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[우당탕탕 석사 적응기] 석사 1학기 - 새로운 환경, 그리고 후회
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Q. 비타민 C 항산화 실험
안녕하세요 고등학교에서 연구 진행하게 되었는데 '돼지 혈액에서의 비타민 C 항산화 작용'이라는 주제에 흥미가 생겨서 찾아보았습니다 근데 돼지 혈액을 구하기가 어려워서요 실험용 말(또는 양)의 피로 대체해도 될까요? 그리고 강아지 고양이용 철분제를 위 혈액에 사용해도 되는지 궁금합니다 ㅜㅜ 근데 찾아볼수록 구하기 힘든 재료들이 있어서 걱정이네요..
회원작성글 밍ㄱ  |  09.14
Q. PCR에서 증폭이 되지 않습니다
안녕하세요. 현재 석사 하고 있는 대학원생입니다.   제가 primer를 새로 디자인하여 PCR을 해봤는데, real time 그래프로도 그렇고 전기영동에서도 전혀 증폭이 되지 않아서 질문 드립니다.   디자인할때 Tm값을 낮게 디자인하긴 했는데, 그렇다기엔 다른 target으로 디자인한 비슷한 Tm의 primer는 증폭이 잘 되었습니다.   간혹 이런 경우가 있을 수 있나요? 찾아보아도 원인이 뭔지 잘 모르겠어서 질문 남깁니다.
회원작성글 미니썬  |  09.14
Q. 시약 농도를 구하고 있습니다 .. 도와주세요...
안녕하세요. 대학원에 막 입학한 석사 과정생입니다. 다름이 아니라 물질 A를 5uM로 처리하기 위해 계산을 했습니다... 그런데 궁금한 것이 실제 실험에서는 20% A를 5uM로 처리하라고 하더군요...  고수님,,...  혹시 20% A를 5uM로 처리하려고 하면 이것을 5분의 1로 희석해서 처리하면 될까요...?  MW은 80이라고 했을 때, 고수님들은 어떻게 계산하여 처리하실까요... 기본이고 정말 부끄럽지만 정확하게 실험하고 싶습니다...  고견 부탁드립니다...   
회원작성글 뿌에에엑  |  09.14
Q. HEK293 coverslip위에서 culture
안녕하세요. 저는 현재 HEK293 cell을 이용해서 confocal 샘플 준비를 design중에 있습니다. 해당 실험에 있어 몇가지 질문사항이 있어서 질문드립니다. 1. Coated or Non-coated HEK cell이 워낙에 잘 떨어지는 친구들이라, 대부분은 coverglass를 Poly-L-Lysine coating하여 사용하시는 것으로 알고 있습니다. 지금 design하는 실험은 antibody를 이용한 immunostaining은 아니고, fluorescent reporter를 transfection하여 단순히 관찰하는 수준입니다. 따라서 1) cover glass위에서 cultrue, 2) transfection 후에, 3) fixation하고 4) slideglass위에 준비하기만 하면 될 것 같습니다. 혹시 이러한 실험에서 반드시 coated coverslip가 필요한지, 만약 일반 coverslip위에 키워서 샘플을 준비하게 되면 어떻게 되는지 여쭤보고 싶습니다. 2. Coating reagent Poly-L-Lysine coating이 standard인 것으로 나와있는데, 찾아보니 Poly-ornithine과 같이 다른 여러가지 polymer를 사용하기도 하더군요. 혹시 이러한 실험에 있어 Poly-D-Lysine 보다 더 좋은 선택지가 있을까요? 2. Technique 마찬가지로 잘 떨어지는 친구들이라 실험 테크닉도 주의해야 할 것 같습니다. 개인적인 생각으로, 마지막 단계인, Glass위에 reagent 뿌리고 coverglass를 덮을 때 cell이 다 떨어질것 같은데.. 혹시 이 단계에서 cell이 떨어지지는 않는지, 혹시 주의할 사항이 있는지 여쭤보고 싶습니다. Imaging고수님들 도와주시면 정말 감사드리겠습니다.. ㅠ 감사합니다.
회원작성글 neuronal p..  |  09.13
Q. 강열잔분시험에서 탄화중에 원료가 부풀어올라요
도가니에 원료넣고 기시법에 따라 황산이나 질산을 넣고 탄화시키는 과정에서  어느순간에 갑자기 거품처럼 부풀어올라서 회화를 해도 회화가 제대로 안됩니다. 황산/질산을 넣고 100도에서 50도씩 올리고 단계마다 20분간 탄화시키면서 약 400도까지 올리고 회화시키는데 어떤 과정이 문제일까요??  
회원작성글 Brleua  |  09.13
Q. 옥수수 바이오 에탄올에서의 효모 사용
제분: 옥수수를 가루 또는 가루 형태로 분쇄  (전분은 당 분자의 긴 사슬로 구성된 탄수화물임) 액화: 혼합물을 만들기 위해 옥수수 가루에 물을 첨가하고 알파 아밀라아제 효소를넣어서 가열(90도)한다. (혼합물을 가열하여 긴 전분 분자를 더 작은 조각으로 부숴줌. 효소 알파-아밀라아제는 전분 분자의 분해를 촉진(또는 가속화)하기 위해 추가됨.) 당화: 옥수수 반죽을 식힌 뒤 글루코 아밀라아제 효소를 넣는다. (전분 분자 조각은 포도당으로 분해됨.) 발효: 효모라고 하는 단세포 미생물이 혼합물에 첨가.  옥수수 반죽은 40~50시간동안 발효시킴. 효모는 포도당에서 에너지를 얻어 결과적으로 에탄올이 생성됨. 증류 및 탈수: 발효 과정의 산물은 10-15% 에탄올이므로  혼합물을 걸러내고 탈수하여 순수한 에탄올을 생성함.   이렇게 실험설계를 해보았는데 발효과정에서 활성과립효모를 사용해 발효를 해도 괜찮을까요?
회원작성글 qwe851  |  09.13
Q. DNA복제를 추적할 때 BrdUTP 대신 BrdU를 쓰는 이유가 무엇인가요?
BrdU는 nucleoside인데 왜 nucleotide형태인 BrdUTP형태로 안쓰고 BrdU를 넣어줘서 세포내에서 BrdUTP가 되게해서 쓰는건가요?  도파민이 BBB를 통과하지 못해 L-도파를 넣어주는 경우와 같은 이유에서인가요? 아니면 tri phosphate이 붙으면서 negative charge에 의한 membrane 투과성 문제일까요..? 너무 궁금합니다 
회원작성글 포차코  |  09.13
Q. 흡광도 1이상
일반적인 분광광도계에서 흡광도가 1이상이 나오면 신뢰도가 떨어진다고 알고 있는데 제가 진행중인 연구 관련 논문을 보니 흡광도가 1이 넘는 경우가 간혹있었습니다 흡광도가 1이 넘어도 되는 경우가 있는건가요? 참고로 혼합물의 흡광도 측정입니다   그리고 흡광도가 1이 넘을 때는 식에 적용했을 때 일반적인 경우처럼 흡광도가 증가할수록 투과율이 감소한다는 결과가 나오지 않는다는게 맞나요?
회원작성글 dpdpdpd  |  09.13
Q. beta-amyloid 실온 보관
안녕하세요,, 전문가님들,,, beta-amyloid 1-42로 MTT 실험을 해야 하는데 만약에 Aβ stock이 냉동보관이 아닌 실온에 오랫동안 보관이 되어있었다면 Aβ의 활성도가 많이 떨어진 상태일까요..? 약 6일 정도 실온에 나와있었던 상태입니다.. 혹시 관련 논문이나 해당 내용에 대해 아시는 분 계시면 답변 부탁 드립니다,,ㅠ
회원작성글 tntn  |  09.13
Q. 전기영동 관련 질문드립니다.
안녕하세요.   Cell에서 천연물의 활성을 확인하기 위하여 웨스턴블롯을 진행하고 있습니다.   실험실의 전기영동 프로토콜대로 실험을 진행하고 있으며 결과는 만족스럽게 얻고 있습니다. 평범하게 실험하던 도중 궁금하던게 떠올라서 질문드립니다.   프로토콜에 따르면 겔을 만들고 샘플을 로딩할때 양쪽 끝에 샘플버퍼(실험실에선 2x laemmli sample buffer 사용함)을 로딩하고, 양쪽 끝에서 두번째에는 마커를 로딩하고 있습니다.   혹시 양쪽 끝에 샘플버퍼를 로딩하는 이유를 질문드려도 괜찮을까요??   감사합니다.   항상 궁금하던 질문이어서 계속 찾아본 결과.. 결국 못찾았습니다.  
회원작성글 생약학  |  09.13
Q. Cloning 관련 질문
안녕하세요. 클로닝 고수님들 지나가다 도와주시면 감사하겠습니다. 아래 1, 2번이 동일한 조건에서 동일한 vector에 다른 종류의 insert를 클로닝한 것인데요 ligation plate에서 self-ligation (40개 정도)과 비교해서 콜로니 개수가 1. 유사하게 형성 (40개 정도) 2. 2배 이상 형성 (100개 정도)   RE 처리해서 밴드 확인한 결과, 오히려 콜로니 개수가 적은 1번에서만 clone을 확인할 수 있었습니다. 많은 콜로니 개수가 많은 clone을 의미하는 것이 아닌지요? 제가 잘 몰라서..자세하게 알려주시면 감사합니다ㅜㅜ 2번 ligation plate에서 콜로니 picking을 다시할지, insert Back-transformation을 다시 해서 다시 클로닝할지..둘 다 해 볼지 모르겠어요
회원작성글 작은제인  |  09.13
Q. overexpression 이후 WB 결과 제가 원하는 protein의 size가 다르게 나옵니다..
Cell에서 Lipofectamine으로 제가 원하는 protein을 overexpression을 한 후에  (Lipofectamine 2000제품 사용하였고 제조회사 protocol로 진행했습니다.) FLAG antibody, target protein antibody로 IB를 진행했습니다.  바라는결과대로 단백질이 expression되어서 FLAG band도 detection되었고 expression한 단백질도 항체 IB를 통해 control에 비해 많이 detection 되었습니다.   (detection은 2nd antibody와 ECL로 film에서 detection하였습니다) 여기서 문제가 있습니다.  band가 더진하게 나오긴했지만, 제가 원하는 단백질의 size는 100kda인데 더 낮은 70kda부근에서 나왔습니다.    glycosylation정도 생각해봣는데 degly form의 사이즈도 88kda 정도 인것 같아서 아닌거 같습니다.    wb결과가 훨씬더 낮은 kDa에서 발견된 이유는 뭘까요??  (항체문제인가 싶어 다른 실험에 사용했는데 문제 없었습니다.)   아시는분 답변 부탁드립니다 ㅠㅠㅠㅠㅠㅠㅠ
회원작성글 오우  |  09.13
Q. 중고 실험장비 매각 문의 및 추천
혹시 중고 실험장비 매각 할 수 있는 곳이나 사이트 추천해주실수 있을까요? 특수한 장비다 보니... 매각이 어렵네요ㅠ 그렇다고 그냥 고철로 버리자니 너무 좋은 장비라 아깝기도 하고요 추천 부탁드립니다.    장비명 : Medi coat -2JX 코팅 시스템 스펙 : https://www.sono-tek.com/product/medicoat-psi/
회원작성글 돼랑3  |  09.13
Q. RT PCR primer product size
안녕하세요. RT PCR을 진행 중인데 product size를 알 수 있는 방법이 뭐가 있을까요?? sequence는 알고있는데 방법을 모르겠어요ㅠㅠ
회원작성글 avocado  |  09.13
Q. 타대학교 교수님께 논문관련 이메일
저는 석사과정을 밟고있는 대학원생입니다 논문을 서치해서 보던중에 저희학교가 아닌 타대학교 논문과 제가하고 있는 실험내용이 비슷하여 실험관련해 궁금한것들이 있는데, 타대학교 교수님께 이메일을 보내 논문에 대해 궁금한것들을 여쭤보면 실례일까요? 저처럼 다른 대학교 교수님께 직접 이메일을 보내여 논문에 관한 궁금한것들을 물어보신분이 계신가요?
회원작성글 dorong00  |  09.13
Q. Transgenic mouse / Tg mouse / 형질전환 마우스 제작 의뢰
안녕하세요. loxP로 Gene of Interest 삽입한 마우스 제작하고자 합니다. Rosa26 promoter - loxP - ... - loxP - Gene of Interest   검색해보니 Cyagen, MACROGEN 이렇게 나오는데 MACROGEN에서 의뢰해 보신 분이 실패한 적 있다는 이야기를 들었습니다. Tg 마우스 제작 의뢰해보신 분들 어느 회사에 의뢰해서 제작해 보셨는지 성공률이나 정확도 등등 의견 나눔 부탁드립니다.   감사합니다!
회원작성글 minkyung  |  09.13
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