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[우당탕탕 석사 적응기] 석사 1학기 - 새로운 환경, 그리고 후회
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 카테고리: 전체 > Immunology > ELISA
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Q. ELISA 관련 질문합니다.
ELISA 실험하고 있는데.. standard 커브는 잘 나옵니다. 근데 항상 같은 샘플로 사용하는데.. 결과가 아예 detect이 안되거나 잘나오거나 합니다. 이럴 땐.. 뭐가 문제일까요? R&D kit를 사용해서 하고 있고  전날 coating 후 진행하는 방법입니다.  
회원작성글 mn79love  |  01.14
Q. ELISA와 Immunofluorescence 차이
저거 둘 차이가 뭔가요? ELISA는 2차항체 위에 효소가 붙는거고 Immunofluorescence는 형광물질이 붙는 차이인건가요?   ELISA는 해봤는데 면역형광어쩌구는 처음들어봐서 궁금해서 여쭤봅니다
회원작성글 혐오  |  01.13
Q. TCA precipitation
처음 TCA 단백질 침전법을 공부중인데, 대부분 Conditioned media를 농축시켜서 western blot을 시행하더라고요,, 저는 msc-cm에서 분비되는 cytokine 측정 비교를 위해 침전시켜서 ELISA를 하려는데 주의사항 있을까요,,?? 실험과정도 한번 컨펌부탁드립니다.    TCA 10% 처리 후 vortexing해서 ice보관 centrifuge 30min sup제거 후 100% cold acetone pellet wash vortexing 후 centri 30min sup제거 후 다시 vortexing 후 centri 30min air dry 파란색 띌때까지 1x sample buffer 넣어 줌 vortexing후 4'C 보관   저는 웨스턴블롯 말구 ELISA시행할 예정이니 sample buffer말고 NaOH넣어주면서 색 변화 관찰하면 될까요? 혹시 넣어줄때는 얼마만큼 씩 etube에 넣어주는건가요..? 4'C에서 보관 후 하루 정도 뒤에 ELISA실험 진행하면 되나요?
회원작성글 12312  |  01.02
Q. 안녕하세요 ELISA에서 blank 설정
안녕하세요. ELISA를 set-up하기 시작한 예비 석사생입니다. cell culture media를 사용하여 진행을 합니다. STD를 0 7.81 15.63 31.25 62.5 125 250 500 으로 진행을 하는데 Sample - blank 시에 STD에 있는 0 값을 blank로 해서 계산을 하면 될까요??  
회원작성글 박현하  |  2021.12.31
Q. PAF(혈소판활성화인자) 혈청에서 측정 가능한가요? 첨부파일
찾아보니 alibaba에서 파는 이런 ELISA kit가 나오긴 하는데.. 혹시 사람 혈청에서 PAF 측정해보신 분 계실지요?
회원작성글 porto  |  2021.12.30
Q. pan-Immunoglobulin에서 pan의 의미가 무엇인가요? 첨부파일
  여기서 말하는 pan의 의미에 대해서 잘 모르겠는데 Immunoglobulin이 어떤 것인지는 알겠으나 이 pan이라는 어휘의 뜻을 모르겠습니다. 병과 관련된을 뜻하는 접두사인가요?
회원작성글 C. hastatu..  |  2021.12.25
Q. ELISA serum 희석
human serum sample을 이용해서 ELISA 측정 진행중입니다. 처음 1:50으로 dilution 진행하였는데, 흡광도 값이 너무 높게나오더라구요 (2.0~3.0값들) 그래서 1:200으로 다시 fix해서 진행해보았는데, 전체적으로 흡광도값이 낮아지긴 했지만 흡광도가 전 보다도 높게 나온 샘플이 있어서요 간혹 ELISA를 진행하다 보면 희석배수를 더 높였는데도 오히려 값이 더 높아지는 샘플이 보이는데 이런 경우는 뭐가 문제인지 궁금합니다...
회원작성글 졸업시켜줘  |  2021.12.13
Q. ELISPOT reader 중고로 사고싶은데 살만한 곳이 있을까요?
ELISPOT 실험은 다 setting 했는데 reader를 새거사기엔  좀 부담스러워서   중고로 알아보는데 파는 곳이 없어서 질문드립니다.   ELISPOT reader 중고로 사고싶은데 살만한 곳이 있을까요?
회원작성글 시너지짜증나  |  2021.12.13
Q. Elisa kit standard curve 질문입니다
안녕하세요 타 분야에서 넘어와서 Elisa kit에 대해서 너무나 어렵게 느껴집니다ㅠㅠ   이번 저희가 실험에서 얻은 blood sample을 Elisa kit를 사용하여 단백질 수준을 알려고 하는데요,   키트 구매 후 프로토콜을 읽고 있는데, 8개의 튜브를 셋팅하고 150 씩 옮기는것은 이해가 되었는데요, 근데 아래에 10.1부분 32,000pg/ml 부분이 이해가 되질 않습니다. 저 양을 따로 만들어야 하는것인지  stock solution이 무엇인지 도통 감이 잡히질 않습니다 ㅠㅠ (standard curve를 연습하기 위해 BSA 방식은 몇번 해보았습니다) 무엇을 의미하는 것인가요?  
회원작성글 sintaro  |  2021.12.09
Q. ELISA 에서 항원항체 반응시간
ELISA 실험을 하다가 키트가 하나 밖에 없는 상황에서   샘플을 잘못 넣어줬다는 걸 발견했습니다. ㅠㅠ 약 3분 뒤에 다시 털어내고 워싱버퍼로 여러 번 워시해줬는데 괜찮을까요?  
회원작성글 TTorururu  |  2021.12.08
Q. Cell SN으로 ELISA 하고 결과 계산 방법 궁금합니다
cell culture plate에 cell 을 동일한 양으로 깔은 뒤 약물 처리를 하고  일정 시간 뒤 SN을 얻었습니다. 이걸로 ELISA 측정을 하는데요    ELISA가 다 측정한 뒤 계산 값이  (Sample O.D - Blank O.D 값)/단백질 정량값/std 기울기 * STD 최대 농도 값  이렇게 되는데요     cell의 경우에 위의 노란색으로 색칠한부분  1. 색칠한 단백질정량값으로 나누기 2. STD 최대값을 곱하기   이 두개를 제외하고 계산해도 되는건가요? 그러니까 (Sample O.D 값 - Blank O.D 값)/std 기울기   이렇게 계산을 해도 되는건가요? 단백질 정량한 값으로 나눠서 보정을 해줘야한다고 생각했는데 ,, 다른 친구가 이렇게 계산을 해서 궁금해서 질문 드립니다.   
회원작성글 스뚜  |  2021.11.25
Q. 싸이토카인 측정 전과정 어떻게하나요?
저번에 ELISA kit 측정할때 보니 스탠다드는 값이나왔는데 샘플값이 안나와서 싸이토카인의 분비량이 부족했던것같습니다. NO실험에서는 40~50uM 정도로 나와야 싸이토카인 측정이 된다던데 예비실험으로 seeding을 24well에 5X106으로 하여 LPS 1ug에 24시간동안 처리하였는데 NO값이 20uM 정도더라고요 그래서 싸이토카인을 측정하기 위한 조건으로는 보통 LPS를 어느정도 처리하는지, 처리시간은 어느정도로하는지 궁금합니다 측정할 싸이토카인은 IL-6, IL-8, IL-1beta, TNF-a입니다
회원작성글 응애에요  |  2021.11.23
Q. ELISA 샘플 희석농도 결정
안녕하세요. 실험 초보라.. ELISA 실험 관련하여 질문이 있습니다ㅠㅠ. 샘플 시료를 넣을 때 OD값이 standard 범위 안에 들어갈 수 있도록 적절히 희석해야 하는 것으로 알고 있습니다. 그런데 샘플 자체가 연속된 희석농도로 나올 것으로 예상되는 놈들입니다. 10개 샘플이 있는데, 1번이 거의 detection이 안 되고 10번에 가까워질수록 단백질이 몇 배씩 더욱 증가되는 양상입니다. 1번 샘플에 맞추어 희석없이 실험하려니 농도가 높은 샘플들의 OD 값이 standard 범위를 벗어나고, 10번 샘플에 맞춘 희석배율로 전체 샘플을 동일하게 희석해 진행하면 농도가 낮은 샘플들의 OD 값이 너무 낮아서 또 standard 범위를 벗어납니다..  시험조건에 따라 점차 희석되는 단백질 농도를 확인하려는 것인데, 이 경우 샘플마다 적정 희석배율을 서로 다르게 지정하여 ELISA를 진행해도 되는 것일까요? 고수님들의 도움을 부탁드립니다ㅠㅠ
회원작성글 뉴트리  |  2021.11.22
Q. SIGMA 사의 heparin 사용 문의드립니다.
SIGMA-ALDAICH 회사의 Heparin sodium salt from porcine  H3393-500KU https://www.sigmaaldrich.com/KR/ko/product/sial/h3393   를 구입하였습니다.   혈액을 뽑아 혈장을 이용하여 분석할 예정인데, 헤파린을 주사기에 미리 코팅해두고 내일 혈액을 뽑을 예정인데, 제가 가지고 있는 헤파린을 어느정도로 희석해서 주사기에 코팅해야되나요?
회원작성글 하삼동  |  2021.11.18
Q. 항염증과 면역증진
한 실험에서 PBMC를 가지고 monocyte만 분리해서 LPS 처리한 군에 샘플을 처리하였을 때 IL-1b가 감소하였는데, 또 다른 실험에서 rat에 cyclophosphamide를 주입해서 감소한 neutrophil, eosinophil, lyphocyte이 동일한 샘플에 의해 증가된 결과가 나왔습니다. 결론으로는 항염증과 면역억제 저하 개선이라고 표현을 했는데 동일한 물질에 의해 염증과 면역증진이 동시에 나타나는 결과가 나올 수도 있는 건가요??
회원작성글 용빠  |  2021.11.08
Q. 급합니다 도와주세요…elisa kit 관해서입니다
일단 맨처음 배양조건은 이러했습니다 샘플은 elisa kit가 비싸서 아예 주제가 다른 샘플들인데 동시에 진행하기위해서 다른 플레이트에 각각 동시에 실험했습니다. Sample 12h 배양 후 lps 1ug/ml 24h / 또다른 sample + lps 1ug/ml 24h 모두 48well에 1well당 1x10의5승의 셀농도로 seeding하였습니다 이 두 조건으로는 no실험을 진행하였고 값이 원하는 방향대로 잘 나왔습니다(샘플농도별 감소) 보통 lps 처리 상층액의 no값은 20-30uM대였습니다 이후 써모피셔에서 구매한 elisa kit (invitrogen)에도 똑같은 조건으로 실험을 했습니다 근데 스탠더드는 잘나왔는데 나머지 샘플, lps유도상층액 등 모두 값이 스탠다드보다 마이너스이거나 모든 시료가 싸이토카인의 농도가 차이없이 낮게 나옵니다 발현이 안된건지 도대체 뭐가 문제인건지 궁금합니다  실험한 싸이토카인은 IL-1beta,IL-6,8 , TNF-a입니다 모든 실험 전부 샘플값이 안나왔어요ㅠㅠ 저는 이제 어떻게 해야하나요.....?
회원작성글 응애에요  |  2021.11.04
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