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[우당탕탕 석사 적응기] 석사 1학기 - 새로운 환경, 그리고 후회
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 카테고리: 전체 > Laboratory Animals > Blood
Mol. Biol.-DNA Mol. Biol.-RNA Mol. Biol.-Protein Immunology
Cell Biology Microbiology Plant Biology Laboratory Animals
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Q. rat 혈액을 가지고 실험을 하려 합니다.
혈중 알코올 농도 측정을 해야 하는데 blood collect tube를 어떤 종류로 사용해야 하나요?
회원작성글 한마리흑곰  |  2010.02.17
Q. 혈소판 응집 측정(platelet-rich plasma에 대해)
실험실에서 이제 혈소판 응집 측정을 rat의 blood를 가지고 하려는데요처음 platelet rich plasma를 얻기 위해원심분리한 다음 상층액을 걷어낼 때위의 혈장만 걷어내는 것인지 혈장과 혈구 사이의buffy coat층도 같이 걷어내야 하는 것인지 궁금합니다.알려주세요^^
올레!  |  2010.02.15
Q. Ficoll로 혈액분리시 혈액과 PBS섞는 이유
Ficoll을 이용해서 PBMC분리를 하는데혈액과 PBS를 1대1정도 비율로 섞은 후 Ficoll위에 올린 다음 원심분리합니다.혈액을 PBS에 섞는 이유는 뭔지요??그냥 혈액을 바로 사용하면 안되나요??
김현정  |  2010.02.09
Q. CD3 코팅하는 이유
지금 NK cell을 키우는데PBMC 분리 후 CD3 coated flask에서 한시간 배양 후 NK cell을 활성시키는 Ab를 처리하고 있습니다초기 1시간 배양은 T cell을 자극시키기 위함이라는데왜 flask에 코팅해서 쓰는지 이유를 알고싶습니다코팅하지않고 그냥 soluble 상태로 넣어도 T cell이 자극되지 않나요 ?
궁금  |  2010.01.23
Q. DNA가 녹지 않는이유?
DNA 를 blood에서 뽑는데 이번에 kit가 바뀌어서 헤매고 있습니다. 마지막까지 과정은  다 가는데 마지막 hydration시에 DNA pellet이 녹지 가 않아요 water base 65도에 1시간정도면 왠만한건 다 녹는데 이번엔 뭐가 문제인지 안녹아서 고민입니다. 안녹는 이유가 뭔지 아시는 데로 알려주시면 따라 해보겠습니다. 그럼 감사합니다. 참고로 어떠분은 너무 over dry 혹은 dry가 짧아서 그러다고 하는데 보통 air dry를 하는 기준이 뭔가요??
왕초보  |  2010.01.21
Q. 혈액에서 B cell 추출
whole blood 에서 B cell을 뽑아서 써야하는데업체아시는분 계신가요??업체에 의뢰하면 뽑아준다고 하던데어딘지 아무리 찾아봐도 모르겠어서요..부탁드립니다
궁금한이  |  2010.01.19
Q. 5% chelex resin으로 DNA 추출에 대한 질문입니다.
connexin 26(GJB2) 유전자 실험을 하는데주로 신생아의 발꿈치에서 채취한 혈지로 샘플이 오고 있습니다.5% Chelex resin으로 DNA를 추출하여 실험을 하고 있습니다.추출 순서 로는 1.5ml tube에 혈지 spot 1개를 넣고 5% chelex resin  300ul를 분주하고 voltex 10초간합니다.70도 에서 8분 heating하고 voltex 10초 100도에서 4분을 끓이고  voltex 10초 후 한 후 13000rpm 3분간 원심분리 한 후  상층액을 따서 다른 tube에 보관을 합니다.아래 사진은 pcr 한 후 결과 사진이며 각 각 라벨링 된것은 primer를 여러가지 디자인하여실험한 결과입니다. 물론 동일한 유전자를 타겟으로 디자인한 primer(실험의 실패 원인이PRIMER 때문이라 생각되어 계속 새로 디자인 했던 것이며 PCR이 아래 그림과 같이 E1-3F+GJB2R 과 같이 PCR 됐다가 점점 흐려지더니 E1-3F+E2-NR 처럼 PCR이 실패가 됩니다이런 문제가 반복하여 새로 다시 디자인하여 앞에 서술한것과 같이 처음에는 PCR밴드가 진하게 형성되었다가 다시 흐려지는 것을 반복하여 아래와같이 같은 유전자를 대상으로 PRIMER를 반복하였습니다. DNA문제가 아닌 PRIMER문제로 생각하게 된 동기로는 PCR이 실패했던 DNA(냉장보관된  DNA)를 새로 디자인한 PRIMER로 PCR 했을 때는 아래 그림에서 보듯이 PCR밴드가 아주 진하게 형성된것 과 같이 실험에 성공 했다가 점점 흐려지는 것이 반복되었습니다.)들 입니다.성공했던 PRIMER를 다시 합성하면 처음처럼 PCR이 성공할 줄 알았는데 E1-3F+E2-NR처럼 다시는 PCR에 성공되지 않더군요. 그래서 실험 실패를 DNA추출에 두고 싶은데 고수님들은 어떻해 생각하시는지 꼭 DNA추출에 문제점만을 생각 마시고 여러가지 측면으로 생각해주십시오참고로 dna 추출에 의문을 갖고 55도에서 30분 100도에서 8분 끓여 봤는데 이전 방법과 차이점이 없었고 proteinase K를 첨가 후에  55도에서 30분 100도에서 8분 끓여8분 끓여 봤는데 결과가 마찬가지가 되어 여기에 고수님의 조언을 얻고자 합니다. 부탁드립니다.그림에서 숫자 1,2,3은 혈지에서 5%chelex resin으로 dna를 추출한 샘플이고 D라고 표기한것은control로 삼아서 쓸려고 EDTA WHOLE BLOOD 를 샘플로 quiagen에서 나온 blood kit를 사용하여 추출한 dna입니다.
윤순헌  |  2010.01.14
Q. In vitro ADCC assay
In vitro ADCC (Antibody-dependent cellular cytotoxicity) assay를 하려고 합니다.혹시 effector cells 로 사용되는 PBMCs 내 포함 된 NK cell를 따로 activaiton 시켜야 하나요? (In vivo mimic 개념으로)Blood에서 ficoll로 prep한 PBMCs를 바로 assay에 사용합니다.답변 부탁 드립니다. (62fdc@hanmail.net)
회원작성글 yiy  |  2010.01.14
Q. staining buffer 제조
안녕하세요mouse blood를 뽑아서 FACS 돌려보려고하는데요 그 과정에서 논문에 나와있는 staining buffer 제조에 관해서 질문드려요 실험한지 얼마 안되서 기본적인것도 잘 모릅니다 ..ㅠ 우선 논문에staining buffer (PBS, 1%BSA, 100U/ml DNase I, 1mM MgCl2) 이렇게 나와있는데  표시된 농도를 어떻게 만들어서 제조하는지 도저히 모르겠네요 ㅠ_ㅠ총 100ml로 만들려면 어떻게 만들어야되나요 답변 부탁해요 -
왕왕초보  |  2009.12.30
Q. Mouse PBMCs 구매 관련
많은 양의 mouse PBMCs 가 필요하여 구매를 하려고 합니다.혹시 구매 가능한 업체나 동물 (mouse) 혈액 은행을 알고 계신 분은 댓글이나 메일 부탁 드립니다.62fdc@hanmail.net감사합니다.
회원작성글 yiy  |  2009.12.29
Q. SRBC 구입해 보신 분 있나요?
 마우스 immunization 용으로 sheep red blood cell을 구하고 싶은데,sheep whole blood로 파는 곳만 한 군데 찾았어요.혹 구입해보신 분 있나요??
회원작성글 murumpyo  |  2009.12.24
Q. mouse에서 neutrophil을 뽑으려 합니다
논문을 보다 보니 mouse에서 neutrophil을 뽑아야 할 일이 생겼습니다.human에서 많이 뽑아 쓰기는 하지만 TG mouse가 실험실에 있어서 이 gene의 역할을 neutrophil에서 확인해 보려고 하는데요..여러 논문을 찾아봤는데... 쉽지가 않으네요...peripheral blood에서 뽑으려고 하는데요..60,000 g 에서 원심분리하라는 논문도 있던데...제가 있는 곳에서는 60,000 G를 돌릴수 있는 원심분리기가 없네요..혹시 다른 간단한 방법을 알고 계신분 없나요??
neutrophil  |  2009.12.14
Q. RBC, WBC, Platelet 측정방법이요~~~
Whole blood에서 RBC, WBC, Platelet 측정하는데는 많은데..Plasma 에서 RBC, WBC, Platelet를 측정하는 방법이나 측정을 해주는 기관을 혹시 아시는지..Plasma에서 RBC, WBC, Platelet 이 안나오는것이 정상이긴 하지만 정도관리의 연구목적으로알아보고자 합니다..찾아보고는 있는데.. 찾는게 쉽지 않네요... ㅠㅠ
연구원  |  2009.12.04
Q. PMN isolation 후 ROS 측정
PMN isolation 후 DCFDA를 이용하여 ROS를 측정하려 합니다.저는 PMN isolation을 하지 않고 flow cytometry를 이용하여 gating을 했었는데, 혹시 dextran sedimentation후 ficoll 1077/1119로 분리한 후 측정하시는 분 계시면 차이점을 알려주세요.또 dextran sedimentation하지 않고 ficoll 1119/1077로만 분리한 후 DCFDA처리를 하면 어떤 차이가 생길까요.
DCF  |  2009.12.01
Q. casein, gelatin, blood agar plate 제조법
혈전용해 실험하는 학생인데요 fibrin plate 의 결과와 casein, gelatin, blood agar plate의 결과를 비교하려고 하는데 casein, gelatin, blood agar plate 제조법을 몰라서요~ ㅜㅜ아시는 분들 도와주세요~   
박재현  |  2009.11.29
Q. sheep blood 구입
Brucella agar배지를 만들기 위해 Sheep blood(면양혈액)을 찾고 있습니다.근데 배지 제조용으로 Desfibrinated sheep blood(탈섬유 면양 혈액)만 판매하고 있더군요..섬유가 제거되지 않은 그냥 양 혈액을 구하고 싶은데.... 수입업체에서도 외국에서 탈섬유 상태로 직수입 되는 것이라 섬유소가 제거되지 않은 양혈액을 구하려면 양떼목장을 가야 할거라고 하더군요 ㅠㅜ혹시 실험용으로 그냥 양 혈액 사용하신 분 있으신가요? 계시면 어디서 구매하셨는지 답변 좀 부탁드릴게요~~너무 구하기 힘드네요...;;
에메로드  |  2009.11.27
Q. mouse 에서 ros 측정해 보신 고수님들께~ 질문있습니다.
저희 랩에서 mouse Blood에서 ros를 측정해보려고 세팅중인데요.. 대략 WT mouse에서 ros 값이 얼마나 나오는지 알고 싶습니다..(몇 mmol/l H2O2 정도 나올까용..? )아니면 이런 실험을 한 논문들을 알려주시면 감사하겠습니당~ 고수님들의 답변 기다릴게용~ ^^
회원작성글 힘낼까?  |  2009.11.27
Q. sheep blood agar plate 에 관하여 문의 드립니다
S.pneumoniae 를 키울려고 blood agar plate에 깔아 배야하였는데 안 자라네요..그래서 묻는건데 STX  sheep plate와Tryptic soy agar with 5% sheep blood  plate와 틀리는지궁금합니다그리고 아래 plate 배지 조성이 궁금합니다..
지니  |  2009.11.24
Q. 균주 분양받아 첫 배양할때..
이번에 ATCC 에서 S.pneumoniae를 구입하여첫배양하였는데.. Broth에서는 자라 거든요.. 그럼데 blood agarplate에서는 자라지가 않네요Broth에서 자란걸 깔아도 자라지가 않는데혹시 pneumoniae에 대해 잘 아시는분 왜그런지 아시나요 그리고 어떻게 해야할까요???
지니  |  2009.11.24
Q. 면양적혈구
면역학을 보면 면양적혈구(sheep red blood cells)에 대해 나옵니다.이 적혈구의 특징이 뭐길래...그리고 왜 면양적혈구를 이용하는지 궁급합니다..답변부탁드려요~~~^^*
궁금이  |  2009.10.28
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