 호중구, 아래는 림프구로 보이는데 확신이 안서서 질문 드립니다!
회원작성글 없네임  |  2021.11.25
Q. T cell activation 과 differentiation 차이
안녕하세요! PBMC에서 분리한 T cell을 사용하여 activation과 differentiation을 보고자 합니다. 여러가지 많이 찾아보았는데, activation과 differentiation의 차이를 잘 모르겠어서 고민하다가 질문 올립니다ㅠㅠ..  cytokine이나 다른 것들로 T cell을 자극시켜서 T cell에 CD~들이 발현이 되는게 activation으로 알고있는데, CD~들이 발현이 되면 cytotoxic T cell이나 Th로 differentitaion이 된 거 아닌가요..? 아니면 differentiation이 된 것들 중에서 cytokine을 분비하거나 하는 애들만 activation이 된 것인지... 정말 헷갈립니다ㅠㅠ!!! 꼭 좀 답변 부탁드립니다!!
회원작성글 cp2c  |  2021.11.23
Q. tp53 +/-가 뭔가요 ??
TP53이 종양 억제에 도움을 주는 단백질이고, 해당 gene에 돌연변이가 생기면 종양이 잘 생기는 것 까지는 알겠습니다만 간혹 논문에서 TP53 +/- mouse라는 표현이 나오는데 이것이 무엇인가요? 문맥상 TP53+는 TP53에 mutation이 생긴 상태를 칭하는거같긴한데.. +/-는 검색해도 명확히 나오지 않습니다 조언 부탁드립니다 ㅠㅠ
회원작성글 SHY  |  2021.11.11
Q. 합성면역에 대해서
합성면역에 대해서 조사하다보니 면역회로라는 말이 자주나오던데 면역회로 라는 것이 정확히 뭘 말하는 건가요?
회원작성글 수의사꿈나무  |  2021.11.02
Q. 같은 agonist를 사용하는데, 최적농도가 다른이유
석사과정을 밟고있는 대학원생입니다. 이번에 제가 Cancer cell에 FFAR2 agonist인 propionate와 butyrate를 농도별로 처리해서, 제일 잘 자극이 먹는 농도가 무엇인지 확인해 보는 실험을 진행했습니다. 그 결과, propionate와 butyrate의 최적 농도가 각기 다르게 나왔습니다.   둘 다 FFAR2를 자극하는 agonist인데 왜 최적농도가 다르게 나올까요? 도움 부탁드립니다
회원작성글 화이탱  |  2021.11.02
Q. 암세포 실험 관련
안녕하세요. 실험 관련 공부를 하고 있는 한 고등학생입니다.  암세포를 세포주 은행에서 분양받아서 사용해서 항암 효과를 보는 실험을 할 때, HeLa 세포와 같은 "암세포"는 어떤 점에서 "암세포"라 불리는 건가요..  다른 조직세포, 표피세포들도 암세포가 아니어도 "암세포"의 특징을 갖고 있지 않나요,,  암세포를 구입해서 실험하는 것이 왜 항암 효과에 대한 증명인지 궁금합니다. 
회원작성글 mr.oyster  |  2021.10.28
Q. Dna 손상 복구 관련질문
아직 완전히 이해되지 않아 질문올려봅니다. dna손상 복구기전 중 parp1 단백질이 관여하는 과정이 있는데, Parp1은 종양세포의 dna회복을 유도하기 때문에 항암효과를 저해해서, Parp1 저해제가 암 치료에 쓰인다고 들었는데, 여기서 parp1을 저해하면, 정상 세포의 dna복구는 어떻게 하나요? Dna를 복구하는 단백질이 따로 더 존재하나요? 그렇다면 그 다른 복구 단백질은 암세포의 복구에는 영향을 안 미치나요?
회원작성글 ULSMEDIC  |  2021.10.22
Q. Cryosection장비에 대해 궁금한점
Anti-roll plate역할이 절편을 안말리도록 도와주는 역할을 하는것으로 아는데 다들 장력?이라 해야할지 모르겠지만 anti-roll plate의 나사를 어느정도로 조절하고 쓰시나요? 기준이 있을까요?
회원작성글 도편추방제  |  2021.10.01
Q. EAE 모델 제작 질문드립니다.
  선생님들 안녕하세요,  제가 MOG, CFA를 이용한 EAE mouse model 제작을 하려고 합니다.  시험 준비과정에서 약간의 문제가 발생하였는데  Pertussis toxin을 MOG 투여한 당일과 2일 후 총 2회 투여  이 부분에서 투여한 당일이라는 것이 MOG를 투여하고  언제( 투여 직후, 투여 후 몇 분? 혹은 투여 후 몇 시간?) 인지 감이 잡히지 않습니다.    도와주세요.. . 
회원작성글 YOon_  |  2021.09.27
Q. FACS sorting yield 관련
BD Aria III를 이용하여 FACS cell sorting을 기관내 operator를 통해서 진행을 했습니다. 추후 mouse tissue에서 macrophage를 isolation을 해야해서, positive control 실험으로 Raw264.7 cells에 anti-CD11b-PE, anti-CD45-APC를 붙인뒤 sorting을 진행했습니다. display에는 sorting을 통해 총 720,000 cells을 collection 했으나, 연구실에 들고와서 원심분리후 1 mL에 resuspension 한뒤에 hematocytometer로 계산을 해보니 185,600 cells만 있었습니다. 따라서, S/W에 표기된 세포중 약 25% 만 sorting을 통해 collection이 되었는데, (1) 어느정도의 cells abort가 일반적인지, 그리고 (2) 어떤 조건을 검토 해봐야 하는지  문의 드립니다. 참고로 a) 15 mL tube에 12 mL의 PBS를 채우고 sorter에 끼웠습니다. b) Stream의 break off은 정상적이었습니다.
회원작성글 jerry2  |  2021.09.24
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