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Q. alkaline phosphatase 조직 염색!? 첨부파일
hair dermal papilla 부분 stemness 확인 위해 마우스 피부 조직 cryomold sample을 ALP 염색해 볼 예정입니다. 1. EC나 골세포 ICC외에, 조직 염색 방법은 찾아봤을 때 많이 없어서 과정을 여쭙 싶습니다. 밑의 과정이 맞는지 확인해주시면 감사하겠습니다. PBS wash --> NBT/BCIP sol. add 15min in dark (파랑색 띄면 멈춤) --> PBS wash --> mounting 2. ALP 염색 자체는 조직이 본래 가지고 있는 효소를 염색하는 것이라, 따로 항체(ex)anti-ALP antibody)를 붙여줄 필요 없나요? NBT/BCIP sol.이 발색제 용도인건 알겠으나, 다른 여러 프로토콜들에 only substrate를 첨가한다고 하지 따로 1차 항체를 붙여준 다는 내용이 없어 궁금합니다. 3. SIGMAFAST™ BCIP®/NBT(B5655)를 사용해 염색해 볼 예정인데 첨부해놓은 데이터시트지에서 보시다시피, 과정 자체가 블롯용이라 IHC에 참고하기는 어려워보이는데 1.기입해놓은 과정으로 진행하면 될까요..   도움주시면 정말 감사하겠습니다..!
회원작성글 12312  |  10.17
Q. FACS Blocking 좀 알려주세요ㅠㅠ
안녕하세요! FACS를 처음 공부해보는 석사생입니다!ㅠㅠ 저는 HL-60(Human) cell을 이용하여 CD11b를 FACS를 이용하여 측정하려하는데요! 저희 연구실에서는 mouse sample을 2.4G를 이용하여 blocking을 해주었는데 찾아보니까 mouse fc receptor blocking용으로만 사용하는거 같아서요ㅠㅠ human cell sample에서는 어떻게 blocking을 진행하나요ㅠㅠ,, 찾아보니 BSA를 이용하여 blocking해준다는데 이게 맞나요?,, 다 말이 달라서요,, 아니면 2.4G를 human sample에 사용해도 되는건가요? 논문 찾아보면 따로 blocking 했다는게 따로 명시가 안되어 있어서요,, 일단 저는 pellet 모아서 FACS buffer(0.5% BSA in PBS) 90ul+Ab 10ul을 넣은 후 4도에서 30분 둔 후, FACS buffer로 3회 wash를 진행하고 FACS를 찍어볼까 합니다,, Human cell pellet sample에서 blocking을 보통 어떻게 하나요?ㅠㅠ 위에 적은 protocol대로만 진행해도 괜찮을까요???? 도와주세요,,,,,,,,,,,,,,,,
회원작성글 sjsj3636  |  10.13
Q. ELISA 항체검출과 항원검출의 차이
현재 Anti-HIV 검사에 사용되는 kit는 antigen-sandwich assay를 이용하고 있고 Anti-HCV 검사에는 indirect assay를 이용하고 있습니다. 둘 다 HIV 항체, HIC 항체를 검출해냄으로써 감염력이 있는 지 확인하는 것인데 이처럼 항원을 검출하는 게 아니라, 항체를 검출하는 데에 장점이 있을까요? 의견 부탁드립니다.
회원작성글 젼젼  |  10.12
Q. IP lysis buffer
IP lysis buffer  보통의 western lysis buffer로 하면 안되나요?
회원작성글 새슬  |  10.12
Q. BCR, TCR 활성화 조건 질문이요
우리몸에 항원이 들어오면 내재면역세포(대식세포, NK세포 등)가 먼저 반응한 후에, 그 다음 방어선으로 적응면역세포가 출동한다고 알고있는데 그럼 BCR, TCR은 내재면역세포가 반응하기전까진 눈앞에 항원이 있어도 먼저 활성화하지않나요? 위 말대로라면 맞지않나요?
회원작성글 nm  |  10.11
Q. 면역학 BCR, TCR 질문이요 ㅜㅜ
항원이 들어오면 1차적으로 내재면역세포가 반응한후에 그럼에도 불구하고 뚫리거나 버거울경우 B cell과 T cell의 도움을 받는다고 알고있습니다. 그런데 B cell과 T cell은 체액을 항시 돌아다니는데, 내재면역세포가 버거움을 느끼지못하면(내재면역세포로 항원을 충분히 막아낼수있다면) BCR과 TCR은 항원을 인식하지 않고 그냥 가만히 있게되나요?
회원작성글 nm  |  10.11
Q. ELISA
ELISA 키트를 구매해서 실험을 진행했는데 흡광을 찍으면 거의 대부분의 웰에서 측정범위보다 높게 찍힙니다. 육안으로 봐도 연노란색이 아니고 갈색으로 보입니다. 샘플의 농도문제라고 하기엔 키트에 들어있던 스탠다드도 측정범위를 벗어납니다. 워싱이 제대로 안됐나해서 두번째 실험에서는 워싱도 신경써서 진행했습니다.(30초간 플레이트를 바닥에 대고 흔들며 5회 반복해줬습니다.) 혹시 ELISA하면서 이렇게 나올만한 다른 원인이 있을까요..
회원작성글 hj1226  |  10.10
Q. IP cell pellet
IP 할 때 cell이 모자랄 경우, cell pellet 얼려두었다가 합쳐서 lysis해도 되나요?
회원작성글 새슬  |  10.10
Q. western blot 휘어짐 현상
안녕하세요! 이제 막 실험 배운지 3주 된 생초보입니다.. 오늘 실험을 끝내고 베타액틴 찍어보았는데.. 다른 분들 결과 보면 일직선으로 정말 이쁘게 나오더라고용  그치만 저는 왜 일직선이 아니고 갈수록 휘어지게 나온 것일까요? 결과 해석하는 데에는 문제없지만 그래도 의문이 들어 질문 올립니다. 이 문제에 대해 함께 고민해주신다면 정말 감사하겠습니다.
회원작성글 프롬이  |  10.07
Q. 항생제 MIC 관련해서 질문있습니다.
실험실에 새로 항생제를 구입해 항생제 stock을 만들어야 합니다.  구입한 항생제 중 Penicillin G, potassium salt와 Tetracyclin HCl, Vacomycin HCl이 있습니다. 근데 이 항생제들의 MIC 관련 references를 찾지 못하였습니다.  이 항생제들의 MIC가 각각 Penicillin G, Tetracycline, Vacomycin의 MIC와 큰 차이가 존재하나요?
회원작성글 gPdls21  |  10.07
Q. clodronate liposome, anti-asialo GM1
안녕하세요. 논문을 읽던 중 Clodronate liposome은 macrophage depletion에 사용되어지며 특히 NOD/SCID에서의 반복 투여는 독성을 유발한다고 합니다. clodronate liposome의 depletion 기전과 왜 nod/scid에서는 독성이 나타나는지 궁금합니다. 추가로 anti-asialo GM1은 NK depletion에 사용되었는데 기전이 궁금합니다. 찾아보려해도 명확히 나와있질 않아 도움이 필요합니다 ㅠㅠ
회원작성글 ㄹㄴㅇㄴㅇ  |  10.07
Q. Mouse 관절 조직 염증 분석 실험에 관해서
안녕하세요. 저는 현재 CIA mouse로 RA 유도하여 약물의 항염증성을 확인하는 동물 실험을 진행중입니다. 저희 실험실에서 류머티스 관절염을 다루는게 처음이라 선배분들이나 교수님께 질문하는 것에 한계가 있어 조언을 구하고자 글을 올립니다. 지금은 CIA model 유도 과정에 있으며 2nd immunization 후 약물 treat 후, 약 2주간 tracking할 예정입니다.  이후 sacrifice하여 serum 및 조직 내의 pro-inflammatory cytokine level을 ELISA로 확인하려고 하는데, mouse joint의 어느 부분을 section하여 조직을 분리해야할지 도통 감을 잡을 수가 없더라고요. H&E나 safranin과 같은 staining을 할 경우에는 femur 및 tibia site를 모두 section하여 고정하는 것으로 알고 있는데, cytokine level을 볼 때는 어떤 식으로 실험들을 진행하시는건지 궁금합니다.  혹은 IHC로도 cytokine을 staining하여 확인하는 경우도 있는 것 같던데, tissue의 경우에는 ELISA보다는 IHC가 더 유리한 것인지, 아니면 tissue 내 cytokine 양이 detect하기에는 너무 적어서 그런 것인지 궁금합니다. 긴 글 읽어주셔서 감사합니다.
회원작성글 Dustone  |  10.06
Q. mouse 조직면역염색 4color 관련
안녕하세요.  저는 mouse 조직으로 면역염색을 하려는 대학원생입니다. 다름이 아니라 antibody 구입하려고하는데 dapi 포함 4color 염색 조합을 찾는게 매우 어렵네요... A,B,C,DAPI 염색을 한다고했을때 A- 2차 goat anti-rabbit 488 B- 2차 goat anti-rat 594 C- 2차 goat anti-mouse 647 ->>>>>>> 여기가 문제..   로 단순하게 생각했는데 mouse 조직이다 보니 2차 host가 mouse 인 antibody가 없더라구요.... 이런경우는 어떻게해야 4 color를 염색할 수 있을까요?   ㅠㅠㅠ    노하우 공유부탁드립니다.
회원작성글 신경생물  |  10.05
Q. qPCR 프로토콜 질문
qPCR 프로토콜좀 알려주실 수 있나요. 아무리 찾아봐도 못찾겠습니다. 제가 찾는 방법을 잘 모르기도 하구요... 프로토콜을 찾을 수 있는 사이트라도 알려주시면 감사하겠습니다.
회원작성글 감귤서리범  |  10.02
Q. CMV culture urine검체 양성 첨부파일
안녕하세요 전에 검사들 토대로 culture 배양시켜서 눈에 익히려구 공부를 하고있는데 urine 검체로 배양시켜본 검체가 양성인지 여쭙고 싶습니다 다른 양성 검체들과는 세포가 배양된 모양이나 양상이 다르게 나와서 너무 헷갈리네요ㅠㅠ 다른 검체들은 셀 크기도 확실히 더 크고 모양도 돼지코 모양으로 딱 이쁘게 나오는데 혹시 왜 다른 검체와 양상이 다른지도 아시는분이 계시다면 가르쳐 주셨으면 합니다 저배율로 보다가 찌꺼기인지 구분이 어려워 고배율로 최대 확대했는데 양성인걸까요?
회원작성글 pink1048  |  09.30
Q. NK cell의 IFN-gamma 농도 측정 결과 질문입니다
안녕하세요 저는 운동 전,후의 NK cell의 IFN-gamma를 측정하는 실험을   했는데 Kit은 NKmax의 NK vue kit을 사용했습니다.   궁금한 것이  36명을 대상으로 측정했고 standard range가 0~2000pg인데 대상자의 절반이 이상이 2000pg가 넘게 나오더라구요 standard에는 문제가 없어 보이고 saturation 된 것 같다고 하는데 saturation 된 데이터는 사용 할 수 없는 건가요? 재실험을 할 수 없는 상황이라 데이터를 사용 할 수 있는 방법은 없는걸까요?  
회원작성글 NKCA  |  09.28
Q. ELISA RD1W
안녕하세요! ELISA 질문드립니다!!ㅠㅠ 도와주세요 제가 R&D사의 human eotaxin ELISA kit를 사용하여 실험을 진행하였는데요! 아에 모든 sample의 흡광도 수치가 blank만큼 바닥을 찍어서요,,,, 프로토콜에는 Assay diluent RD1W를 100ul를 넣고 sample과 STD를 50ul 넣으라고 되어있어서 그대로 진행을 했습니다! 혹시 RD1W없이 SAMPLE만 150ul 넣은 후 실험을 진행해도 괜찮을지 질문드립니다ㅠㅠㅠㅠ
회원작성글 sjsj3636  |  09.27
Q. 마우스 단백뇨 측정
마우스 단백뇨를 측정하려고 하는데 BCA측정법으로 측정이 될까요?? 대부분 어떻게 측정하시나요..?
회원작성글 짱짱  |  09.26
Q. FACS antibody 질문 드립니다.
안녕하세요    CXCR4 expression 을 확인하기 위해 FACS를 진행하려고 합니다. target cell line 은 mouse cell line 이고  1차 ab는 CXCR4 Polyclonal Antibody host:Rabbit / isotype: IgG  human,mouse,rat  2차 ab는 F(ab')2-Goat anti-Mouse IgG (H+L) Secondary Antibody, PE, eBioscience™    이렇게 사용하면 되나요?   negative ctrl 은 2차 ab만 붙이면 될까요?
회원작성글 민토링  |  09.26
Q. IHC 조직 두께 관련
안녕하세요!   MOUSE brain 을 30~40um 두께로 cryosection 하여 형광 염색을 할 예정입니다.  free floating 기법으로 염색을 할 예정이며 confocal로 사진 찍을 예정인데, 30~40um 두께로 잘라도 confocal에서 초점이 잘 잡히고 사진이 잘 찍히는지 궁금합니다. 
회원작성글 졸려요  |  09.22
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