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웹진 Vol.24, No.10 (2022년 10월) 발간
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 카테고리: 전체 > Immunology
Mol. Biol.-DNA Mol. Biol.-RNA Mol. Biol.-Protein Immunology
Cell Biology Microbiology Plant Biology Laboratory Animals
Omics Chemical biology Bioinformatics Laboratory Equipments
Buffer/Reagent Bioethics Etc.
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Q. image J positive cell counting하는 방법 첨부파일
immunohistochemistry 데이터 분석 중인데,  total DAPI로 염색 된 세포 중에서 특정항체에 특이적으로 발현 된 (ex) KI67+ 세포들 만 Counting 하고 싶은데,  gray scale로 바꿔서 하자니 RFP, GFP 구분 없이 DAPI+ 포함 모든 세포가 잡혀서 counting하기가 힘들고 bit 전환없이 일일히 세자니 그 수가 너무 많고 전체 세포 대비 %를 구하기 힘들 것 같아 고민입니다. 논문들 보면 형광면염염색 figure와 함께 %막대그래프로 수치화한 figure를 함께 보여주던데, 딱히 method를 보아도 counting 방법은 나와있지 않네요ㅠ  
회원작성글 12312  |  07.17
Q. cell saturation
K562로 NK92 cytotoxicity calcein assay 했는데요   NK 효율 평균치 계산해보니 E:T ratio 10:1 = 90.8 5:1 = 88.6 2.5:1 = 76.8   이렇게 나왔는데 사수선배가 값을 보니 saturation된걸 알 수 있다는데 그게 무슨 말인거죵...? 그리고 10:1과 5:1 데이터 값이 별로 차이가 없다는건 NK가 자신의 역할을 다해서라는데 그건 또 무슨 말이죠 ㅠㅠ.ㅎ   당장 질문하고싶은데 자리에 안계시고 이제 주말이라 궁금해서 브릭에 올려봅니다ㅠㅠ 
회원작성글 카리나  |  07.15
Q. NK92와 분화시킨 NK의 차이
NK92와 제대혈에서 직접 분화시킨 NK의 차이는 뭐죠 media도 다르던데 둘의 차이가 궁금합니다ㅠㅠ  
회원작성글 카리나  |  07.13
Q. Elisa 실험관련 질문입니다.
안녕하세요. ELISA 관련 질문 드립니다.   같이 실험하는 분께서 질문 하신 내용입니다.   ELISA 실험진행시 보통 1x PBS사용하는데 ...   혹시 mes buffer 로는 사용이 가능한지 질문드립니다.    혹 사용하면 안되는 이유도 설명 부탁드립니다. 
회원작성글 mito59  |  07.13
Q. ELISA_같은 샘플을 사용했는데 결과가 이상합니다ㅠㅠ 도와주세요!
A549 cell을 IL-1b로 자극하여 elisa를 진행하였는데요,, IL-8을 SANDWICH ELISA를 진행하였을때 CELL 자극도 잘되었고 SAMPLE을 처리하였을때 유의하게 그 수치가 떨어졌는데요,, 같은 샘플로 IL-6를 ELISA를 통해 분비량을 봤을때 자극은 어느정도 되었지만 SAMPLE처리한 상층액에서 그 수치가 오히려 자극을 한 농도보다 더 높게나와서 유의성도 뜨지 않습니다,,ㅠㅠ(자극 시킨 상층액도 Cells only와 비교했을때 유의성이 뜨지않구요,,) 결과가 왜 이렇게 나온걸까요?ㅠㅠ,, 제발 도와주세요,,, STD는 잘 나왔습니다,,,,, IL-8은 키트에 상층액 샘플을 100배 희석하라고 나와있어서 희석을 했고, IL-6는 희석하란 말이 따로 명시되어있지 않아 그냥 했었다가 너무 높게 나와서 똑같은 회사 제품이라 100배 희석했다가 다시 TEST후에 5배 희석을 진행했습니다,,,,
회원작성글 sjsj3636  |  07.11
Q. FACS 분석시 세포 믹스 ?
사람조직에서 세포 추출 후 Facs 분석 예정인데요 안티바디는 3가지 사용하려고 하고 Facs 분석의 목적은 과연 이 조직에서 추출한 세포가  우리가 생각한 그 세포가 맞냐 아니냐 확인만 하려는건데요 분석에 필요한 세포 수가 250만 정도는 있어야 하고   보통 당일 나온 조직받아서 실험해보면  세포가 적게는 80만 많게는 500만까지 추출되는데 대부분이 150만 정도 밖에 안나와요 아무래도 분석 당일 세포 수가 부족할 것 같은데 같은 사람에서 나온 세포가 아니어도 될까요? 같은 부위 조직인데 A라는 사람과 B라는 사람에서 나온 세포 서로 섞어도 될까요?    
회원작성글 allison  |  07.07
Q. 면역 관문 억제제 질문입니다
생명 2 정규학습 외 남는 시간에 재미삼아 발표를 해보려 하는데요 면역 항암법 주제로 발표해보고 싶어서 면역관문억제제 개념이나 기능 정도 까지는 조사가 되는데 구체적으로 anti-PD-1이나 anti-PD-L1이 PD-1와 PD-L1에 들러 붙는 자세한 원리를 조사하기가 힘들어서 질문합니다 쉽게 좀 알려주시면 진짜 감사하고 아니면 고딩수준에서 쉽게 조사할 수 있는 곳 링크라도 걸어주시면 감사하겠습니다
회원작성글 nonchemist  |  07.06
Q. Jove 동영상 부탁드립니다.. ㅜㅜ
https://www.jove.com/kr/v/58490/unraveling-key-players-humoral-immunity-advanced-optimized-lymphocyte   안녕하세요 선배님들! 갓입학한 석사 새내기입니다. 다름이 아니라 세포 분리 실험을 진행하면서 프로토콜 및 동영상 보고 실험해보려 하는데 학교 IP 가 구독이 되어있지 않다고 해서 못보고 있는 실정입니다 ㅜㅜ  혹시 PDF 파일이나 동영상 파일 보내주실 수 있으신 분 계시면 부탁드려도 될까요! 감사합니다..
회원작성글 공대생15  |  07.04
Q. annexin v에 관한 질문입니다 첨부파일
안녕하세요 저는 고마바이오텍의 Annexin V-FITC Apoptosis Detection Kit 제품을 사용하려고 하는데 protocal 문의드립니다  분석하고자 하는 세포를 약1x106cells/ml로 준비한다. 0.5ml의 세포 현탁(5x105cell/ml)을 microtube로 옮긴다. 1000 x g로 5분간 상온에서 원심 분리하여 배양액을 제거한다. 차가운 PBS 0.5ml로 세포를 부드럽게 풀어준다. 1000 x g로 5분간 상온에서 원심 분리하여 PBS를 제거한다. 차가운 1x binding buffer 0.5ml로 세포를 부드럽게 풀어준다. 1.25ul의 annexin V-FITC를 가한다. 반응물에 빛을 차단하고 상온에서 15분 반응시킨다. 1000 x g로 5분간 상온에서 원심 분리하여 상층액을 제거한다. 차가운 1x binding buffer 0.5ml로 세포를 부드럽게 풀어준다. 10ul의 propidium iodide를가한다. 반응물을 빛을 차단하고 냉장 보관한다 (4℃) 빠른 시간 내에 유세포분석 (flow cytometry)또는 형광현미경으로 분석 한다.   7. .25ul의 annexin V-FITC 양을 늘려도 될까요? compensation 하니 fitc가 너무 적게 잡혀서요 annexin v 다른 키트는 1:1 비율로 pi fitc 넣는 것 같아서요 
회원작성글 힘들다  |  06.25
Q. Balb/c mouse 안구 하얗게 변하는 것
안녕하세요! 동물실험을 하다가 궁금한 점이 있어서 이렇게 질문하게 되었습니다. 마우스 i.p로 마취와 안와채혈을 하고 나면 마우스 눈이 하얗게 변했다가 점차 시간이 지나니까 원래 빨간색으로 돌아오더라구요..혹시 마우스 안구색이 변하는 이유가 있을까요?
회원작성글 rlatmddus  |  06.22
Q. ELISA 실험시 Ag, Ab 선정
위는 참고한 COVID-19 진단키트에 사용되는 ELISA 방법 원리입니다.   이처럼 특정 감염병에 대한 실험으로 ELISA를 진행해야 합니다. direct나 indirect 방법처럼 membrane에 Ag를 까는 방법과 sandwich나 competive처럼 capture antibodt를 까는 방법이 있는 것으로 아는데   헷갈리는 부분이 human에 대한 질병의 경우  chicken, mouse, rabbit, pig, goat 등 타 동물에서 얻은 Ag이나 Ab를 사용하는 것으로 아는데 1. 타 동물에서 얻은 것을 사용하는 목적과 2. 가장 대표적으로 많이 사용하는 Ag나 Ab가 무엇인가요??
회원작성글 immunovice  |  06.22
Q. 팩스 분석시 ctrl에 관한 질문
APC Mouse IgM, κ Isotype Ctrl Antibody FITC Mouse IgG1, κ Isotype Ctrl Antibody PerCP Mouse IgG1, κ Isotype Ctrl Antibody PE Mouse IgG1, κ Isotype Control BV510 Mouse IgG1, k Isotype Control BV421 Mouse IgG1, k Isotype Control  비 필수적 안티바디로써 facs 분석 시 cotrol로 사용 되어진다고 알고 있는데 ... 어떻게 control 로써 사용되어지는지 궁금합니다...  negative control로써  예를 들어 5마리의 혈액을 분석한다고 치면  5마리의 혈액중 하나의 혈액을 위의 항체로 염색하여 분석하는ㄱ ㅓㄹ까요 ㅠㅠ ................... 하나도 모르곘어요 ㅜㅠ 자세하게 ㅏㅇㄹ려주시면 감사하겟습니다ㅜ ㅜ ㅜ  
회원작성글 ekekekek  |  06.20
투표완료 western blot 실험 단계 중에서 blocking 전 후로 washing 하시나요, 안 하시나요?
진행 2022.06.18~06.22  |  참여자 107명  |  댓글 4
Q. [westernblot] 첨부한 detection 사진 결과 좀 봐주세요! (어떤 의견이라도 남겨주세요) 첨부파일
안녕하세요. Western blot 실험 결과 detection만 하면 결과가 이런데 혹 이유를 아시는 분들 계신가요?  일단 실험과정 간단히 요약하면 이렇습니다. 전기영동, transfer(100V, 1h), blocking(5% skim milk and 5% BSA 둘다 써봄, 1h), 1st antibody(Nrf-2, 1:1000, overnight), 2st antibody(HRP, 1:4000, 1h), detection(ECL reagent A:B=1:1) antibody 부착 후 washing(TBS-T 10mL, 15 min, 3번) Trouble shooting 시도 해보려고 washing도 15분씩 4번으로 변경하고, antibody 희석배수가 너무 높아서 그럴수도 있다고 하길래 1:2000정도로 늘려보았는데요.. 여전히 사진처럼 뿌옇게 나옵니다,, 추측하기로는 단백질양이 너무 적어서 signal 자체가 좀 약한것 같긴한데 어떻게 생각하시나요...? 일단 b-actin 자체는 계속 반복실험해도 잘 나타나서 transfer나 blocking 문제같지는 않거든요,, 어떤 의견이라도 남겨주시면 감사하겠습니다 :) 
회원작성글 experiment  |  06.15
Q. AKTA PURE Protein A 를 이용한 단백질정제실험
항체의 구조와 정제 원리를 이해하고, Protein A-친화 크로마토그래피를 통한 항체 분자(IgG)의 정제 기술을 익힌다.  세포주에서 배지로 분비된 항체 분자를 모아서, protein A-친화 크로마토그래피를 통해 순수 정제한다.   정제한 항체의 농도를 280 nm에서의 흡광도를 통해 측정하고, SDS-PAGE를 통해 정제한 항체의 순수도를 판단한다.     실험을 진행했는대 서론이나 고찰을 쓸게없어서 뭘쓰면 좋을지 여쭤봅니다. affinity chromatography 를 이용해서 쓸라고하는대 쓸게없더라고요 뭘써야좋을까요 ?  IgG 에대해서도 뭘쓰면 좋을까요 ? 고수님들 도와주세요 ㅠ
회원작성글 imjs  |  06.11
Q. 0.1 ml 전혈 혈장분리 가능한가요?
제목 그대로인데요 0.1 ml 전혈 (어류로부터 체혈)에서 혈장 분리 가능할까요? 현재 다양한 방법으로 시도해보고 있으나 젤리가 생긴다거나 혈장이 붉다거나 둘 중에 하나이고 제대로 분리가 잘 안됩니다 도와주세요  
회원작성글 시럼실징징이  |  06.10
Q. ELISA (acylation step이 들어가는 이유)
  Blood collection 후, plsama를 통해 ELISA를 진행했습니다.  Protocol에 나와있는대로, acylation reagent를 넣긴 했습니다....만 왜 넣는지를 이해가 안갑니다.. kit #BA E 2200 입니다.    답변 주시면 정말 감사합니다.
회원작성글 Vaydor  |  06.09
Q. 논문 제목 모를때 논문찾기 첨부파일
안녕하세요 ㅠㅠ  먼저 이런 질문 올리게 됨에 정말 면목없는 일인 것 같지만 그래도 아실 분이 있으실거 같기도 하여 질문드립니다... 지인( 아직 학부생)이 과제를 해서 논문을 찾아보다가 캡쳐를 하고 그랬는데 이 논문에 대해서 캡쳐는 했는데 어떤 논문인지 표시하는걸 까먹었다고, 제목을 모른다고 해서 같이 찾아주던 중이었습니다.  저도 pubmed, 구글 스칼라 등에 문장 단위로 골라서 검색을 당연히 해보고 질문드리는거구요... 하루 정도 시간 날 때 찾아보았는데 나오지 않아서 혹시나 하고 질문드립니다 ㅠㅠ   분야는 immunology - CD25가 Treg cell의 바이오마커로서~~ 이런 것 내용 같습니다.   
회원작성글 미생물의노예  |  06.09
Q. [western blot] Ponceau 염색 후 band 안 나오는 이유 첨부파일
Western blot 과정 중 transfer 후에 ponceau 용액에 membrane을 담궈서 band 확인할 때 band가 안뜨는데 왜 그런지 아시는 분 있나요? 폰슈에서 안나오고, 마지막 detection까지 해도 band가 보이지 않습니다..transfer가 끝난 membrane을 보면 marker는 잘 묻어나는 걸 보면 transfer과정에서 큰 문제는 없었던것 같은데 왜 그럴까요?ㅜㅜㅜ Protein 양=10ug 정도 PVDF membrane (Methanol로 적셔서 활성화 시킴) transfer 조건= 100 V, 60 min (-) Sponge-filter paper-gel-PVDF membrane-filter paper-sponge (+)
회원작성글 experiment  |  06.08
Q. facs 분석 시 lysis buffer 넣는 순서
whole blood를 이용하여 IPT 분석을 하는 프로토콜을 만들려고 합니다. 그런데 비장을 이용한 세포 분석 시에는 lysis buffer를 이용하여 적혈구를 용해시킨 후에 항체를 붙였는데 전혈 (whole blood)를 이용하여 팩스 분석을 하는 경우에 전혈에 바로 항체 염색을 한 후에 적혈구 용해를 하던데 이렇게 하는 이유가 있을까요 ㅜㅜ ? 항체같은 경우도 100ug당 1x10^6cell이 되게 염색하는게 좋다고 하던데 전혈을 바로 염색하게 되면 세포 수는 어떻게 측정해서 항체를 계산해서 염색하죠... 아무것도 모른다 생각하고 설명해주시면 감사하겠습니다 ㅠㅠㅠㅠㅠㅠ
회원작성글 ekekekek  |  06.07
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