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BioLab 박소정 교수
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 카테고리: 전체 > Buffer/Reagent
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Q. luciferase lysis가 잘안되는것같아요 ㅠㅠ도와주세요 ㅠㅠ제발 ㅠㅠ
제가 HEK293, A549,L132,HeLa등 여러가지 cell line들을 luciferase실험을 하는데요 똑같은 버퍼로 라이시스 시켰는데 HEK293은 결과값이 잘나오고 나머지 Cell들은 control이랑 실험군이랑 값의차이가 아예 없습니다.. 교수님도 이유를 모르시겠다고.. 선배도 이문제로 애먹고있고 ㅠㅠ랩전체가 애먹고있어요.. 버퍼 조성을 바꿔봐야 하는건지.. 아니면 프로토콜 자체에 문제가 있는건지 막막합니다. 저희랩 luciferase protocol 1.1x PBS로 2번 wash 2.lysis buffer 만들어서 12well plate 기준 lysis buffer 150ul씩 넣어줌 (DW, 1M tris pH7.5 , DTT, Triton x 100) 3.1hr rocking 4.10ul lysate + 40ul substrate 5.측정   이렇게하는데.. 왜 다른 셀들은 값이 안나올까요..? ㅠㅠ도와주세요 ㅠㅠ제발 고수님들 ㅠㅠㅠ
회원작성글 뭉치쭈꾸  |  02.24
Q. 연구용 타액 대량 구매처 문의
안녕하세요? 연구용으로 대량(약5L)의 침이 필요한데 국내에도 타액(saliva matrix solution)을 판매/공급하는 곳이 있을까요? 아시는 분 계시면, 판매처 정보 공유 좀 부탁드립니다.
회원작성글 풀밭  |  02.23
Q. tyrosinase 효소 반응 온도
sigma사에서 제공되는 효소 정보에는 아래처럼 표시되어 있는데   units/mg solid Tyrosinase Activity Unit Definition: One unit will cause an increase in A280 of 0.001 per minute at pH 6.5 at 25 deg C in a 3 mL reaction mix containing L-tyrosine   그럼 반응할때 온도가 37°C가 아닌 25°C가 맞는거 아닌가요? 논문 등 찾아보면 대부분 37에서 반응해서 여쭤봅니다!
회원작성글 ಠ_ಠ  |  02.22
Q. 1000X
MW  371.39g/mol  1000X로 제조하려구요 100mg/ml   1000X 되게 제조하려면 몇 g을 물 몇 ml에  녹여야 하나요?
회원작성글 blue^^  |  02.22
Q. Kreps-Henseleit 용액을 가열해보신분 계신가요?
레시피는 (mM)NaCl 118, CaCl2 2.5, NaHCO3 25, MgSO4 1.2, KH2PO4 1.2, KCl 4.6, Glucose 11.1 입니다. 워터베스에서 버퍼를 가열 하고 호스를 통해서 특정 위치에 퍼버가 도달했을때 36.5도 정도 되도록 하려 하는데, 버퍼가 45~50도쯤 되었을때 석회인지 하얗게 뭔가 만들어집니다.. 원래 이런건지, 제가 뭔가 잘못한건지 경험이 있으신분들 말씀 듣고싶습니다. 추가로 Co2 5% 조성으로 bubble 하라는 말은 있었으나 하지 않았습니다. 이것때문에 위와같은 현상이 생길 수 있나요?
회원작성글 Alab  |  02.21
Q. Eriochrime cyanine 염색 방법 도와주세요..
안녕하세요 현재 새로운 실험을 세팅중에 있는데 척수손상모델과 말초신경손상 모델에서 Eriochrome cyanine staining을 해서 demyelination을 보려고 합니다. 혹시 관련 실험을 해 보신 경험이 있으신 분께서 도움 주실 수 있으실까요? EC는 어떤제품을 구입해야 하는지, protocol은 어떻게 되는지 아무리 찾아봐도 관련 정보를 찾기 힘드네요ㅠㅠ 도움주시면 정말 감사드리겠습니다..
회원작성글 stcv  |  02.19
Q. buffer volume 계산
완~전 초보적인 질문하나 하겠습니다. Fixation buffer를 만들려고하는데, final이 1x PBS에 4% formaldehyde를 넣고자 합니다. (ex. 1X PBS : 3.84ml / 100% FA : 160ul) 그런데 저희 랩실에서 가지고 있는 FA(formaldehyde)가 39% 짜리인데, 아래와 같은 volume으로 만들면 된다고 하는데, 어떻게 계산해야하는지 알려주시면 감사하겠습니다.   1X PBS = 3.6ml 37% FA = (약?)400ul total vol : 4ml  
회원작성글 I아니  |  02.18
Q. 시약 주문 관련 질문드립니다.
안녕하세요. 저는 학교에서 연구원으로 근무하고 있는 초보 연구원입니다. 제가 전분합성효소인 SBE activity assay를 진행해보려고 프로토콜을 찾아보고 있는데요, 실험을 많이 경험해보지 않고 식물을 다루는 일을 주로 하다보니 시약을 주문하는 일에 어려움을 겪고 있습니다. 예를 들면, 논문에 Glucose-1-P를 사용했다고 나오는데 Sigma에서 Glucose-1-P를 검색하면 Glucose-1-P dipotassium salt hydrate, Glucose-1-P disodium salt hydrate 등 Glucose-1-P 뒤에 여러가지가 붙은 제품들이 검색됩니다. 여러 논문들을 살펴보아도 Glucose-1-P외에는 어떤 정보도 없는데 이런 경우 어떤 제품을 선택해야 할까요? Glucose-1-P 뒤에 붙은게 다름에 따라서 실험에 엄청난 영향을 주게 되는지 잘 모르겠습니다. 제가 곤란을 겪고 있는 것은 Glucose-1-P, AMP 이 두가지 입니다. 혹시 이 부분에 대해서 조언해주실 수 있으시다면 가감없이 조언 부탁드리겠습니다. 감사합니다.
회원작성글 쿠쾅쾅  |  02.15
Q. RNAlater 대체품 뭐가 있을까요?
RNAlater 를 급하게 구하고있는데, thermo 에서 나온거 주로 쓰시나요? 주문해서 빨리 못받게되면 대체품이라도 주문해놔야 되는데 다른제품 쓰시는게 있으시면 추천부탁드려요!
회원작성글 Nos  |  02.15
Q. 시약을 찾고 있습니다
안녕하세요  다름이 아니라 시약을 찾고 있는데 여기에 글을 올려도 될 질문인지 모르겠네요 고체상iodine 분말(갈색 가루)형태이고 staining목적으로 쓰려고 합니다 구글 서칭해서 아래의 시약을 구입하라고 하는데 도저히 이름을 알 수가 없어서 글을 남기게 되었습니다 혹시 시약 이름이나 혹은 만드는 법에 관해 도움을 구할 수 있을지 여쭤봅니다
회원작성글 피리부는고양이  |  02.14
Q. 시약 계산 문제
안녕하세요 예비대학원생이 입학 전 연구실 생활 중 계산 문제에 어려움이 많아 글 남기게 되었습니다. 도움 주시면 감사드리겠습니다.   5마이크로몰 IgG Antibody에 용매를 첨가해 10마이크로g/mol 1.5ml를 만들려고 합니다. 여기서 5마이크로몰 IgG Antibody는 몇 ml가 필요하고 용매는 몇 ml가 필요한지 알려주실 수 있나요?? 자세한 풀이과정까지 알려주시면 감사드리겠습니다..ㅠㅠ   (IgG 분자량은 150000g/mol입니다)
회원작성글 모링가  |  02.10
Q. NaCl 녺이기
토양 속 미세플라스틱 정량을 위한 density separation에 NaCl을 사용하는데 필요한 NaCl의 농도가 1,200g/L라서, 물에 녺여야 하는 양이 엄청 많습니다.    가온상태에서 stiring하면서 용해시켰는데도 이미 포화상태가 되버려서 그런지 잘 안녺는데... 좋은 방법이 있을까요?    해결책 공유 부탁드립니다!!.. 
회원작성글 din_khim  |  02.09
Q. NaCl 건조 후 재사용.
NaCl을 과량으로 물에 녺이다 실패했는데...    NaCl을 건조 후에 다시 사용해도 될까요?(시약의 성질 등이 변하지 않는지...)   그냥 버리기 아까워서요....   
회원작성글 din_khim  |  02.07
Q. ABTS 항산화실험하는데 시약을 만들어놓고 얼마까지 사용가능한가요?
ABTS 항산화실험을 진행하려고 하는데  14.8mM의 ABTS와 5.2mM의 potassium persulfate를 각각 stock으로 만들어놓은 다음 실험 전날 섞으려고 합니다.   1. 각 stock은 만들어놓고 언제까지 사용가능한가요? 2. 두 stock을 섞고 난 후 24시간 후에 실험사용 후 바로 버리는건가요? 아니면 언제까지 사용가능한가요?
회원작성글 히제스  |  02.07
Q. pH조건 하에서 흡착 실험 with 버퍼 solution 첨부파일
안녕하세요. 학부 4학년 캡스톤 실험 진행 도중 의문이 생겨 이렇게 질문 남깁니다.  현재 저희는 커피찌꺼기를 활성화 하여 다공성 흡착제를 만든 후 pH 조건하에서 항생제 흡착을 진행해서 어떤 pH 하에서 최대 흡착 성능을 가지는지를 알아보는 중에 있습니다! 원래는 pH조건을 만들어 주기 위해 손수 NaOH와 HCl 을 통해서 pH를 1부터 9까지 만들어서 실험을 진행했었는데 너무 힘들어서 버퍼 솔루션을 구매해 진행하게 되었습니다.  이번에 처음으로 버퍼 솔루션 pH 1~9까지 구매하여 20시간 흡착 교반을 돌린 후 UV 측정을 해보았는데 UV의 개형이 너무 이상하게 나와서 원인을 찾고자 질문드립니다.... 저희가 생각한 오류 원인은 일단 버퍼 자체가 UV 측정용이 아닌 캘리브레이션 전용 용액을 사용한것이 아닌가 하는 생각을 하게 되었는데 다른 원인이 보이시다면 가감 없이 말씀해주시면 감사하겠습니다. UV 사진 첨부 합니다   
회원작성글 xhosa  |  02.04
Q. 5-(and-6)-carboxy SNARF-1 (Thermo)를 사용해 염색하는데요 도와주세요
한 바이엘당 50 µg , These conjugates can be dis solved in userspec i fied intracellular injection buffers at 10 mM (=100 mg/mL for a 10,000 MW dextran) for microinjection into cells. Optimal loading conditions for each cell type and ex per i ment should be determined by the researcher. The literature cites a wide range of loading conditions, from 1 to 20 µM SNARF AM acetate incubat ed with cells for from 10 to 60 min utes. DMSO stock so lu tions are typically diluted at least 1:1000 into load ing buffer to reduce the exposure of cells to DMSO, and the loading buffer should be se rum-free because serum often con tains es terase ac tiv i ty.  이렇게 되어있는데 DMSO 1ml에 녹인 후 pbs로 희석, incom으로 농도 맞춰 셀에 주고있느데 염색이 너무 지저분하게 됩니다. 부분부분 진한 빨간점들이 보여서 데이터로 쓸수없어요ㅠㅠ 희석이 잘못된걸까요 10uM로 계산식 부탁드려요ㅠㅠ
회원작성글 뿌압뿌양빠앙  |  02.04
Q. DMSO나 HPMC에 의해 시약이 굳을 수 있나요?
아래에 떡진 약물 sonication에 관한 질문을 올렸습니다만, 정확히는 Efavirenz라고 하는 Antiretroviral drug입니다. 이전에는 DW에 HPMC 0.5%, 0.01% Polysorbate 80만 섞어서 사용했는데 용해도를 높이고자 이번엔 10% DMSO가 되게끔 DMSO를 추가해서 사용했습니다. 근데 상온임에도 불구하고 점점 굳더니 슬러지처럼 되었습니다.   결국 약물은 다시 주문했고 DMSO 없이 사용해야할 것 같은데... 이런 경우가 있나요...? 비슷한 종류의 약물인 Nevirapine과 Rilpivirine이라는 약물도 같이 실험에 쓰는데 얘네들은 전혀 그런 현상이 없습니다...ㅠ..ㅠ....  
회원작성글 토라  |  02.03
Q. 볼텍싱 시간
시약을 saline에 녹이는데 안녹길래 voltex에 좀 테이프로 붙여두고 좀 오래 냅뒀습니다(한 20분) 근데 확인해보니까 엄청 뿌옇게 되어있드라고요.   혹시 볼텍싱 시간이 길면 시약에 문제를 일으킬 수 있나요?    
회원작성글 DRG  |  02.03
Q. 떡진 약물에 Sonication을 가해도 되나요?
쥐에게 먹일 약물을 만들었는데 구강투약이나 복강투약으로 주로 먹입니다만 사람>마우스 간 drug conversion 식같은게 있어서 뭔..사람먹는 농도보다 실질적으로 12.3을 곱해서 먹이다보니까 고작 2~30g짜리에 애들에게 먹이는 양이 생각보다 많습니다. 보통같으면 0.1~0.5mg 수준으로 한마리에게 먹이는데 이번에 먹이는 약은 사람에게도 무려 600mg을 하루에 한번씩 먹어재끼는 약물이다보니까 한마리에게 환산하면 2.4mg을 먹여야합니다. ㅡ.ㅡ;;  이게 다른 약물은 그래도 가루가 잘 가라 앉아서 주사기에도 잘 들어가서 문제가 없는데 얘는 양이 많아서 그런지 녹여도 떡이 집니다... 냉장보관하면 슬러지처럼 되버려서 복강투약이 불가능하더라구요... 이 떡진것때문에 소니케이터로 좀 깨주고 먹일까싶은데.. 그렇게 해도 될까요??....  
회원작성글 토라  |  02.03
Q. 엑소좀 isolation 할때 배지
엑소좀을 isolation 할때 FBS와 AA가 안들어간 basal media만 있는 배지로 배양한 세포를 회수하여 엑소좀을 추출하잖아요? 부유세포는 그냥 파이펫에이드로 회수하여도 상관없습니다만, 그럼 만약에 adhesive 한 세포의 경우에 회수를 어떻게 하나요?   계대배양 할때는 기존 배지를 전부 석션하여 버리고, tE를 2~3ml 쳐주어 떼어내는 것으로 알고있는데요. 혹시 엑소좀 isolation 할때도 1)배지 석션 후 2)tE 처리하고 3) contrifugation하여 상층액 전부 빨아내고 4) basal media 넣어서 파이펫팅 해준뒤에 5) 다시 순차적으로 contrifugation 해서 엑소좀 추출하나요? 만약 그렇다면 2),3) tE 처리한거 contrifugation 하는 과정에서 상층액에 엑소좀 많이 섞여있을텐데 이걸 버리나여?? ㅠㅠ   자세히 좀 알려주심 감사드리겠습니다 ㅠㅠ
회원작성글 세이비어  |  02.02
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