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BioLab 장재봉 교수
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Q. 6 his tagged fusion protein
fusion protein 관련 cloning에 관한 논문을 받게 되었는데요. 6 his tagged fusion protein이란게 무슨 뜻인지 알수있을까요….????
회원작성글 분자생물학도  |  01.26
Q. colony PCR 첨부파일
TA cloning한 plate에서 30개의 colony를 골라 5개씩 묶어 colony PCR하였습니다. 일단 30개를 mini prep을 위해 culture를 시작하긴 하였는데,  첨부파일 같은 결과를 얻었습니다. 혹시 6개 section 모두 되었다고 봐도 될까요? QPCR inner primer로 PCR했을때는 5,6번에서 vector size 정도의 band가 나오고 있어서 이게 된건가 싶기도 합니다. 고수님들의 의견을 부탁드립니다.  
회원작성글 새슬  |  01.25
Q. PGL3-basic vector에 cloning이 잘안돼요
vector, insert, t4ligase 등 모두 문제 없는 걸로 확인되었는데요, cloning 후 확인을 위해 restriction enzyme으로 잘라보면 insert사이즈의 밴드가 안나와요ㅜㅜ 원스텝으로 진행되는 실험이라는데 몇번을 해도 cloning이 안됩니다. 어떤 부분에서 문제가 생긴걸까요?
회원작성글 닝내임  |  01.25
Q. 조직 마쇄액 상등액에서 cell 추출
안녕하세요 현재 학부4학년으로 어류관련해서 실험하고 있습니다. 흰다리새우 품종을 대상으로 실험중인데 현재 흰다리새우는 cell line이 없지만 병원체에 감염된 cell이 필요합니다. 감염된 조직을 마쇄하여 상등액을 취하면 cell 수득이 가능한지와 가능하다면 cell counting이 가능한가요?
회원작성글 aqwasd  |  01.25
Q. WB(Western Blot) 시 a-tubulin이 일정하지 않게 나오고 피펫팅에 관한 질문
안녕하세요. 실험실 초보 석사 1학기 대학원생입니다.  현재 실험실에서 western blot실험을 할 때 a-tubulin을 housekeeping으로 사용하고 있는데 일정하게 나오지 않고 있습니다.  모든 protocol을 익숙히 하고 실험을 진행하고 있는데도 불과하고 일정하게 나오지 않는데 아무래도 피펫팅이 큰 문제로 되고 있는것 같습니다. 일정하게 나오지 않게 되는 문제초래점 몇가지 제시해 주시길 바랍니다.   Ps. BCA assay로 protein정량을 진행하고 있는데 R^2=0.98~0.99로 나오고 있습니다. 실험을 오래 해오신 선배님들의 조언을 바랍니다~~^^
회원작성글 Lanna  |  01.25
Q. HPLC 컬럼 관련하여 질문드립니다.
현재 올리고당 관련 연구를 맡고 있는 대학원생인데요, 연구 중간에 투입되어 아직 기기에 대해 모르는 부분이 많아 질문드립니다.   Aminex HPX-87H (300 x 7.8 mm) 컬럼을 사용하고 있고 이동상은 0.005M H2SO4, 유속은 0.6mL/min으로 하고 있습니다.    1. 가이드라인북에는 cleaning solvent 1) 5% CH3CN in 0.005M H2SO4 2) 30% CH3CN in 0.005M H2SO4 // Duration 1) 4hr 2) 12hr 3) run mobile phase until steady baseline 이라고 나와있는데, duration에 3번 항목처럼 적혀있는거면 꼭 ACN이 함유된 용매로 cleaning 해줄 필요 없이 이동상(황산)으로만 워싱해줘도 괜찮은건가요? 황산에 ACN이 첨가됨으로써 어떤 차이가 있는건지 궁금합니다.   2. 또한, 다른 자료를 찾아보면 backwashing을 하라는 분도 계셔서 헷갈리는데 정확한 워싱 방법이 무엇인지 궁금합니다.
회원작성글 nounou  |  01.25
Q. cell 오염 종류
   마지막으로 봤을 때에는 오염 없이 잘 자라고 있는 모습을 확인했습니다. 그런데 오늘 보니 갑자기 사진처럼 처음 보는 애들이 생겼습니다. 주변 L929 셀이랑 너무 다르게 생겼고 주변에 세포들이 못자라는거 보자마자 깜짝 놀라서 바로 폐기하고 에탄올로 다 닦아줬습니다. 오염원이 뭔지 대강 감이 잡히긴 하는데 저것들은 무슨 오염인가요ㅠ 현재 passage 10입니다  
회원작성글 젤리빔  |  01.25
Q. PCR 결과 해석 방법에 관한 공부
안녕하세요 회사 인턴생 입니다. 이번에 PCR에 대해 공부하고 있는데 PCR의 기본 원리 작동 방법들은 어느 정도 알았는데 결과 해석 및 그래프 해석하는 방법을 몰라 조언을 구해보려고 합니다. PCR 결과 해석하는 방법이나 그래프 분석하는 방법들을 정리해놓은곳이 있을까요? 일반 PCR , Reverse Transcription PCR , Real Time PCR 들의 결과 해석법 배우는 곳을 알고 싶습니다.
회원작성글 오리5리Oh리  |  01.25
Q. western blot : transfer 질문입니다
안녕하세요?? western blot에 어려움을 겪고 있는 석사생입니다~ 저는 melan A cell protein  30 μg 사용합니다.  SDS gel을 runnning 하고 membrane에 transfer를 하는데요~ transfer하고 난 뒤 폰슈 염색을 하면 (사진처럼) 자꾸만 깨끗하게 transfer 되지가 않아서요ㅠㅠ transfer는 2.5 A 25V에서 30 분정도 실시하구요.  처음 해봤는데 뭐가 문제인지 모르겠습니다. ㅠㅠ
회원작성글 karan  |  01.25
Q. 시약 reconstitution 계산
제가 구매한 파우더 형태 시약 100ug을 stock 농도 4uM으로 stock하기 위해서 DEPC-DW 2.6ml으로 희석하려고 합니다. 근데 시약 coa에 final 농도 0.1% bsa를 넣고 냉동보관을 하라고 적혀있어서 업체에 문의해보니  BSA 는 파우더 형태로 직접 녹이지 말고 10% BSA용액으로 제조 후 분주하라고 하시더라고요. * 10% bsa 제조 : DEPC 10ml + 1g BSA   그리하여 구매한 시약 100ug 을 녹인 DEPC 2.6ml + 10% bsa 26ul  계산이 되는데 이게 제가 맞게 계산을 한 것인가요?   만약에 맞는 계산이라면 26ul를 넣어서 원하는 농도보다 더 낮은 농도로 제조되기 때문에 => 구매한 시약 100ug 을 녹인 DEPC 2.57ml + 10% bsa 25.7ul 이렇게 하면 될까요? 너무 어렵네요ㅜㅜ
회원작성글 oneday  |  01.25
Q. retroviral vector transfection
안녕하세요    293T cell에 GFP retroviral vector transfection 을 cacl2 transfection protocol로 실험하고 있는 학생입니다.    타겟 cell에 infection 전에 transfection 후 293T cell 에서 GFP 발현이 확인 되어야 성공적으로 transfection 됐다고 체크할 수 있는 부분인지 궁금해서 질문 올립니다...   답변 주시면 감사하겠습니다.   새해 복 많이 받으세요!
회원작성글 매맴  |  01.25
Q. 세포배양법에 의한 백신제조에서 궁금한점
안녕하세요 회원님들, 공부중에 궁금한게 있어서 여쭈어 봅니다. 백신제조법중에서 세포배양법에 의한 백신제조가 있는것으로 알고있는데요, 세포를 배양한 후에, 세포에서 바이러스(백신)을 분리 추출 정제 하는가요 ? 아니면, 세포배양액에서 바이러스(백신)을 분히 추출 정제 하는가요 ? 숙주세포 내에서 바이러스를 증식시키는 방법인것으로 알고 있는데, 증식된 바이러스는 세포밖으로 나와서 증식을 하는건지, 아니면 세포내에 존재해서 증식을 하는건지, 잘 모르겠습니다. 많은 바이러스 (또는 단백질 생산 공정에서는 단백질)의 회수 및 정제가 목적이라면, 세포내외를 가리지 않고 세포 lysis + 세포배양액을 모두 회수해서 분리 추출 정제하는게 좋을 것같은데, 세포배양법을 통한 백신 제조법에 대해 자세히 알고 계신다면, 많은 지도 부탁드립니다. 감사합니다.  
회원작성글 만세우리  |  01.25
Q. invasion assay_ transwell insert에서 gelatin coating
안녕하세요 일반 대학원 석사생인데요! invasion assay를 진행하는데 gelatin coating 한 후 matrigel을 넣으면 계속 세서요..ㅠㅠ  원래는 gelatin을 상온에서 30분 incubation 시키면 굳었었는데 어느순간부터 matrigel이 새기 시작합니다... 그래서 gelatin 굳히는 시간을 24시간까지 늘려봤는데 gelatin이 굳긴 하지만 다시해보면 안됩니다.. gelatin을 새로만들어 사용해봐도 동일했습니다! trouble shooting이 안되는 상황이라서 조언 부탁드립니다. 그리고 혹시 gelatin이 coating된 insert를 어디서 살 수 있는지 알려주실 수 있나요??  
회원작성글 뮝  |  01.25
Q. 상수시험
안녕하세요 제가 업무를 하다가 궁금한 점이 생겨서요 상수시험이 따로 있고, 정제수 시험이 따로있는데 정제수시험은 월마다 하고있는데 상수시험은 따로 안하고 있어서요 혹시 상수 시험도 꼭 해야하는건가요? 따로 위탁업체에 의뢰해서 성적서를 가지고 있으면 되나요?
회원작성글 비그리  |  01.25
Q. gRNA vecotr construction 질문드립니다.
gRNA는 제가 원하는 site 부분만 바꿔서 계속 재사용 될수 있다고 알고있는데요. site (20bp) 부분 뒷쪽에 Reverse primer 5` end에 phosphorylation이 붙은 primer를 이용해서 원하는 site (20bp) 앞쪽 프라이머만 바꿔준다라고 이해하고있는데요. 그럼 원하는 site를 바꿔줄때 site 앞에 부분 서열에 원하는 서열을 넣고 phosphorylation 프라이머와 같이pcr돌리고 dpn1 처리만 하면 되는건가요?
회원작성글 분자생물학도  |  01.24
Q. sequencing 질문드립니다
ligation 후 마크로젠에 sequencing 을 맡겨 확인해 볼려고 하는데요. confirm pcr을 돌려 그 부분을 맡겨서 확인하는 거다 라는 것과 그냥 prep후 맡겨서 확인하는거다 라고 각각 선배들께서 알려주셨는데 차이가 있을까요?
회원작성글 분자생물학도  |  01.24
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