[DEBUG-WINDOW 처리영역 보기]
즐겨찾기  |  뉴스레터  |  오늘의 정보 회원가입   로그인
BRIC홈 실험
ACROBIOSYSTEMS
배너광고안내
이전
다음
스폰서배너광고 안내  배너1 배너2 배너3 배너4
[우당탕탕 석사 적응기] 석사 1학기 - 새로운 환경, 그리고 후회
전체보기 안전점검 LABox
 카테고리: 전체 > Cell Biology > Transfection
Mol. Biol.-DNA Mol. Biol.-RNA Mol. Biol.-Protein Immunology
Cell Biology Microbiology Plant Biology Laboratory Animals
Omics Chemical biology Bioinformatics Laboratory Equipments
Buffer/Reagent Bioethics Etc.
카테고리 전체보기펼치기
질문/투표/프로토콜 등록
Q. transfection 시약 제조 후 3시간 냉장보관했다가 세포에 분주했습니다..
안녕하세요. 세포실험 입문한지 얼마 되지 않은 연구원입니다. 실험도중 딜레이가 생겼는데 문제가 될지 조언 부탁드립니다.. 코니칼 튜브에 TOM배지, inhibitor/mimic시약, 리포펙타민을 섞어서 15분 반응해놓았습니다. 그런데 실험 직전에 세포 수가 부족해서 바로 세포에 분주를 못하게 되어.. 냉장고에 넣어놓고 3시간 뒤에 seeding과 mix해놓은 transfection시약을 분주했습니다..   mix해놓고 3시간 뒤 분주했는데 괜찮을까요...?   도와주세요ㅠㅠ 감사합니다..
회원작성글 면역학술조  |  2021.11.22
Q. Dual luciferase assay 실험결과에 대한 질문입니다.
안녕하세요 저는 조류세포에 RNP complex gene과 vector를 함께 transfection하여 24 hr 후 PLB buffer를 이용해 lysis하여 Dual-Luciferase assay를 진행하였습니다. 그런데 (-) control과 experiment group의 internal control로 사용되는 renilla luminescene 값이 2배 이상 차이가 나기도 합니다. 같은 양의 renilla gene을 transfection 했음에도 결과 값이 차이가 나서 좋은 조언을 구할까하여 질문드립니다.
회원작성글 어렵은실험  |  2021.11.22
Q. siCon
siCon이 뭔가요?  논문을 읽는데 A(임의)라는 유전자의 siRNA를 transtection시키고 siCon도 transtection 시키는 것 같은데 이게 뭔지 모르겠어요.
회원작성글 일요일  |  2021.11.21
Q. Dual luciferase assay에 대하여 질문드립니다.
제가 현재 Chicken,Duck promoter & AI virus RNP complex plasmid를 이용해 Transfection 24 hr 후 dual luciferase assay 실험을 진행하고 있습니다. 실험과정에서 Renilla plasmid도 Internal control로 사용하면서 결과 데이터를 확인해보면 Negative control과 experiment control간의 Renilla luminescence intensity가 비슷하게 나와야하는데 experiment group에서 높게 나오는 경향이 계속 나타납니다... 그래서 실험 결과 자체를 신뢰하기가 어렵습니다. 그래서 Renilla plasmid의 양을 2.5 ug/well > 0.1 ug/well로 낮추어 실험을 진행하고, (-) control에는 entry vector를 사용하였는데 실험군과 동일하게 plasmid의 양을 넣어주려고 합니다. 이외에도 추가적인 실험조언을 있으면 조언을 듣고 싶어서 글을 올리게 되었습니다. 읽어주셔서 감사합니다.
회원작성글 어렵은실험  |  2021.11.19
Q. RT-PCR ct값 관련 질문
안녕하세요, RT-PCR을 독학으로 배우기 시작한지 얼마 안된 RT-PCR 삐약이입니다.   제가 house seeping gene으로 b-actin을 사용하여 RT-PCR을 돌렸는데요, b-actin의 ct값이 처음에는 18-20으로 잘 나오다가 어느날부터 갑자기 일부가 18에서 30까지 다양하게 값이 튀더라구요,,    예전에 b-actin의 ct값이 18로 나왔던 샘플을 다시 RT-PCR 돌려보니 일부가 30으로 값이 튀었습니다.   새롭게 전환한 cDNA도 똑같은 방법으로 RT-PCR을 돌려보니 역시 일부만 ct값이 30이 나오더라구요,    조작의 문제라 생각하여 나름대로 신경써서 조작하고 있는데 결과가 계속 동일하게 나오니 어떻게 해야될지 모르겠습니다 ㅠㅠ  뭐가 문제일까요..? 도와주세요 ㅠㅠ
회원작성글 세포실험초보  |  2021.11.16
Q. Pdl 코팅 농도 질문
Pdl 코팅하려고 하는데 5mg 짜리 powder로 주문을 했어요 Protocol에 보면 0.1mg/ml로 맞추라고 해서 저희는 5mg을 50ml의 d.w로 녹여 사용합니다 이게 10x고 코팅에 쓸 때는 1x로 다시 dilution해서 사용하는데 왜 저게 10x인지 protocol봐도 이해가 안가서요 ㅠ 답변 부탁드립니다 https://www.sigmaaldrich.com/KR/ko/product/sigma/p6407
회원작성글 2밍  |  2021.11.10
Q. 세포에 transfection reagent를 처리한 상태에서 배지 교환 없이 약물을 처리해도 될까요?
siRNA transfection을 하는데 opti-MEM으로 배지를 교환하고 siRNA transfection을 진행하였습니다.  그리고 transfection efficiency도 높이고 제가 처리하는 약물은 72이상 처리해야 하기 때문에 배지를 교환하지 않은 상태에서 6시간후에 약물을 처리하였는데 이렇게 해도 괜찮을까요? 참고로 제가 처리하는 약물은 transfection을 하지 않을 때도 opti-MEM 상태에서 처리합니다. 꼭 배지를 교환한 후에 약물을 처리해야 하나요? 제가 궁금한 것은 혹시 transfection reagent가 약물에 영향을 줘서 실험 결과가 차이가 날 수도 있을까요?
회원작성글 모나리자  |  2021.11.09
Q. 그람염색에서 DNA가 염색될 경우
그람염색 실험할 때 그 세균의 DNA까지 염색될 경우엔 어떻게 했는지 기억이 안 나서요. DNA까지 염색돼도 상관 없나요? 아니면 염색을 막기 위해 어떤 조치를 취하나요?
회원작성글 안녕하셍요  |  2021.11.03
Q. 순수, 고농도 cloning
클로닝 시에 insert된 plasmid를 순수, 고농도로 만드려면 어떻게 해야 하는지 다양한 방법이 궁금합니다!
회원작성글 미레도시  |  2021.10.31
Q. siRNA transfetion
안녕하세요 제가 이번에 siRNA transfetion 을 진행하고 있는데 기존에 RNAiMAX을 사용해서 진행했었는데 실수로 lipo2000을 넣었습니다. 혹시 transfetion과정에서 많은 차의점이 있는지 궁금합니다. 다시 RNAiMAX을 넣고 seeding을 진행하는것이 좋을까요? ㅠㅠ
회원작성글 genesis  |  2021.10.29
Q. confocal 보정 관련 질문입니다.
confocal 보정 관련해서 질문드립니다..ㅠ confocal은 leica 사용하고있습니다.  현재 형광을 mcherry, gfp, dapi 를 보고있는데, 형광 세기 조절에 의문이 있어 질문드립니다.    gfp 조절 시 smartgain이나 offset 형광세기정도를 변경하는데 mcherry는 프로그램상에서 smart gain도  %으로 조절해 gfp와 다르고,,offset도 없고 형광세기도 두가지를 조절할 수 있어 gfp와 똑같은 조건으로 조절이 안됩니다.. 이럴 경우 어떻게 조절해야할지 조언 부탁드립니다.   또, 얻은 이미지를 imageJ를 통해 분석하는데, color 별로 threshold를 정할때 red와 green 모두 같은 값으로 threshold를 조절하는것이 맞나요?
회원작성글 LMC  |  2021.10.22
Q. mitophagy flux 측정 중 어려움이 있습니다. 첨부파일
mcherry-gfp-lc3 adenovirus로 transfection하여 mitophagy flux를 측정하고 있는데.. confocal data 얻는데 어려움이 있습니다.   mitophagy 측정한 논문들을 보면 dot가 크고 선명한데 저는 너무 noise처럼 깔립니다.. (background 제거 많이 했는데도) 그리고 이론 상 red에서 green dot을 뺀 거가 autolysosome인데 마이너스 값이 나오는 것도 있구요.    어떤 조절을 해야 명확한 데이터가 얻어질까요? confocal 상에서 smartgain, offset, 등은 조절 해봤습니다.   또한 제가 약물을 독소루비신을 써서 이게 약물을 treat하면 핵에 축적되어서 핵이 빨갛게 됩니다. 이때 red dot 측정은 어떻게 해야될지.. doxo때문에 mcherry를 안쓴다기엔 이미 논문들도 있고 논문에 실린 데이터에도 핵이 doxo로 염색된 상태를 보여주더라구요. ㅠ  도와주시면 감사하겠습니다....
회원작성글 LMC  |  2021.10.19
Q. 바이러스 실온에 뒀는데..
-80 보관 aav virus를 실온에 2시간정도 실수로 꺼내놓았는데 활성이 많이 떨어질까요..? ㅠㅠ 새로 구입해야 할까요
회원작성글 2밍  |  2021.10.18
Q. Transfection 후 dish에 이상한 하얀 덩어리들 첨부파일
안녕하세요 현재 HEK293 Cell에 PEI transfection을 진행하고 2일 후 dish를 확인해보니 밑에 사진과 같이 하얀 덩어리들이 존재하고 몇몇데는 중간에 구멍도 났더라구요 현미경으로 봐도 잘 모르겠어서 질문 올립니다 전에는 분명 저런거 없이 깔끔하게 cell로만 뒤덮였는데혹시 cell이 오염된걸까요..? Cell을 녹여서 사용한지는 최근이라 오래되서 그런건 아닐테고.. ㅠㅠㅠㅠ
회원작성글 냥뮹  |  2021.10.16
Q. cell 회사에 따른 transfection 효율 차이?
cell transfection 관련으로 질문합니다!ㅠㅠ 전에 키우던 cell이 pass 횟수가 너무 많아져서 버리고 새 cell stock을 풀었습니다 같은 cell이긴 한데 회사가 다르더라구요ㅠㅠ 전에 했던 실험이랑 동일한 방법, 동일한 양으로 DNA, reagent로 transfection 했는데 전에 했던 cell과 다르게 너무 많이 죽었습니다ㅠ 혹시 cell 회사가 다르다는 이유로 이런 차이가 보일 수 있나요? 그게 아니면 제 실험과정 중에 문제가 있었던 걸까요ㅠ
회원작성글 우르롹끼  |  2021.09.27
Q. THP-1 cell에 si RNA transfection 실험 하시는 분 계신가요?
HEK 293T cell에 siRNA를 이용해 gene knockdown을 하여 실험하다 같은 siRNA와 같은 transfection reagent를 이용해 THP-1에 실험을 하니 knockdown이 5번 중에 한 번 성공할까 말까 하는 성공률을 보이고 있습니다. 안정적인 knockdown 성공률을 위해 이런저런 시도를 해보았으나 아직 성공률을 높이는 방법을 찾지는 못했습니다.  일단 기본적으로 si RNA와 dharmafect를 각각 serum free RPMI에 풀어 10분간 둔 뒤, 둘을 섞어 25분 뒤 세포에 처리하는 식으로 transfection을 하고있으며 knockdown 여부는 transfection 이후 48시간이 지난 뒤 qRT PCR로 knockdown 여부를 확인하고 있습니다. si RNA의 농도를 10µM ~100µM까지 조정해보거나 dharmafect를 2배 혹은 0.5배로 처리하거나 25분의 대기시간을 45분까지 늘려보거나 24시간 이후 siRNA를 한번 더 처리하는 식의 변화를 각각 줘봤는데 아직까지는 성공한 방법이 없네요... 혹시 THP-1에 siRNA를 이용한 transfection 해보신 분 중에 노하우 공유 가능하신 분 있을까요? ㅠ
회원작성글 5시반엔배가고프다  |  2021.09.07
이전  01 02 03 4 05 06 07 08 09 10  다음
실험 회원 등급이란?
실험Q&A 회원등급안내
위로가기
실험 홈  |  실험FAQ
 |  BRIC소개  |  이용안내  |  이용약관  |  개인정보처리방침  |  이메일무단수집거부
Copyright © BRIC. All rights reserved.  |  문의
트위터 트위터    페이스북 페이스북   유튜브 유튜브    RSS서비스 RSS
써모피셔사이언티픽 광고