[DEBUG-WINDOW 처리영역 보기]
즐겨찾기  |  뉴스레터  |  오늘의 정보 회원가입   로그인
BRIC홈 실험
Cytiva
배너광고안내
이전
다음
스폰서배너광고 안내  배너1 배너2 배너3 배너4
[우당탕탕 석사 적응기] 석사 1학기 - 새로운 환경, 그리고 후회
전체보기 안전점검 LABox
 카테고리: 전체 > Immunology > Immunocytochemistry
Mol. Biol.-DNA Mol. Biol.-RNA Mol. Biol.-Protein Immunology
Cell Biology Microbiology Plant Biology Laboratory Animals
Omics Chemical biology Bioinformatics Laboratory Equipments
Buffer/Reagent Bioethics Etc.
카테고리 전체보기펼치기
질문/투표/프로토콜 등록
Q. Antibody 선정 질문좀 드릴게요
제가 Raw 264.7 macrophage cell line을 염색하고자 합니다. 2가지 target protein에 대해서 염색을 하려고 하는데요, 이 경우 서로 다른 2종의 anti-target protein antibody를 선정해서 서로 다른 파장때의 2차 antibody를 쓰면 되는걸로 알고 있습니다.   제가 궁금한 점은 지금부터인데요. Raw 264.7 은 Mus musculus 종인데요,  쥐속에 속하는 동물종이더라고요. 근데 문헌들을 참고했을 때 대부분  서로다른 protein A, B에 대해 mouse와 rabbit 의 다른 종의 1차 antibody를 골라 실험을 했더라고요. 제가 궁금한점은, Raw264.7 이 쥐에서 유래한 세포인데, 1차 antibody도 host가 mouse 인걸로 사용해도 반응하는건가요?   제가 알기로는 reactivity와 host species는 달라야 한다고 알고 있습니다. Mus musculus와 mouse는 다른 동물종일까요?
회원작성글 시작임님  |  2021.07.28
Q. 면역염색 제발 도와주세요
안녕하세요 면역염색을 처음하는 학생입니다. 면역염색 기본 프로토콜+키트 프로토콜을 따라하고 있는데 전혀 결과가 안나와서 질문드립니다. 먼저 저는 파라핀 블럭의 쥐 귀조직을 이용한 면역염색을 하고 있습니다 Q1.antigen retrival과정에서 저는 10x citrate acid sigma꺼를 1x로 희석해서 사용하고 있습니다. 전자레인지를 이용하는데 기본 프로토콜을 보면 5분정도 미리 끓여놓고 나머지 10분동안 슬라이드를 넣고 끓인 후 30분 실온에서 식히라고 써있습니다. 저희 전자레인지는 w를 조절하는게 없는 일반 전자레인지인데 용액을 넣고 1분 30초를 돌리면 용액이 폭발하듯이 끓어서 넘쳐버려서 거기서 멈추고  슬라이드를 넣고 중간중간 열어 용액을 보충하면서 돌렸는데 완전 폭발하듯이 넘쳐서 3분30초만 돌렸더니  조직이 다 없어져버렸습니다.. 뭐가 문제일까요..? 용액을 돌릴때 뚜껑을 닫아서도 해보고 열어서도 해봤는데 폭발하듯이 용액이 넘치는 건 똑같습니다. 저는 유리 coplin jar를 이용해서 하는데 플라스틱이 아닌게 문제일까요? 기본과정 시간을 조절하려고 하는데 꼭 보글보글 끓는 정도까지 돌려야되나요?? 이 과정이 중요한 역할을 하는 건가요??폭발하듯이 넘치는 과정에서 조직이 떨어진 거 같습니다... Q2.citrate acid 용액이 오기 전에는 0.05% trypsin in pbs를 사용했는데 결과적으로 dab염색이 안되더라고요 그래서 용액을 주문한건데 항원부활과정에서 조직이 사라져 아예 다음 과정을 나아갈 수 없습니다. 0.05% trypsin in pbs는 용액을 jar에 넣고 끓기 전까지만 돌린 후 슬라이드를 넣고 37도의 oven에서 30분간 넣어 둔 뒤 다음 과정을 진행했습니다.   사수도 없고 이 실험실에서 처음하는 거라 누구한테 여쭤볼 사람도 없습니다.. 고수님들 제발 도와주세요ㅜㅜ    
회원작성글 ain  |  2021.07.21
Q. cell staining 시 DAPI+ FITC+phalloidin
한 셀에서 발현하는 두가지 종류의 유전자를 염색하고싶습니다. 다피는 기본으로 보고 비교하려는 유전자 두개를 그린과 레ㅔ드로 보려고하는데 한개는 FITC, 다른 하나는 phalloidin 으로 보려고 합니다 10% 포르말린으로 고정시키고ㅗ 염색 시킨후에 다피마운팅 솔류션으로  마운팅예정입니다. 중간에 염색과정을 좀 알려주시며 ㄴ감사하겠습니다
회원작성글 뿌압뿌양빠앙  |  2021.03.29
Q. 피톤치드 같은 물질이 항바이러스역할도 할까요?
피톤치드가 자연 향균물질이라고 알고 있는데 그러한 자연 향균물질이 코로나바이러스에도 효과가 있을까요? 효과가 있다면 잔연 향균물질 이용해서 코로나바이러스 대항해서 손세정제나 스프레이만들어보려고 해요
회원작성글 생0  |  2021.03.11
Q. LDH assay sample을 얼렸다가 해동하면 안되나요?
안녕하세요. 실험을 하고 있는 학부생입니다. 약 2-3달전 LDH assay를 한 media sample을 얼려두었는데 다시 사용하기 앞서 재측정을 했는데 전과 전혀 다른 결과(각 군과의 수치의 변화가 없음)가 나옵니다. LDH양의 변화는 없을것으로 생각되어 이번 결과에 대한 의구심이 생깁니다. 혹시 저와 같은 경험이 있으시거나 이번 결과에 대한 설명 가능하신분 있으시면 대답해주시면 감사하겠습니다. ㅠㅠ 도와주세요. 감사합니다. 추측1) 첫 측정한 LDH assay의 결과가 잘못된 것이다. 2) 두 번째 측정을 잘못했다. 3) 얼렸다가 해동하여 재측정하면 원래 잘 안나온다. 등등..
회원작성글 오비쿤  |  2021.03.03
Q. IHC 의미 질문
안녕하세요. 이번에 IHC를 진행하려고 하는데 제가 찾아본 봐로는 IHC는 tissue에 적용되는 거고, cultured cell에서는 IF또는 ICC를 해야된다고 합니다. 이부분에서 교수님께서 IHC 준비하라고 하시는 부분은 ICC를 진행한다고 하시는 거겠죠?   준비하는 과정에서 쟤가 antibody를  primary antibody를 cell signaling b-acin(#4967), secondary antibody는 Donkey Anti-Rabbit IgG H&L (HRP) (ab6802) 사용하려고 하는데 substrate는 vector laboratories의 DAB Substrate Kit, Peroxidase (HRP), with Nickel로 사용하려고 하는데 맞는 걸까요? 답변 주시면 감사하겠습니다. 
회원작성글 rovmemi  |  2021.01.26
Q. Phagocytosis assay 관련 질문 입니다
제가 FACS 랑 암을 안해봐서 그런데 tumor cell (in vitro) 키워서 drug 처리 한 다음에 FACS로 phagocytosis 관찰 가능한가요?? PBMC 에서 분리해서 co-culture 해야 되려나요??
회원작성글 안녕하시요  |  2021.01.07
Q. ICC에서 FITC 결과가 안나와요 첨부파일
안녕하세요 3개월차 예비 대학원생입니다.   최근에 ICC를 배워 혼자 진행해보았는데요, DAPI는 잘 나오지만 FITC에서 염색이 잘 안됩니다. 밑에는 진행한 실험의 과정입니다.     <실험과정> 1. 4x6well에 5x10^4 cell  2. overnight 3. PFA로 고정 후 20분 이상 4℃ 4. PBS(tritonX100포함) washing 5. blocking 20분 -blocking buffer : FBS 1%+TritonX100 0.1%+PBS 20ml까지 6. 1차 antibody overnight 7. 2차 antibody 1시간 8. washing 9. DAPI 10. 말리고 현미경   어느 과정에서 잘못된건지 궁금합니다.  사용한 antibody는 abcam의 F4 사용하였습니다.   감사합니다.
회원작성글 신짜오  |  2020.12.08
Q. paraffin block을 이용하여 ihc해도 dendrite가 안보여요ㅠㅠ
안녕하세요 mouse의 cerebellum을 paraffin block으로 만들어서 section 후, ihc을 하려고합니다 조직을 4마이크로의 두께로 section하여 ihc을 해 보았을 때 뉴런의 dendrite가 잘 보이지 않습니다 조직을 너무 얇게 잘라서 dendrite가 다 잘려나간건가 싶어 더 두껍게 잘라보려고하는데 어느정도의 두께가 적당한지 몰라 질문합니다ㅠㅠ frozen block의 경우 40마이크로 정도로 섹션하여 확인하는 것 같은데 파라핀 블럭의 경우 40마이크로로 섹션하면 잘라지면서 파라핀이 다 갈라질 것 같은데 어느정도로 하는게 적당할까요,,? 프로토콜을 확인해보니 5~8정도의 두께로 섹션하라고 되어있긴하던데ㅠㅠ
회원작성글 복돌이뿡뿡  |  2020.12.04
Q. ICC과정중에 fix후 -20도나 -80도에 보관 하시는 분 계시나요?
선배님들 안녕하세요 다름이 아니라 제목대로 ICC 과정중 fix후 다음 step진행전에  -20,-80에 보관이 가능한지 알고싶습니다 ㅎㅎ 감사합니다
회원작성글 Mintsun  |  2020.10.14
Q. 추출물 전처리에 대한 질문이 있습니다.
안녕하세요 항염증논문을 읽고 궁금증이 생긴 대학교3학년 학생입니다. 염증 반응에 대해 논문을 읽었을때 생긴 궁금증입니다. LPS 처리를 하기 전 추출물 전처리를 1h 동안 진행 후 30min LPS 처리를 한 후 모든 실험을 진행을 하는걸 읽었는데 이 부분에서 궁금증이 생겼습니다. LPS 처리를 하고 추출물 처리를 하면 되지 않나? 라는 생각이 들었는데 굳이 추출물 전처리를 한 후 LPS를 처리를 하는 이유가 있는건가요?
회원작성글 EWSN  |  2020.10.10
Q. 사이토카인 관련 질문드립니다
논문을 보다가 제가 이해한게 정확한지 궁금합니다. 외부에서 유해한 자극이 가해지면 세포가 손상되어 염증반응을 유도하기 위해 여러 면역세포에서 사이토카인이라는 단백질 면역조절제가 분비되는데, 사이토카인 중에 인터류킨이 있고, PCR을 통해 IL-6 mRNA 발현량을 관찰했을 때 발현량이 많으면 염증반응이 많이 일어났다는 것인가요? 
회원작성글 ksj32307  |  2020.09.18
Q. 4% PFA가 permeablization에 영향을 주나요?
GPCR 을 염색을 하기 위해 실험 중입니다.  receptor specific binding 형광 표지 물질을 사용하고요  (antibody x)  과정은  세포 배지를 제거하고 PBS Washing한 뒤  4% paraformaldehye를 10분동안 RT에 Incubation하고 형광 물질 처리 후 따로 permeablization과정을 하지 않고 물질처리 후 confocal로 관찰합니다.  그런데, 세포질에 염색이 안되고 핵에 염색 되더라구요 (dapi와 겹침)  그래서 living cell에다가 해봤는데 이번엔 세포질에 잘 염색이 되더라고요  핵 부분에는 뻥 뚤린채로요  4% PFA가 문제였던 것 같은데  아무래도 세포가 좀 쪼그라드는 것 같아서 고정을 해야할 것 같은데  농도를 낮추면 permeablization이 덜 할 까요?  4% PFA가 Permablization에 영향이 그렇게 있는건가요? ㅜ
회원작성글 sidsidsid  |  2020.08.27
Q. FACS 사용관련하여 문의
안녕하세요. FACS 장비 사용관련하여 문의드립니다. 대부분 실험실에 FACS 장비가 있나요? 장비가 없는 실험실은 교내 공실관이나 주변에 있는 연구소, 테크노파크 등에 있는 장비를 활용하고 있다고 들었는데.. 많이들 사용 하시나요? 외부에서 FACS측정할때 주의할 점?  세포 염색 후 최대 몇시간까지 측정이 가능한가요?   답변부탁드립니다.
회원작성글 membrane  |  2020.08.05
Q. NO assay 에서 positive control로 쓰는 dexametahsone의 IC50?
자꾸 NO assay가 해결이 안되서 비슷한 질문을 또 올리게 되네요 ㅠ  문헌에서보니 RAW264.7 cell에서의 Dexamethasone 의 IC 50가 5uM 이하인듯 한데요...  실험 해본 결과 IC50가 1mM 정도 나오는건  문제가 있는거겠죠....?
회원작성글 soi  |  2020.06.15
Q. NO assay 저해제가 작동하지 않아요 ㅠㅠ
bioactive 펩타이드로 NO assay 를 하고 있습니다.  실험조건은  96well에 10만개, RAW264.7, LPS 1ug/mL, 샘플-LPS 동시 처리후 24시간 배양하였고, 사용된 배지는 phenol red 포함한 DMEM입니다. 결과를 말씀드리면,control에 비해  LPS를 넣은 경우 NO 생성이 5-8배 증가하였습니다. 문제는 처리한 펩타이드 (~500ug/mL)의 NO 저해가 전혀 효과가 없었습니다.  Q1. phenol red가   griess시약의 발색과 유사하여 phenol red없는 배지를 써야 한다는 말이 많던데, 생각해 보면  LPS를 처리하지 않은 control에도 phenol red가 들어가기 때문에 굳이 phenol red가 안들어간 배지를 사용해야 할까요? Q2. 문헌에서 10ug/mL에서 항염 효능이 있다고 되어 있는 펩타이드인데도 500ug/mL 에서조차 전혀 저해능이 없었습니다. 뭐가 문제일까요?  LPS에 의해 RAW cell이 activation되어 끄덕도 없는걸까요.. 이 펩타이드를 positive control로 생각하고 진행한건데,, 전혀 효능이 보이지 않아 당황스럽습니다. 혹시 positive control로 사용하는 항염 펩타이드가 있다면 추천 부탁드립니다.    
회원작성글 soi  |  2020.06.01
이전  01 2 03 04 05 06 07 08 09 10  다음
실험 회원 등급이란?
실험Q&A 회원등급안내
위로가기
실험 홈  |  실험FAQ
 |  BRIC소개  |  이용안내  |  이용약관  |  개인정보처리방침  |  이메일무단수집거부
Copyright © BRIC. All rights reserved.  |  문의
트위터 트위터    페이스북 페이스북   유튜브 유튜브    RSS서비스 RSS
진스크립트 광고