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[우당탕탕 석사 적응기] 석사 1학기 - 새로운 환경, 그리고 후회
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 카테고리: 전체 > Cell Biology
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Q. 세포의 비성장속도를 구하는 이유가 뭔가요?
미생물의 생장곡선 중 대수기의 성장 속도를 구할 때, 그냥 시간에 따른 세포수의 증가량을 구하는 것이 아니라 이 값에서 초기 세포수를 나누어 비성장속도를 구하는 이유가 무엇인가요? 명확한 이유가 궁금합니다!
회원작성글 스윙스약혼녀  |  09.16
Q. 구강상피세포 그람염색 질문합니다!!
고등학생입니다. 구강미생물에 대한 탐구 실험을 하려 하는데 입안에 면봉으로 문질러 구강상피세포를 떼어낸 후, 그람염색 실험을 하면 그람양성균과 음성균을 현미경으로 확인할 수 있는건가요? 많은 그람염색 실험에선 그람양성균과 그람음성균을 분리해서 배양한 다음 실험하던데, 현실적으로 균 배양은 힘들것 같아서 단순 구강상피세포로도 그람염색 균 관찰이 가능한지 궁금합니다 정리하자면 1. 면봉으로 떼어낸 구강상피세포로 그람염색 실험해서 현미경으로 그람양성균 음성균 관찰이 가능한지 2. 꼭 배양이 필요하다면, 별다른 장비 없이 구강 세균 배양하는 법 전문적 지식이 없는건 맞지만,,,자세하구 친절하게 설명해주시면 넘 감사할것같아요ㅠㅠㅠ
회원작성글 leeseo  |  09.15
Q. water bath 스펀지
cell에 자세히 보면 점이 막 생겨있는데 컨탐된 것 같습니다. 문제가 water bath에 medium 데울때 한번 엎어져서...인 것 같습니다ㅠㅠㅠ 미디엄 데울때 안넘어지게 끼우는 고정 스펀지가 있는지 궁금합니다. 플라스크에 끼우는 추는 생각보다 비싸서... 바이알 끼우는 것 같은 스펀지를 찾고 있습니다!
회원작성글 멍게  |  09.15
Q. PDL, PLL coating 차이와 형태 질문드립니다.
안녕하세요, 저는 HEK293T를 이용하여 confocal sample을 준비중에 있습니다.   저희 실험실에서는 HEK293T을 주로 이용해왔으나, 여태까지 coating되지 않은 plate만을 사용해 왔기 때문에 Poly D lysine이나 Poly L lysine에 관해서는 잘 알지 못합니다.   그런데 찾아보니, 일반적인 well plate에서도 transfection시에 coating된 well을 사용하시는 경우도 있더군요. 저희는 그냥 최대한 조심히 control하여 실험 step마다 cell이 최대한 떨어지지 않게 하는 편입니다. 물론 culture시간도 최대 4일 이내로 짧아서, coating이 필요 없는 것 일수도 있습니다.   하지만 confocal sample을 준비하는데에는 coating이 필요할 것 같아서 알아보고 있습니다. 처음 cell을    Hela cell을 이용하여서는 sample준비를 여러번 해 보았지만, 해당 cell은 부착력이 매우 강해서 coating없이도, 거의 떨어지지 않더군요.. 하지만 HEK은 워낙에 잘 떨어지는 cell이라 반드시 coating이 필요할 것 같습니다.   여기서 제가 드리고 싶은 질문은,     1. PDL vs PLL 제가 찾아본 결과 PDL은 다른 enzyme에 의해 분해되지 않으며, PLL보다 덜 toxic하다고 나와있었습니다. 그러면 PDL이 무조건 더 좋은거 아닌가요..? 가격차이도 거의 없는 것 같았습니다. 근데 대부분의 lab에서는 PLL을 사용하는 것 같더라고요. 혹시 이 둘에 큰 차이가 있을까요? PDL coating glass 위에서는 cell이 잘 안자란다거나..   2. Powder vs Solution PDL, PLL 모두 powder 형태와 solution 형태로  팔고 있었습니다. powder형태는 적당히 DDW에 녹이고 filteration 해서 사용하는 것 같고, solution은 바로 dilute해서 사용하면 되는 것 같았습니다. 혹시 둘 중 뭘 사는것이 좋을까요? 저희 랩에서는 confocal로 imaging을 하는 것이 주 분야는 아니지만, 가격차이가 크게 난다면 Powder형태로 구매하는 것이 좋을것 같다는 생각은 하고 있습니다.   3. 재활용..? 또 많은 분들께서 PDL, PLL은 재활용이 가능하다고 하시던데.. 이게 무슨 뜻인지 잘 모르겠습니다. coverglass를 담갔던 PDL, PLL을 syringe 등으로 suction해서 다시 쓴다는 의미인가요..? 그러면 contam 걱정은 없는 건지.. 궁금합니다.     깨알 팁이라도 좋으니 조금이라도 도와주시면 정말 감사드리겠습니다. 감사드립니다!
회원작성글 neuronal p..  |  09.15
Q. B16F10 cell 분양 가능하신 분 있을까요?
안녕하세요. 세포배양은 초보인 석사과정생입니다. ATCC에서 산 b16세포를 배양 후 동결시키고 이번에 풀었는데 세포가 부착이 되지 않고 다 죽었습니다. 5% DMSO를 넣었고, 한 vial에 40만개씩 얼렸습니다. 너무 적은양을 얼려서 그런걸까요? 혹시 early passage인 b16f10 세포 분양 가능하신 분 계실까요? Early passage가 아니여도 좋습니다! 분양 가능하신분 sgy0527@gmail.com으로 연락 바랍니다!!
회원작성글 복동  |  09.15
Q. working 농도 계산에 질문이 있습니다
현재 배지를 2ml씩 넣어서 배양중인 35π dish가 있는데요. 이 cell에 A23187이라는 물질을 1uM 농도로 처리하고자 합니다. A23187의 stock 농도는 1mM인데요. 이렇게 cell에 물질 처리할때도, working 농도 계산은 MV=M'V' 식을 사용해서 사용할 stock의 volume을 계산하면 되나요?   1mM x X = 1uM x 2ml 1000uM x X = 1uM x 2000ul X = 2ul 위의 계산대로라면 2ml 배지가 들어가 있는 35π dish에 A23187 stock 2ul 넣고 잘 섞어주면 되는지 궁금합니다!
회원작성글 가우미  |  09.14
Q. 3T3-L1 세포 분화 시 Insulin
안녕하세요. 3T3-L1 세포 분화 실험을 하고 있는 연구원입니다. ATCC의 3T3-L1 세포 분화 프로토콜을 보면 분화 시, human insulin이 아닌 bovine insulin을 사용해야 한다고 나와있는데 혹시 이유를 아시는 분 있을까요?
회원작성글 윤꽁꽁  |  09.14
Q. pan02 cell 얻을 수 있을까요?
췌장암 면역치료제를 개발하고 있는 연구원입니다. pan02으로 마우스에 seeding한다고 하는데  pan02 cell이 필요해서요 ATCC에서도 판매하지 않고  혹시 분양이 가능할까요? 아니면 판매가능한 곳이라도 알려주시면 정말 감사하겠습니다.    
회원작성글 개미는뚠뚠  |  09.14
Q. Solvent informations
Powder로 된 compound를 세포 실험을 계획하고 있습니다. 아래는 Solvent informations 입니다. 세포 실험에 powder를 물에 녹여 사용하라는 뜻인가요? 아님 DMSO에 녹여 사용하라는 건가요?  Solvent informations: Dichloromethane, acetic acid and water as solvents used in production. DMSO for product dissolution.
회원작성글 SoliDeo  |  09.14
Q. HEK293 coverslip위에서 culture
안녕하세요. 저는 현재 HEK293 cell을 이용해서 confocal 샘플 준비를 design중에 있습니다. 해당 실험에 있어 몇가지 질문사항이 있어서 질문드립니다. 1. Coated or Non-coated HEK cell이 워낙에 잘 떨어지는 친구들이라, 대부분은 coverglass를 Poly-L-Lysine coating하여 사용하시는 것으로 알고 있습니다. 지금 design하는 실험은 antibody를 이용한 immunostaining은 아니고, fluorescent reporter를 transfection하여 단순히 관찰하는 수준입니다. 따라서 1) cover glass위에서 cultrue, 2) transfection 후에, 3) fixation하고 4) slideglass위에 준비하기만 하면 될 것 같습니다. 혹시 이러한 실험에서 반드시 coated coverslip가 필요한지, 만약 일반 coverslip위에 키워서 샘플을 준비하게 되면 어떻게 되는지 여쭤보고 싶습니다. 2. Coating reagent Poly-L-Lysine coating이 standard인 것으로 나와있는데, 찾아보니 Poly-ornithine과 같이 다른 여러가지 polymer를 사용하기도 하더군요. 혹시 이러한 실험에 있어 Poly-D-Lysine 보다 더 좋은 선택지가 있을까요? 2. Technique 마찬가지로 잘 떨어지는 친구들이라 실험 테크닉도 주의해야 할 것 같습니다. 개인적인 생각으로, 마지막 단계인, Glass위에 reagent 뿌리고 coverglass를 덮을 때 cell이 다 떨어질것 같은데.. 혹시 이 단계에서 cell이 떨어지지는 않는지, 혹시 주의할 사항이 있는지 여쭤보고 싶습니다. Imaging고수님들 도와주시면 정말 감사드리겠습니다.. ㅠ 감사합니다.
회원작성글 neuronal p..  |  09.13
Q. beta-amyloid 실온 보관
안녕하세요,, 전문가님들,,, beta-amyloid 1-42로 MTT 실험을 해야 하는데 만약에 Aβ stock이 냉동보관이 아닌 실온에 오랫동안 보관이 되어있었다면 Aβ의 활성도가 많이 떨어진 상태일까요..? 약 6일 정도 실온에 나와있었던 상태입니다.. 혹시 관련 논문이나 해당 내용에 대해 아시는 분 계시면 답변 부탁 드립니다,,ㅠ
회원작성글 tntn  |  09.13
Q. Mycoplasma 감염 관련해서 조언 부탁드립니다....
HEK293T 계열 cell을 키우고 있는데, 제가 봤을 땐, Mycoplasma에 감염된 것 같은데 진짜 mycoplasma 감염이 맞는지 아니면 다른 감염인지 조언 부탁드립니다. 육안으로 봤을 땐, plate에 하얗게 colony가 생겼고, 좀 더 자세히 확인하기 위해 현미경(4X, 10X, 20X) 촬영했던 사진 첨부합니다. 다들 바쁘신데 두서없는 제 글을 읽어주셔서 감사합니다.
회원작성글 실험알못  |  09.13
Q. 전배양, 계대배양 질문
ypd broth에서 액체 배양하여 전배양을 한 다음 계대배양을 하여 OD 1.0을 맞추려고 합니다. 전배양의 경우 2~3일 하든 하루만 하든 상관없나요? 어차피 계대배양을 하니까 전배양은 며칠을 하든 상관이 없지 않나요? 하루만 하려고 했는데 3일정도 해도 괜찮을까요? 3일정도 하면 세포들이 죽을까요? 
회원작성글 wooooo  |  09.13
Q. 세포 보관 및 폐기 방법
저희가 macrophage를 분양받아 LPS를 이용한 염증 실험을 할 예정입니다. 1. macrophage를 분양 받은 후에 4일 후에 실험할 예정인데, 이렇게 단기간에 세포를 보관하는 적절한 방법이 있나요? 2.  LPS와 macrophage 사용 후에는 어떻게 폐기해야 하나요? ++ LPS가 패혈증 쇼크를 일으키는 원인이라고 하는데 실험 중 접촉이 일어나게 되면 패혈증에 걸리거나 위험해질 확률이 높은가요? ++ LPS는 어디서 구매할 수 있나요?
회원작성글 정하연  |  09.11
Q. MC3T3-E1 배양시 원심분리 xg
MC3T3-E1 배양시 프로토콜에 적힌 원심분리 xg는 약 125 xg에서 5~10분을 권장하던데.. 저희 실험실에선 아마 300 xg가 최소 xg이거든요..  이럴 경우 어떻게 해야할까요..? 논문을 찾아봤을 때는 배양시 말고 실험할 때 1,5000 rpm으로 6분 or 8,000rpm으로 10분 진행한 글은 보았습니다..  로터 크기를 안 재서 rpm계산도 못하고 답답하네요 ㅠㅠ...
회원작성글 맛도리  |  09.11
Q. 환경조건 변화에 따른 미생물 성장
교내에서 탁도 변화에 따른 미생물 생장 곡선을 그리는 세부주제로 실험을 진행 중에 있습니다. 카올리나이트를 사용하여 탁도 변화를 주려고 하는데 ss값을 5,10,15,20을 정확히 맞추어 실험을 진행하려 하는데 1L의 영양배지에 카올리나이트를 각각 5mg, 10mg, 15mg, 20mg을 넣어서 수질공정시험법에 따라 부유물질 실험을 진행하였는데 값이 정확하게 5,10,15,20이 측정되지도 않고 점점 값이 증가되야하는데 증가하지도 않습니다. 어떤것에 문제가 있을까요?   실험 목적은 환경조건변화에 따른 미생물의 성장 변화를 파악하기 위함입니다. 미생물은 일반적으로 잘 알려진 마이크로시스티스, 아나베나, 오실라토리아를 사용할 예정이며, 처음 분취전 영양배지(bg-11)에 카올리 나이트를 첨가하여 0,10,15,20 mg/L의 ss농도 상태에서 어떤것이 성장이 잘 되는지 어떤것이 더딘지를 파악하기 위한 실험입니다. 또 부유물이 침전이 될것 같아서 매일 교반을 같이 진행하고자하는데 이는 미생물이 성장하는데 다른 영향을 줄지 의문입니다. 예를 들어 교반시 발생하는 열이라던지, 마그네틱바에 조류가 끼인다던지등의 의문이 생겨 다른 연구자분들의 의견이 궁금합니다.    일전에 한번 올렸던건데 다시 재업하여 죄송합니다.
회원작성글 01+084+15  |  09.08
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