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 카테고리: 전체 > Immunology > Antibody
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Q. western blot 분석시 1x Sample buffer에 밴드 발현
웨스턴 블롯 분석 시 제가52 kDa 위치의 밴드 발현을 보고자하고 있습니다.그러나 1x Sample buffer를 넣은 lane(sample 아님) 에서간혹 밴드가 발현이 됩니다.. 혹시 고수님들 의심가는 부분이나 노하우 경험있으면조언 부탁드리겠습니다 ㅠ
회원작성글 구제해주세여  |  2017.02.17
Q. antibody 제작이 궁금한 점이 있습니다.
여러 논문을 보고 바이러스의 Antigenic site의 해당 아미노산 서열을 가지고 Peptide를 합성하고이를 이용하여 Antibody를 제작하여 Cell에 접종된 Virus와 제작된 Antibody를 이용하요 Western blot을 수행하면 예상하는 밴드를 확인 가능한가요.항체에 관한 지식이 없습니다. 어느정도는 인터넷보고 공부를 했는데 많이 모르네요꼭 Epitope site 만을 이용하여 항체를 제작해야 Wester blot 진행시 항체항원 반응이 일어나는지요B Cell Eptitop = Structure Epitope 이 맞는지요 그럼 B cell eptipe을 이용하여 제작한 항체로는 Western blot에서 사용이 불가능 한지요꼭 T cell eptipe만을 이용해야하나요   T cell epitope이 linear eptiope이 맞는지..항체 관련하여 공부하기 좋은 자료나 사이트 책이 있으면 알려주시면 감사하겠습니다.
회원작성글 이G짱  |  2017.02.17
Q. 면역조직화학염색 (IHC) 에서 H2O2 사용하는 이유가 뭔가요?
DAB 발색기질 사용하는 효소항체법으로 했는데 항원부활 시킨 후 H2O2 drop 하는 이유가 뭔가요?찾아보라고 하셨는데 잘 모르겠어서요ㅠㅠ
회원작성글 ㅇ.ㅇ  |  2017.02.14
Q. 항체 클론넘버와 관련해서 질문 드립니다
제가 잡으려는 타겟이 아밀로이드 베타 42 로 4kDa정도로 매우 작은 단백질인데 항체를 여러가지 주문해서 사용해보고 싶어서 찾아보고 있는 중입니다그런데 거의 모든 항체가 epitope가 C-term이라고(아밀로이드 40과 구분하기 위해서인것 같다고 생각합니다) 써있는데 회사별로는 클론넘버가 달라도 사실은 같은 항체일 가능성이 있는건가요??아니면 클론넘버만 다르면 무조건 다른 항체인건가요??4kDa밖에 안되는 상황에서 Cterm 부분을 인지하는데 종류가 그렇게 다양하게 있을 수는 없을것 같다고 생각이 들어서요단일클론항체를 많이 사용안해봐서 헷갈리네요 답변해주시면 감사하겠습니다~~
회원작성글 꼬낫이  |  2017.02.13
Q. HIF 1a IHC
면역염색을 해야하는데요. 파라핀조직입니다.     novus사의 안티바디를 사용해보신분? 조건 맞추기가 너무 힘이들어서요. 어떤 pathology 논문에는 1: 1000이라고 되있어서요. 그 ab를 믿어보자 하고 구입하긴했는데,. 조직에서도 이렇게 많이 희석해서 하는 경우가 있나요? 참고로 이전에는 santa ab사용했는데 1:50에서도 나오지않아 1:20까지도 해보았었습니다.
속상함상승  |  2017.01.26
Q. Western blot developing 문제(조언 좀 부탁드립니다)
안녕하세요. Western blot 초보 실험자입니다.Western blot 실험 시 membrane에 transfer도 잘 되었고(Ponceau S로 확인하였습니다.)1, 2차 항체 붙인 후 developing 하는 데 X-ray film에 현상이 안됩니다(아무것도 안 뜹니다).ECL substrate는 유통기한 지난 지가 너무 오래되어서 이번에 새로 구매하였고,문제가 있다면 항체 문제일 것 같은데 어떻게 확인해 보는 것이 좋을까요?예전에 실험했을 때는 developing이 잘 되었기 때문에 항체 종류나 실험 조건의 경우에는 문제가 없을 것 같은데요.다만 항체 구입한 지가 너무 오래되었고(2013년 구매), 1차 항체는 -4도, 2차 항체는 4도에서 보관하였습니다.(Q1) 이 경우 항체 활성이 사라져서 달라 붙지 않는 문제가 발생하게 되는 걸까요?항체 가격이 만만치 않다보니 구매하기가 망설여지는데... 조언 좀 부탁드리겠습니다.덧붙여, 제가 western blot 초보라 모르는 점이 많습니다.다른 글들 읽어보니 membrane의 경우 developing 후에 세척 > MetOH > blocking 순서로 다시 실험하는 경우가 많은 것 같은데,(Q2)이 때 blocking 후 1차 항체부터 다시 붙여서 실험하면 되는 건가요?(이미 1, 2차 항체를 붙였던 membrane인데 metOH 처리하면 항체를 다시 붙여도 되는건가요?)(Q3)그리고 ECL 처리 후 1-2시간 후에는 ECL만 추가 처리 후 다시 확인해도 괜찮은가요?실험한다고 시간은 계속 가는데 결과가 안나와서 너무 답답하네요.소중한 의견 달아주시면 감사한 마음으로 잘 참고하겠습니다. 도움 부탁드려요.감사합니다.
HW  |  2017.01.19
Q. FACS분석 시 isotype을 IgG2a 대신 IgG2a, kappa 사용해도 될까요?
FACS로 셀 보려고 합니다~isotype 개념잡은지 얼마 안되서 조금 헷갈려서요ㅜㅜIgG1/2a/2b/3 숫자가 다르면 control에서도 다르게 사용해야 하는건 브릭에서 검색해서 배웠습니다. 제 경우에 사용하려는 안티바디의 isotype은 IgG2a 까지만 명시하고 있더라고요.가지고 있는 isotype 중에는 IgG2a, kappa 가 있는데 이걸 isotype으로 사용 가능할까요?? kappa가 sub type이면 괜찮을 것 같은 생각이긴 한데, 확신까진 아니어서 여쭈어요ㅜㅜㅜ답변 미리 감사드려요~~
회원작성글 밍귤  |  2017.01.11
Q. FACS 형광(PE,FITC)
안녕하세요 대학원생입니다.제가 FACS를 찍기 위해 샘플을 준비할때 anti- human IgG FITC Ab를 사용하였었는데요FACS로 분석할 때는 PE로 노출시켜서 결과를 얻었습니다.FITC와 PE의 파장대가 곂치기는 하지만...PE로 분석하였을 때 그 값(geom.mean)을 믿어도 될까요...ㅠㅠ 도와주세요..(전에 분석할때 PE와 FITC의 histogram은 크게 흔들리지 않긴 했었는데요...)감사합니다.
회원작성글 alnlbook  |  2016.12.24
Q. 4시간 8시간 24시간 항체의 발현
안녕하십니까. 학부생이라 기초적인 질문 양해부탁드립니다.항체의 발현을 인비트로 실험으로 4시간 8시간 24시간 때로 확인하였습니다.다양한 면역자극제로 자극시 항체의 발현이 4시간 때의 발현에 비해전반적으로 8시간 때에 조금씩 감소한 후 24시간 때 다시 증가하는 결과를 얻었습니다.항체는 적응면역이기에 발현되기까지 시간이 조금 필요하다는 것은 알지만 굳이 8시간 때에 감소하는 이유를 찾을 수가없어서 질문드립니다.면역 초기에는 내재면역을 위한 유전자의 높은 발현으로 인해항체 발현이 일시적으로 감소한다는....?   얘기도 들었지만 이에대한 자료를 찾아볼수가 없었습니다.혹시나 내재면역이 면역반응 초기에(4~24hr) 항체 발현에 미치는 영향에 대해 자세하게 나와있는 논문을 아시거나, 8시간 때에 발현이 감소하는 이유를 아시는 분은 간단하게라도 설명 부탁드립니다.  
회원작성글 보통이라도되고싶어요  |  2016.12.16
Q. 항체 정제에 관해서요
항체와 생산과정에 대해서 조사하는 중에마지막 대량생산에서요세포를 배양탱크에서 키우면 배양액안에 배지와 생성된 항체가 섞여있을텐데배양액과 항체를 어떤 방법으로 분리시키나요?물론 장비가 분리시켜 주겠지만 분리기? 정제기? 그 장비의 원리나 이름이라도 알려주세요
회원작성글 tkfyd2  |  2016.12.11
Q. 1'Ab reactivity(호환성?)에 대해 질문드립니다.
Stem cell이나 embryo을 보는 것은 아니지만,NG2(CSPG4)를 염색할 일이 있어서안티바디를 주문했는데, 132.38이라고 통상적으로 쓰는 이름의 안티바디를주문했습니다..근데 이게 datasheet에는 rat에만 반응한다더군요;;mouse에도 염색해봤다는 논문도 몇 편있긴 합니다만워낙 ng2를 염색하는 경우가 적은것 같아서요;;암튼 amino acid sequence를 1592-2222번을 잡는다고하는데요..mouse와 rat간 sequence가 저 부분이 얼마나 다른가 세보니까 37개의 amino acid가 다르더군요...호환이 될까요? antibody는 단백질의 3차원 구조에 영향을 받으니까 모르겠네요...
1차  |  2016.12.09
Q. 단클론항체 limiting dilution-culture method
HAT배지로 하이브리도마만을 얻었는데내가 원하는 항체행산세포인지 모르기때문에limiting dilution-culture method을사용해서96WALL에 단 하나의 세포만이 자라도록 한다는데요이때 어느정도를 희석하는건가요?
회원작성글 tkfyd2  |  2016.12.08
Q. 항체 정제하는 방법
하이브리도마를 제작하고 대량배양으로 항체를 생산하는데배양탱크에는 항체와 배양액이 섞여있을텐데항체만 따로 분리하는 방법이 어떤건가요? 
회원작성글 tkfyd2  |  2016.12.08
Q. 하이브리도마 분리 하는 법 질뮨이요
제가 HAT배지를 사용하여 하이브리도마세포를 분리했습니다 이 하이브리도마 세포 중에 제가 원하는 항체를 만드는 세포인제 각 wall에 낳어야 하는데 이때 어떤 방법으로 분류하나요? 분류후에 그 하이브리도마가 원하는 항체생산세포인지 확인 하는법은요?
회원작성글 tkfyd2  |  2016.12.07
Q. hjf
 
회원작성글 이지연구소  |  2016.11.29
Q. secretroy 와 membrane form 유전자의 차이
항체를 클로닝 하고 secretroy 인지 membrane 인지를 확인하기 위해 ORF 제일 뒤쪽 부분을 확인하였습니다. 저의 짧은 생각으로, IgM membrane form 유전자는 IgM secretroy 형태의 유전자를 전부 포함하고 membrane을 위한 시퀀스를 ORF 끝부분에 추가로 가지고 있을거라 생각하였는데 비교를 하여보니 secretroy 와 membrane form의 ORF 뒷 부분이 서로 다름을 알 수 있었습니다. secretroy 와 membrane form의 결정은 ORF의 가장 끝쪽의 유전자에 의해 결정 되는것으로 알고있는데 이 부분에 대해 자세하게 설명된 논문이나 사이트를 알려주실 수 있으면 정말 고맙겠습니다.ㅜㅜ 제가 알고 싶은 부분은 클로닝한 항체가 secretroy 인지 membrane form 인지 확인할 수 있는 방법과 그 둘의 유전적 차이 입니다.
회원작성글 보통이라도되고싶어요  |  2016.11.16
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