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웹진 Vol.24, No.10 (2022년 10월) 발간
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 카테고리: 전체 > Molecular Biology-Protein > etc.
Mol. Biol.-DNA Mol. Biol.-RNA Mol. Biol.-Protein Immunology
Cell Biology Microbiology Plant Biology Laboratory Animals
Omics Chemical biology Bioinformatics Laboratory Equipments
Buffer/Reagent Bioethics Etc.
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질문/투표/프로토콜 등록
Q. ubiquitination 26S proteasome
ubiquitination에 K48이 proteasome에 관련이 있잖아요,   혹시 이 때 26S Proteasome에서 26S가 정확히 뭘 의미하는 건가요? 그리고 DUB로 Ub 분자를 떼어주는데, 왜 떼어주는 건지 원리가 있나요?
회원작성글 코로롱  |  05.04
Q. Chloroquine (CQ) 를 처리하면 lysosome 이 증가하는게 맞나요?
lysosome 쪽 지식이 짧아서 제가 정확히 이해한게 맞는지 여쭈려고 질문 올려봅니다. Chloroquine 이 lysosome 과 autophagosome 이 결합하는걸 억제하는 물질이라고 알고 있는데요, 그러면 lysosome 이 세포 내부에 쌓이니, 세포 안의 lysosome 이 증가 하는 것이 맞나요?  
회원작성글 아이고야  |  04.26
Q. 쿠마시블루 스테이닝 디스테이닝 하는 목적
쿠마시 브릴리언트 블루 G-250입니다 인터넷으로 찾아보니 6개의 group들과 2개의 sulfonic acid group들을 통해서 단백질과 결합하는데 소수성 결합(hydrophobic interaction with Try, Tyr, His, Phen)과 반데르 발스 결합(electrostatic force with Arg and Lys)을 통해 결합을 한다. 라고 확인해봤는데요 , sds page후 쿠마시블루 염색을 스테이닝 후 디스테인 하고 이 쿠마시 블루 실험 목적이 음전하를 띄는 염색 분자의 구조가 안정화 되면서 파란색을 띄게 된다라고 알고있고, 이것을 통해 저희가 원하는 목표 단백질 사이즈를 알수있어서 쿠마시블루로 스테이닝 디스테인 실험하는걸로 알고있는데 여기서 제가 질문드릴것은 sds page에서 마커로 단백질 사이즈 확인할수있는거아닌가요? 굳이왜 마커로 sds page로 확인하는데 쿠마시 블루로 굳이 하는실험 목적이 궁금합니다. 
회원작성글 choheec  |  04.21
Q. DTT 농도 관련 질문
안녕하세요    단백질을 disulfide 결합을 방지하기 위해 DTT를 처리하여  보관하고자 합니다.    단백질의 활성에 영향을 주지 않으면서 disulfide 결합을 방지하려면  DTT 농도는 얼마정도 하면 될까요?   SDS-PAGE 할때처럼 1mM은 너무 높은거 같아서요   답변 주시면 감사합니다. 
회원작성글 미야l  |  04.21
Q. bl21에서 colony딴후 단백질 발현 방법?
단백질 발현으로  처음으로 실험 시작하려고 합니다 bl21에서 TF하여  colony딴후 카나마이신,lb,콜로니 이렇게 해서 seedculture하면 될까요? 저혼자 실험하게되어 혹시나 틀렸을까 싶어 이렇게 확인차 질문합니다!
회원작성글 choheec  |  04.18
Q. 단백질 농도 계산 질문드립니다.
A 단백질 : 7.6uM (1mg/ml) MW=131 B 단백질 : 2.2uM (0.3mg/ml) MW=133.8 A, B 단백질을 10mM 스탁으로 두고 사용하려면 필요한 단백질 양은 얼마나 될까요? 부탁드립니다 !
회원작성글 ppPA  |  04.15
Q. Amylase 효소 활성 실험 첨부파일
pH 환경에 따른 Amylase 효소 활성도 측정 실험 중 pH 10인 NaOH와 Starch 용액이 담긴 tube에 Amylase를 넣고 Benedict 용액을 넣었는데 청람색 침전물이 생기고 윗부분에는 Benedict 용액의 색 그대로 반응이 일어나지 않은채로 관찰되었습니다.  청람색 침전물이 NaOH 때문에 발생한 것으로 추정 중인데, NaOH의 어떤 성질때문에 침전물이 발생하는 건가요?
회원작성글 차지  |  04.14
Q. Nanodrop 파장대별 측정 가능한가요
안녕하세요 Nanodrop으로 protein 농도를 파장대별로 측정하고자합니다. 원래 protein은 A280으로 농도 측정을 하였으나, 파장대별로 측정하여 그래프를 그려보라고 하셔서 nanodrop을 켰으나, 파장대별로 측정하는 방법을 모르겠습니다. Nanodrop으로 200nm~300nm 파장대별로 protein 농도 측정이 가능할까요?
회원작성글 돔돔  |  04.12
Q. 웨스턴 antibody에 변성이 생겼는지 test 해보고 싶습니다...
KO mouse와 WT mouse 조직에서 샘플링한것들을 이용해 웨스턴을 진행했는데, KO 조직에서도 보고자 하는 단백질이 검출되어서 antibody test를 해보려고합니다... 교수님께서 positive control과 negative control을 cell line을 이용해서 antibody test를 진행해보라고 하셨는데, positive control과 negative control이 무엇을 의미하는지 모르겠습니다...ㅠㅠ 제가 알기론 제가 보고자하는 단백질이 spleen에서 (normal state)에서 과발현된다는 것과, colon cancer cell line에서 보고자 하는 단백질이 과발현 된다는 논문 결과를 봤었기때문에, colon cancer cell line을 positive control로 쓰겠다고 했었는데 교수님은 그것이 positive control이 아니라고 했습니다... positive control이 다른 의미도 갖나요.......?
회원작성글 뿡빵스  |  04.06
Q. RT-HPLC 분석시 장비간 retention time 차이
안녕하세요. 선배님들. 단백질 정량분석, 순도분석을 위해 RT-HPLC를 수행 중 입니다. 근데 같은 시료를 서로 다른 장비에서 분석하니 main peak의 RT값이 2분 가량 차이가 생겼습니다. 사용하는 이동상, method, 온도는 같은 SOP에 따르고 컬럼도 같은 브랜드의 같은 모델을 사용했는데 사용하는 HPLC 장비가 다르다고 2분가량 RT값이 차이가 날수도 있나요? 각각 사용한 장비는 shimazdu 와 waters 장비를 사용했는데 RT값 차이의 이유를 모르겠습니다. 이 정도로 RT값이 shift되는 원인이 무엇이 있을까요? 근거자료를 구비해야하는데 조언 부탁드립니다.
회원작성글 Hsam  |  04.05
Q. image j를 사용한 복수 샘플의 형광 발현량 분석법
image j를 이용해 2가지 이상 샘플의 형광 발현량을 비교하려고 합니다. X 축은 샘플당 형광을 발현한 시료의 총 면적, Y 축은 샘플당 형광 발현 총량으로 그래프를 얻고자 하는데, 이를 위해 image j를 어떻게 사용해야할지 질문 드립니다.    
회원작성글 말하는 고졸  |  04.05
Q. whole cell lysate
안녕하세요  whole cell lysate가 세포를 깨서 섞여있는 상태라고 들었는데 그럼 그 안에서 다른 물질을 추출하기 위해서 만든 건가요? 어떻게 하면 만들 수 있는건지 궁금합니다
회원작성글 욤밍  |  04.04
Q. alpha glucosidase 활성을 보려고 합니다. plate assay 스크리닝법이 있을까요?
안녕하세요 alpha glucosidase 활성을 보려고 하는데요. plate assay로 하는 스크리닝법이 있을까요??
회원작성글 추노  |  04.01
Q. 젤은 원래 가열된 상태에서 더 잘 찢어지나요...?
오늘 단백질 전기영동 실험은 했는데 젤을 전자레인지에 가열했거든요? 그리고 다른 용기에 옮기는데 옮길때마다 조금씩 찢어지더라고요ㅜㅜ 엄청 조심히 옮겼는데...혹시 가열을 하면 더 잘 찢어지는 건가요? 혹시 이유도 설명 해주실수 있나요??  사용한 젤은 4~15%짜리 입니다
회원작성글 청조청  |  03.31
Q. 단백질 형광 tagging
분자량이 4.5kDa정도되는 단백질을 형광태깅하려하는데 제가 본 제품은 최소 12kDa 이상부터가 정해진 범위더라구요.. 혹시 저같이 낮은 분자량의 단백질 형광 태깅할수있는 제품이나 방법이 있을까요...?
회원작성글 hj1226  |  03.31
Q. 젤 이미지 촬영할때 발생하는 시간차이가 궁급합니다.
단백질 전기영동을 할때 10%젤을 사용하면 2초면 이미지가 찍히는데 4~15%의 젤을 사용하면 6초가 걸리는 이유가 무엇인가요?? 4~15젤이 범위가 더 다양해서 그런걸까요??
회원작성글 청조청  |  03.31
Q. Coomassie blue staining 오차
쿠마시 블루 스테이닝 실험을 했는데요, 실험 과정 정확히 했는데도 오차가 생길 수 있나요? 오차가 생긴다면 생길 수 있는 오차 범위가 클까요? 
회원작성글 알려주세요옹  |  03.31
Q. elisa 프로토콜 좀 봐주세요
Active Motif - TransAM NFkB manual   9p에 standard 에서  working stock of recombinant protein 100ng/ul을 clb에 희석하여 사용한다고 나와있습니다. 그런데 working stock of recombinant protein이 뭔지 모르겠어요.   kit components에 positive control nuclear extract이 어디에 사용되는 reagent인지 모르겠는데 이게 저 recombinant protein인가요??   혹시 시간 되시면 프로토콜 보시고 알고 계신 분 있으면 알려주시면  감사하겠습니다..... 
회원작성글 강산이  |  03.28
Q. resuspending
안녕하세요 ... 이제 막 랩실 들어와서 한달 조금 넘게 생활하고 있는 학부생입니다. 다름 아니라 protein extraction 랑 dH20를 e-tube에 넣고 resuspending 해서 골고루 섞은 후 duplicate 해서 정량값을 보고 있습니다.  그런데 흡광도를 보면 duplicate한 2 well 의 단백질의 양 차이가 큽니다.  사수 선배님 말씀에 의하면 resuspending을 제대로 안해서 그렇다고 하시는데... 사실 제가 이전에도 resuspending을 제대로 하지 않아 결과가 제대로 안 나온 적이 많습니다.. 그래서 이번만큼은 신경써서 resuspending을 해 tube 아래에 깔린 단백질을 제대로 섞었다고 생각을 했는데 또 결과값은 단백질이 제대로 안 섞였다고 나옵니다.. resuspending 에 대해 조언 부탁드립니다. 어떻게 하면 잘 할 수 있을까요 ... 다른 동기들은 쉽게 하는데 이런 것도 못하고 있는 제 자신이 너무 답답합니다..  파이펫팅 연습을 더 해야하는 걸까요... 뭘 더 의식적으로 신경써서 해야하는 걸까요 ... 
회원작성글 버티는학생  |  03.21
Q. BSA에 biotylation 하고 싶은데 정확한 프로토콜 부탁드립니다.
안녕하세요 선배님들.   BSA에 biotinylation 하고 싶은데 아무리 서치를 해도 나오지가 않아요 ㅠㅠ   랩에 가지고 있는 시약은  biotin-PEG12-NHS, 10%BSA solution. BSA(powder)입니다.    최종적으로 streptavidin을 붙이고 biotin, dye가 붙은 dna로 확인을 하고 싶습니다.  아래와 같이 실험해보고 biotin : BSA ratio를 20:1 로도 해봤는데 계속 실패했어요 ㅠㅠ  1mM NaHCO3, 5uM BSA, 300uM Biotin total vol 50ul (PBS) 로 4도씨에서 2hr 반응 후 아미콘 필터 3k로 진행했습니다.   혹시 정확한 조성과 프로토콜 공유해 주시면 정말 실험 열심히 해서 좋은 결과 내보겠습니다  도와주세요선배님들     
회원작성글 라그랑주p  |  03.19
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