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BioLab 신미경 교수
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Q. Skim Milk Agar 제조 관련 질문입니다
Skim Milk Agar 배지를 600ml 만들어야하는데 해당 배지가 없어서 skim milk와 agar 혼합하려합니다. Skim milk 1%와 agar1.5%를 섞어야한다는데 Skim milk는 D.W 1L당 배지100g 기준으로 만든 것을 300ml의 1%인 3ml와 D.W 297g을 다시 혼합해서 사용하는게 맞을까요? Agar는 4.5g + D.W 295.5ml 용액인건 알겠는데 Skim milk가 어렵네요...
회원작성글 실험실애기  |  08.04
Q. RWD사의 Stereotaxic 사용해보신 분 계실까요?
기존에 스털팅 사의 Stereotaxic 을 사용해봤었는데, RWD 라고 중국기업에서 마취기를 비롯해서 stereotaxic 도 나오는 것 같더라고요.   새로 하나 들여야할 것 같은데.. 가격이 좀더 저렴하면 고려해보려고 합니다. 혹시 사용해보신 분들 어떠셨나요? digital meter를 사용해야 해서 혹시 정확도가 좀더 떨어지는 것 같다던지 하는 이슈만 없으면 괜찮을 것 같습니다.
회원작성글 탱탱마루  |  08.04
Q. Ligation 결과 band 해석
1번 3번 5번이 각가 다른 Vector이고 Ligation 시킨 sample이고 2번 4번 6번이 각각 그 Vector를 digestion 시킨 상태의 Vector를 컨트롤로 걸어둔것입니다. 여기서 든 의문이 Control로 잘린 Linear한 Vector DNA를 넣어줬는데 왜 Band가 Ligase 처리한 Vector DNA[Circular form]보다 더 아래에 있는가 궁금해서요.. 혹시  1.Vector DNA + Insert DNA[159bp]의 Size가 당연히 더 크기 때문? 2.Restriction 처리가 한쪽만 일어나서 한쪽 부분의 Vector와 Insert만 붙어서 Ligation이 실패한것 인건가요?
회원작성글 BIOKKKS  |  08.04
Q. vector double digest 질문
안녕하세요. vector를 BamHI, XhoI으로 double digestion하고 있습니다. (vector에 다른 Bam, xho site는 없습니다.) 그런데 RE처리 할 때 Bam,Xho로 한번에 처리하니 extra band가 생기고, 이상해서 1. Bam 2. purify (pcr purification , D.W 40 Elu)  3. Xho  이 순서로 digestion 했습니다. 이때 2번과정 이후 EP를 내려보니 3개의 band가 형성되었는데, 3번 Xho 효소를 처리한 후, 다시 EP를 내려보니 하나의 band만 남은 것으로 확인되었습니다.   결과는 이렇게 나왔습니다.   1. BamHI이  star activity가 있다고 알고 있는데 그래서 enzyme을 너무 과량으로 넣어서 그런건가요?   2. Bam -> purify -> xho 까지 하고 나니 band가 다시 정상적인 size의 band로 나왔는데 이것도 왜그런 것인지 모르겠습니다. 3. 이 sample들 모두 버리고 다시 xho, Bam순서로 진행해야 할까요?
회원작성글 근당근당  |  08.04
Q. p19cl6 Cell 분양 문의드립니다.
안녕하세요, 세포 실험하는 학생입니다. p19cl6 Cells로 실험을 계획하고 있는데 혹시 해당 세포를 분양해주실 분이 계실까요? 만약 있으시다면 쪽지 부탁드리겠습니다ㅠㅠㅜ   감사합니다.   
회원작성글 밍z  |  08.04
Q. sequencing 시 data가 깨끗하게 나오지 않아요
  SARS-CoV-2의 spike protien을 Sanger sequencing을 통해 확인하고 있습니다.    one step RT-PCR kit(HyQ One step RT-PCR kit)를 이용해 cDNA 합성과 PCR까지 한번에 진행하고 있고, 전기영동 상에서 band가 뜨는 것을 확인 후sequencing을 업체에 의뢰하고 있습니다.    그런데 결과를 받아보면 여러개 sample 중 한두개씩 결과가 좋지 않네요ㅜㅜ    아래와 같이 comment를 받았습니다.    실험실에서 확인했을 때는 아래와 같이 band가 명확하게 확인되어 의뢰했는데 왜그럴까요..? (영동 사진의 4,5번이 sequencing 결과가 나오지 않았고, 나머지 sample은 sequencing 결과를 받았습니다.)      각각의 sample은 CT값을 기준으로 비슷한 정도의 것입니다.    10개 정도의 sample에서 한두개가 이렇게 튀니 속상하네요ㅜ   생각해볼 수 있는 원인이 뭐가 있을지 궁금합니다.
회원작성글 타코  |  08.04
Q. Nde1, Hind3제한효소처리 Pet23b 전기영동 관련 질문입니다.
안녕하세요. 대학교 학부 실험생입니다. 다름이 아니라 최근에 전기영동 실험을 하는데 Hind3와 Nde1으로 cut하는 결과값이 계속 잘 안나와서 스트레스를 받아서 질문글을 남깁니다. 사용하는 백터는 Pet23b 이며   insert가 다른 플라스미드 3가지(앞에3개), 뒤에는 하나가 안나왔지만 Hind3와 Nde1으로 double cut한 plasmid 3가지 입니다. 여기서 뭔가 이상하게 나와   Plasmid , Hind3처리, Nde1처리, Hind3+Nde1 처리한 순입니다. 해당사진으로 Nde1이 이상해 cut이 안나는거 같아 Nde1으로 농도만 다르게 한체 실험한 결과  Plasmid, Nde1(1), Nde1(1.5), Nde1(2) 순의 결과가 나왔습니다.()<-괄호 안 숫자는 제한효소 양입니다. Nde1의 띠가 자꾸 이상하게 나오는데 band가 2곳에서 생기는게 아닌거보면 잘리는거같기도하고 의문점이 너무 강하게 듭니다. 질문 1. Hind3가 잘못된게아닌 Nde1이 안잘린게 맞는건가요?? 아니면 둘다 cut되었는데 다른곳에서 잘못되어 결과가 이상하게 나온건가요?? 1-1. Nde1이 컷이 안되었다면 어째서 band가 한곳에서만 나오는건가요?? 2. Nde1과 Hind3를 처리할때 D버퍼에서 활성도차이가 Nde1(75~100), Hind3(10~50)이라 차라리 single cut을 두번하는게 나을까요?? 2-1. Single cut을 두번한다면 에탄올침전법을 이용하여 분리하면 된다는데 해당방법에 대한 설명을 조금더 해주실 수 있을까요? 혼자 연습해보니  유실이 너무 많이되는거 같습니다. 제 지식이 너무좁아 부끄럽지만 질문 글 읽어주셔서 감사합니다.
회원작성글 toret  |  08.04
Q. 곰팡이 배양
여러 조건(빛, 온도, 습도)들이 곰팡이 생장에 어떤 영향을 미치는지에 대해 실험을 계획 중에 있습니다 당초 계획은 빵에 핀 곰팡이를 멸균된 이쑤시개를 통해 PDA배지에 옮겨 PDA배지 전체로 퍼질 때까지의 기간을 측정한 후(대조군), 조건을 설정하여 곰팡이를 배양해 곰팡이가 PDA배지 전체로 퍼질 때까지 걸리는 시간을 측정하여 대조군에서의 기준 시간과 비교하는 것을 계획했었습니다 저희가 이 실험을 진행하면서 생겼던 문제점과 질문을 말씀드리겠습니다 1. 저희는 곰팡이를 멸균된 이쑤시개로 빵을 콕 찌른 다음에 PDA배지에 살짝 문지르는 방법으로 옮겼는데요. 이경우 곰팡이가 도말된 곳에서만 곰팡이가 자랐습니다. 왜 이러한 현상이 생기는지와 이를 보완할 수 있는 방법이 있을까요? 2. 온도와 습도를 조절하여 실험을 진행하고 싶은데, 고등학생이다 보니 많은 실험 기구가 있지 않습니다. 20도 이상 온도 조절이 가능한 인큐베이터 하나 뿐입니다. 온도 변인을 30도, 4도, 영하 20도 (각각 인큐베이터, 냉장고, 냉동고 온도와 비슷하기 때문에)로 계획했었는데요. 각각의 경우에 습도를 일정하게 만들어줄 수 있는 방법을 모르겠습니다. 고가의 습도 조절기를 사용하지 않고 습도를 조절할 수 있는 방법이 있을까요? 3. 일반 빵에도 곰팡이를 옮겨 생장 정도를 측정하려 하는데, 곰팡이를 옮겨도 일반 빵에서 더 이상 생장이 일어나지 않습니다, 이러한 현상이 나타나는 이유와 그 보완책에는 무엇이 있을까요?
회원작성글 정하연  |  08.04
Q. 0.45um syringe filter를 0.2um syringe filter로 대체해서 buffer를 멸균해도 괜찮을까요?
안녕하세요. 실험실에서 일하는 학부생 연구원입니다. 논문을 보고 electroporation에 필요한 버퍼를 만들어서 멸균하려고 하는데요. autoclaving보다 filtration을 권장하는 버퍼가 있어서 고민입니다. 논문에서는 0.45um syringe filter로 filtration을 하라고 하는데, 저희 랩실에는 0.2um syringe filter밖에 없습니다. syringe filter를 하는 이유가 bacteria를 없애기 위한 거라면 0.2um가 더 좋긴 하겠지만, 혹시 0.2um의 filter를 사용했을 때 buffer의 화학조성이 바뀌지는 않는지 궁금합니다. 다음은 제가 0.45um syringe filter 대신 0.2um syringe filter로 filtration 하려는 buffer들입니다. (참고로 ultrasonication 과정은 생략하고 magnetic stirrer로 대체할 것 같습니다.) 1. Glycine (w/v) 3.75g (25ml) Dissolve it in a small amount of DDW by ultrasonication & agitation. → add DDW to 25ml 2. MgCl2 (95.211 g/mol) 38mg and KH2PO4 (136.086 g/mol) 136mg (20ml) dissolved in a small amount of DDW → add DDW to 20ml 구글에 찾아보니 Glycine은 입자크기가 거의 나노미터 단위라 상관없을 것 같은데, MgCl2는 또 500um이라고 하더라고요(이건 물에 안 녹았을 때 이야기 같은데) magnetic stirrer를 오래 돌려서 물에 다 녹이면 화학물질들 사이즈가 딱히 상관이 없을까요?
회원작성글 dndb1303  |  08.04
Q. 질소탱크 잔량 측정
질소탱크에 질소 잔량 체크할때 보통 inch로 측정하나요? 피딩 날짜는 무얼 말하는 건지 알 수 있을까요? 감사합니다. 
회원작성글 기러기토마토  |  08.04
Q. Urine cell contamination 문제
Urine sample을 받아 Urine cell로 만들어 stock 해둔 cell을 thawing 하여 실험을 진행하려합니다.   thawing을 하고난 후 다음날에는 cell이 많이 불어서 정상적으로 잘 자라서 media change만 해주고 다음날 확인했더니 contam이 되어 다 죽어있더라구요.   incubator에는 urine cell과 fibroblast cell 동시에 키우는데 fibroblast cell은 건강하게 아무문제없이 잘 자라는데 urine cell에서만 공통적으로 contam이 확인이 됩니다. 지난번에 thawing을 했던 동일한 cell stock에서는 이러한 문제가 없었는데... 도데체 뭐가 문제일까요? 안전하게 incubator를 Auto돌려서 멸균을 다시 하고 진행하는게 답일까요?ㅠ 여러 문헌을 찾아보니 Urine cell이 baterial contam이 잘 일어난다고는 하는데, 이전에는 문제없던 stock이 최근들어 반복적으로 이런 현상이 나타나네요 ㅠㅠ   도와주세요 ㅠ
회원작성글 대학원생n  |  08.04
Q. IPS 세포 증식능
기초적인 질문이 될 수도 있지만, 분화 후의 IPS세포는 원래 증식능이 별로 없나요?   대부분의 판매되는 IPS유래 분화세포는 계대가 안된다고 적혀있는게 많은 것 같은데, 알려주시면 감사하겠습니다.
회원작성글 bioconn  |  08.04
Q. 가루제형 시료 항산화기능 측정 실험
항산화물질 관련 실험을 하고 있는 고등학생입니다. 리그닌의 항산화능 관련 연구를 하고 싶은데 제가 가지고 있는 가루제형의 리그닌으로는 dpph실험의 시료로 사용 불가능하다는 것을 알게 되었습니다.(용액형태의 시료만 가능하기에) 리그닌을 메탄올이나 에탄올에 희석시켜 시료로 사용해도 될까요? 또한 가루제형의 시료를 사용하여 항산화능을 확인할 수 있는 방법은 없을까요?
회원작성글 dpdpdpd  |  08.04
Q. AAS 측정값이 마이너스가 나오는건 이유가 뭔가요
최근에 AAS 배우기 시작한 뉴비인데, 오늘 K를 측정하는데 흡광도값이 마이너스가 나옵니다.  다른 원소들은 다 +값으로 나오는데 칼륨만 마이너스로 나오는 이유가 있을까요? 
회원작성글 Brleua  |  08.03
Q. pH 계산하는 방법 및 이론설명 부탁드립니다,,ㅇ
안녕하세요ㅠㅠ 화학이 전공은 아니지만 앞으로 배워야하는 많이 많이 모자란 학생입니다.. HPLC를 측정해야하는데 버퍼를 만들어야합니다.   제가 가지고 있는 Ammonium formate(고체)를 가지고 버퍼를 만드려고 합니다,, 1L짜리 50mM ammonium formate 버퍼를 만들어야 하고, pH는 4.4로 만들어야합니다.  50mM을 만들기 위해서 분자량이 63.06g/mol인  ammonium formate를 1L증류수에 3.153g을 넣으면 된다고 계산하였는데, pH를 4.4로 만들어야 하기 때문에 pH를 4.4로 만들 수 있도록 몇 g , mL씩 넣어야하는지 다시 계산해야 할 것 같은데, 여기부터 막막합니다..   현재 가지고 있는 ammonium formate의 pH는 5.5~ 7.5로, 약 6.5로 계산하려고 합니다ㅠㅠ 헨더슨 하셀바흐식을 가지고 계산하라고 하셨는데, 영상을 아무리 찾아서 공부해봐도 도저히 모르겠더라구요,, 몇 가지 질문하고 싶습니다. 0. pH가 6.5인 것과 물(pH 7)과 섞어서 pH 4.4가 되도록 할 수 있나요?   1. 반응식은 HCOONH4 + H2O --> HCOOH + NH4OH 맞나요?   2. 헨더슨 하셀바흐식을 이용하려면 산과 염기를 찾아야 하는데 HCOOH도 산이고, NH4+와 OH-에도 산 염기가 있는데, 이중 무엇으로 계산해야하는지,,   3. 50mM ammonium formate in water pH=4.4라고 되어있는데, 4.4 짜리 증류수에 50mM ammonium formate를 만들라는 건지, ammonium formate 수용액을 pH 4.4 가 되도록 하라는 건지 부터 말씀해 주시면 감사할 것 같습니다..ㅇ   4. 계산하는 방법등을 알려주시면 감사하겠지만 이거는 안해주셔도 괜찮습니다..!   한번에 너무 기초적이면서도 많은 것을 물어서 죄송합니다..ㅇ 알려주실 수 있으시면 알려주세요,, 감사합니다!! 이중에 아는것만이라도 답해주시면 정말정말 감사합니다ㅠㅠ..
회원작성글 Zl존초보  |  08.03
Q. Prism survival 그래프 값 수정
prism program을 이용하여 survival 그래프를 그리고 있는데요. 50%에서 끝나는데, y축 값 0 까지 line을 어떻게 만드는지 아시는분 계신가요? 이것저것 눌러봐도 잘 안되서 올리게 되었습니다. ex. 파란선 그룹은 28일에 모두 죽었으니까 20과 40 사이에 파란색 라인이 생겼으면 합니다. 통계프로그램이라서 그런지 단순하게 data  부분에 0을 추가하면 제가 원하는 그래프를 못얻더라구요.ㅠ   이 프로그램을 조금이라도 아시는 분들은 답변 해주시면 정말 많은 도움이 될 것 같습니다. 미리 감사합니다!   아래 그래프 처럼 하고싶습니다 .
회원작성글 I아니  |  08.03
Q. transfer가 일부가 잘 되지 않습니다.
western blot 과정중 항상 transfer한 후 겔을 coomassie에 넣어 transfer이 잘 되었는지 확인을 하는데요. transfer는 transfer buffer을 가득넣어주고 100V, 0.4A, 1시간30분동안 하면서 통주변에 얼음으로 감싸고 20~30분마다 ice pack도 갈아주고 최대한 안따뜻해지게 해주면서 하는데요.   transfer후에 겔을 확인하면 55kDa 정도 위로는 단백질이 남아있습니다. 다행이 저희가 확인하고자하는 단백질은 30~40kDa이지만 완벽하게 transfer가 되지 않는것에 의문이 되는데요. 매번할때마다 이러니 답답합니다. 최대한 nitro cellulose 덮고 whitepaper두장덮고 기포를 빼주기위해서 스크래퍼로 살살 누르고 최대한 밀착되게 마지막에 black, clear plastic으로 꽉 잡아서 transfer을 해줍니다. 머가 문제일까요?ㅜㅜ 도와주세요.
회원작성글 oneday  |  08.03
Q. CLSM 형광 파장대
애기장대에 두개의 미세플라스틱을 각각 흡착시킨 시료를 CLSM으로 보려고합니다. 미세플라스틱 형광 파장대는 다음과 같습니다. APS  ex 475nm  em 540 nm CPS  ex 470nm  em 505 nm CPS는 Alexa488이나 FITC로 보면 될거같은데 APS는 어떤 dye로 설정해놓고 봐야할까요,,
회원작성글 안뇽,  |  08.03
Q. [westernblot] Cleaved caspase-3 안티바디 디텍션 안되는 이유
안녕하세요. Western blot 실험에서 apoptosis 억제 관련 인자인 caspase를 확인하려고 하는데 35kDa에서 full length caspase-3는 잘 확인이 되는데 17kDa에서 cleaved caspase-3가 안뜹니다. 혹 이유를 아시는 분들 계실까요? 해당 antibody로 실험을 해보셨거나 하고 계신 분들 있으시면 조언 부탁드립니다. 일단 저는 cell signalling(#9662) 이 제품을 사용하고 있고, western 실험 조건은 10% gel에서 일반적인 로딩, wet 트렌스퍼 조건 따르고 있습니다.   +) 덧붙여, 혹 cleaved 형태는 발현되지 않고 caspase-3만 발현되면 apotosis를 억제한다고 보기는 힘든거겠죠? cleaved된 형태 없이 caspase-3 단독으로만 결과를 제시한 논문은 못본듯하여 질문드립니다. 
회원작성글 experiment  |  08.03
Q. 사포닌(진세노사이드)질문 있습니다.
안녕하세요. 현재 석사과정중인 학생입니다. 현재 진행하고 있는 연구가 새싹삼(새싹인삼)과 β-glucosidase 활성이 있는 유산균을 발효시켰을 때 고분자 진세노사이드에서 저분자 진세노사이드로 전환되는지를 확인하고 있습니다. 유산균의 β-glucosidase활성은 Esculin법으로 배지의 색 변화를 확인하였고, 조효소제를 제조하여 Ginsenoside Rb1의 전환을 확인하려고 하는데 조효소제 제조법에서 막히고 있습니다.. 여러 논문을 찾아보아도 대부분 비슷하게 서술되어 있어 막막합니다. 혹시 작은 도움이라도 주실 수 있으신 분 계시면 아주 작은 도움이라도 부탁드립니다. 감사합니다. 
회원작성글 선충  |  08.03
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