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 카테고리: 전체 > Cell Biology > Cell lysis/Apoptosis
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Q. 웨스턴 수치 계산 첨부파일
안녕하세요. 웨스턴 실험을 하고 있는 대학원생입니다. Hs68 cell에 UV를 조사하여 샘플효과를 보고 있습니다. 측정항목 중 MAP 카이네이스의 경우 밴드가 두줄로 나타나는데.. 이 발현양을 계산할 때 측정범위를 어떻게 잡아줘야하는지 궁금합니다. 예를 들면 첨부한 사진의 1번은 밴드 두줄을 한꺼번에 잡아줬고, 사진의 2번은 밴드 두줄을 따로따로 잡아 측정한겁니다. (따로 잡아서 더하는 방법..) 이런 경우는 어떻게 범위를 잡는것이 맞는지 알려주세요... ㅜㅜ
회원작성글 웨스턴아  |  2017.02.06
Q. apoptosis 질문
lung cancer cell에서 약물 처리후 Annexin V/PI double staining시 다음과 같이 나옵니다.농도가 올라갈수록 PI positive cell이 증가하는 현상이 보입니다.같은 시간대에서 농도만 올리고 찍은 data입니다.이런 농도와 시간대에서 caspase가 activation되는것이 Western blot상으로 확인이 되는데necrosis인지 apopotosis인지, 판단을 내리기가 어렵습니다.사소한 의견이라도 답변 부탁드립니다
회원작성글 EllRis  |  2017.01.31
Q. annexin v 분석시 첨부파일
annexin v를 이용해서 실험을 하고 있는데 아무것도 처리 하지 않은 control에서 viability cell이 90%이상 나오지 않고 easly apoptosis ,late apoptosis, necrosis 쪽에서 퍼센트가 높게 나오는데 실험 과정상의 cell이 demage를 받아서 그런 건지 아니면 원래 cell 상태가 문제인 건이 알수가 없습니다... 실험 과정상 문제라면 adherent cell이어서 Trypsin 처리를 해서 cell을 떼 내는데 그때 cell에 damage를 받아서 그런건지? 뭔가 문제인건지 조언 부탁 드립니다.
꼬맹이  |  2017.01.13
Q. caspase-glo 3/7 control
Caspase-glo 3/7 (Promega)제품 사용하고있습니다.근데 positive control에서 고농도는 control보다 그나마 높게 올라가는데저농도는 control보다 낮게 나와서control이 1이라고 본다면P.C 저농도는 0.XXX 값으로 나타납니다ㅜㅜcontrol의 값을 낮추는 방법이 있을까요?
세포실험자  |  2017.01.09
Q. 과산화수소를 세포에 처리를 하면요 죽는이유요~
세포에 과산화수소를 처리를 하고 MTT로 cell viability가 감소하는것은 실험을 통해 알수 있었습니다.그런데!!! 이게 왜죽는건가요?단순히 산화 스트레스가 일어나건 저도 알고 있는데요정확한 기전을 알고 싶습니다.과산화 수소와 세포가 만나면 어떤 작용 기전에 의해 결국 apoptosis가 일어나는지 꼭 알고싶습니다
회원작성글 kh4646  |  2017.01.02
Q. cytosol의 칼슘을 측정하려 합니다.
cytosol의 칼슘을 측정할려고 하는데요.그래서 membrane을 분해해서 cytosol을 노출시키려고 하는데dounce homogenizer를 사용하라는 프로토콜이 있네요.근데 이게 없어서 다른 방법을 찾고 있는데 잘 못 찾겠네요.저희 실험실에 ultra-sonicator가 있는데 sonicator시간에 따라서 membrane만 파쇄할 수 있다는데이 시간도 검색해봐도 안나오고....혹시 아시는 분이나 관련 사이트 아시는분은 알려주시면 감사하겠습니다.
회원작성글 연금술샤  |  2016.12.14
Q. IHC용 조직을 냉동보관 하게 되면....
PFA로 고정을 시킨 후에 SUCROSE를 처리한 용액에 담궈서 냉장고에 넣어야 하는데 -80도 냉동실에 넣어버렸습니다... 이런 경우 실험진행이 안될까요..?SUCROSE처리 한 후에 -4도에서 보관을 4주정도 했구요. 다른 실험실로 옮기는 과정에서 -80도로 옮겨버렸습니다.....지금 다 얼어버린 상태입니다...제가 HNE Staining과 tunnel assay를 진행할건데,,.. 이런 경우에 조직을 다시 녹이면 조직이 깨질까요..?아니면 이러한 경우에도 최소한의 어떠한 방법으로 실험을 할 수 있는지 실험선배님들의 조언 부탁드리겠습니다ㅠㅠㅠ
회원작성글 jaskfasdfk..  |  2016.12.07
Q. 안녕하세요 생물학 초보입니다 ㅜㅠ 실험실에서 h2o2를 이용하여 cell viability를 낮추고있습니다
실험실에서 h2o2를 이용하여 cell viability를 낮추고있습니다h2o2를 이용하면 cell viability가 낮아지는건 mtt 결과를 통해서 아는데요 ㅜㅠcell이 죽는 이유도 cell에 h2o2를 처리를 하면 apoptosis가 일어나서 난다고 하는데요...그 반응기전? 그러니까 cell에 h2o2를 처리하면 어떤 이유에 있어서 정확한 기전이 정말 궁금합니다 ㅜㅠ제발 알려주세요~ㅜㅠ
회원작성글 kh4646  |  2016.11.21
Q. Calcein-AM
Calcein-AM을 이용해서 cell lysis assay를 하려고 하는데요K562cell을 Calcein-AM과 30분 incubation 한 후 3번 wash 하고K562 cell을 RPMI+FBS medium에 4시간 키운 후 한쪽 tube는 cell sonication을 하고 다른 tube는 cell sonication을 안 한 다음 centrifuge를 돌려서 supernatant를 가지고 signal을 측정했는데요 cell sonication을 안한 supernatant에서도 상당히 높은 signal이 나옵니다. 원래 이런가요?
회원작성글 40맨  |  2016.11.09
Q. phospho caspase-3 항체 사용해 보신분 있으신가요?
phospho caspase-3 항체 사용해 보신 분 있으신가요? 논문도 없고 리뷰도 없어서 어떤회사 항체를 구입할지 고민이 됩니다. 혹시 사용해 보신분 있으신가요???
회원작성글 힣하하..  |  2016.11.01
Q. autophagy 질문요
autophagy를 보고 있는데요 보통 오토파지일경우 atg5, atg3, atg7 이런 인자들이 증가한다고 들었습니다. 근데 제 실험결과로는 LC3-2는 증가하는데 atg7,5는 감소하고 beclin1도 오히려 감소합니다 이런경우는 오토파지 flux가 다 끝나서 degradation됬다면 atg7이런게 감소하게 되는건가요?
ym227  |  2016.10.26
Q. 흡광도 표시 질문이요
cell growth를 보여주는 그래프 왼쪽축에△A450이라고 적혀있는데 이게 무슨뜻인가요?cell viability 실험 방법엔 흡광도 490nm에서 찍고 reference wave length는 630nm라고 되어있고450nm에서 찍었다는 설명이 없어서 헷갈리네요..다른 assay를 한것인지.. 저 delta A의 의미가 뭔지 알려주세요 
ㄴㄴㄷ  |  2016.10.25
Q. 전자현미경 논문 사진 ap, ac 의미 질문요 첨부파일
ac, ap의 의미가 뭔가요?
ym227  |  2016.10.24
Q. FACS 그래프 보는 방법
세포의 marker를 알아보기 위해 형광표지한 antibody를 부착시키는 실험을 한 것인데요.위 사진에서 그래프의 가로 축과 세로축이 무엇을 뜻하는 건지 알고 싶습니다. 인터넷을 엄청 검색해봤는데 하나도 나오질 않네요...FSC-A/SSC-A/FITC-A라 쓰여있습니다.그리고 Q1, Q2, Q3, Q4와 P1이 각각 무엇을 뜻하는 건지도 궁금합니다.그럼 잘 부탁드립니다~
ykk417  |  2016.10.17
Q. Live/Dead assay시 형광현미경 이용 방법 아시는 분 도움 부탁드립니다~
LABox #Fluorescence
안녕하세요, 세포 실험에 쩔쩔매는 석사과정입니다. 제가 3차원으로 세포를 형성하고 증식에 따른 apoptosis를 보기 위해서 live/dead assay 실험을 했는데요,  형광현미경으로 보니 초록색은 잘 보이는데 빨간색은 빨간색 강도(?)를 높이거나 줄이거나 따라서 밝기가 다르더라구요..  그러고 나서 merge를 하도라도 강도를 높이면 죽은 세포가 많이 나타나고 강도를 줄이면 죽은 세포가 없어요 ㅠㅠ 그 빨간 강도를 제 마음대로 임의적으로 정해서 해도 되는건지.. 그런데 이럴경우, 첫날은 죽은 세포가 없는 것이 좋다고 생각해서 빨간 강도(?)를 낮춰서 이미지를 봤는데 마지막날까지(세포가 죽어야 하는 때) 그 강도가 낮아서 죽은 세포가 안 나타나면 어떻게 하죠 ;;; 이렇게 하는게 정상적인건가요 ㅠㅠ 이럴경우 실험 하는 사람의 주관이 너무 반영되는게 아닌가 싶어서요.. p.s) confocal 은 아니고 그냥 형광현미경입니다. 교수님은 펠렛 내부에 죽은셀을 보기 위해서 잘라 보라고 하시는데... 이게 필요한 걸까요?? 저희 실험실에서 할수 있는지 몰라요 ㅠㅠ   
회원작성글 yk  |  2016.09.24
Q. lysosome inhibitor autophagy에서 꼭필요한가요?
autophagy에서 lysosome inhibitor를 왜처리하는거죠??
유니  |  2016.08.26
Q. 세포질 내에 있는 수용체를 분리할수있는 방법이 있나요?
세포질 내에 있는 수용체를 분리하고싶은데column 을 사용하지 않는 방법이있을까요?완전순수하게 분리하자고 하는 것은 아니고 여기 수용체가 있다 정도만 되어도 될텐데..해보신적 있거나 프로토콜 가지고 계신분들 답변부탁드려요ㅜㅜ 감사합니다 
회원작성글 초초초리  |  2016.08.19
Q. DAPI로 cell staining 한 결과가 이상합니다...ㅠㅠ여러분들 도와주세요
제가 진행한 실험은 다음과 같습니다.1. SK-BR-3 cell에 fluorouracil 을 24시간 처리2. drug를 제거하고 Cell을 4% 파라포름알데히드로 20분간 fixation을 하고 PBST buffer로 10분간 permeabilization3. 300nM DAPI staining solution을 5분간 처리후 PBS로 워싱4.cell apoptosis를 확인하기 위해 DAPI 처리된 cell을 형광현미경으로 관찰제가 드리고 싶은 질문은 아래와 같습니다1. drug를 처리하지 않은 SK-BR-3 cell은 핵이 염색이 잘 되었다고 생각하여 fluorouracil을 24시간 처리 한 후에 DAPI로 staining 하여 형광현미경으로 보니 더 강한 형광을 띨 것이라는 예상과는 다르게 사진과 같이 분해된 흔적들이 보이고 이미지가 더 흐려지며 형광이 거의 염색이 되지않은 상태가 관찰이 되었습니다.이론상으로는 DAPI는 죽은 셀에 더 강한 형광을 나타내는 것으로 알고 있는데 이렇게 이미지가 나타나는 이유는 뭘까요?ㅠㅜ 제가 어떤 부분을 잘못 알고 있는 걸까요?2. SK-BR-3 cell with DAPI staining 사진의 오른쪽 부분과 같이 핵이 왼쪽부분의 사진과는 다르게 많이 퍼져 보이는 것이 관찰되고 있습니다. 이것은 뭐가 염색된 걸까요??이것도 핵인가요? 이사진은 background를 어둡게 잡으니  문제의 부분들이 안보여서 밝게 잡은 것입니다
회원작성글 rhm1621  |  2016.08.18
Q. cell fractionation에서 cytosol receptor는 어디에 있나요?
이 그림을 보고 cell fractionation을 하려구 하는데요 세포질 내에 있는 estrogen receptor를 분리하고 싶습니다. 이대로 한다면 estrogen receptor는 어디에 들어있는건가요? 그리고 세포를 lysis 할 때 protein isolaion을 할때 쓰는 lysis buffer를 사용해도 괜찮은가요? 그리고 더 자세하거나 친절한 protocol이 있다면 알려주시면 감사하겠습니다. 
회원작성글 초초초리  |  2016.08.17
Q. 논문에서 TUNEL DAPI결과 그림이 이상합니다.
위의 그림은 PS라는 pytochemical이 ovarian cancer cell의 growth를 억제한다는 것을 보기 위한 실험인데 SKOV3는 ovarian cancer cell line이고 SKOV3/vertor은 SKOV3 cell에 empty vector을 넣은 것이고  SKOV3.IkBaM는 SKOV3 cell에 IkBaM을 transfection시킨것으로 IkBaM은 mutant  IkB로 IkB가 phosphorylation되는 것을 막아 NF-kB가 inhibition되어있어 더 cell death를 증가시킵니다.그림에서 보면 DAPI는 모든 핵을염색시키고 TUNEL은 apoptosis가 일어난  cell만염색시킨다고 알고 있는데 이해안되는 부분이 세가지가 있습니다. 1. DAPI에서 apoptosis가 일어나던 안일어나던 전체 cell의 수는 같아야되는데 점점 cell수가 증가합니다.2. TUNEL은 apoptosis가 일어난 것만 염색되는데 마지막 SKOV3/IkBaM 에 5 PS를 처리한 cell의 apoptosis가 증가해야하는데 감소하는 것으로 나타났습니다.3. DAPI는 전체cell을 염색시키기 때문에 TUNEL이 DAPI보다 염색이 덜 되어야하는데 염색된 cell의 갯수가 똑같습니다.이 세가지가 이해가 안됩니다.ㅜㅜ꼭알려주세요(C) SKOV3/vector or SKOV3/IκBαM cells were treated with PSII(2.5 and 5 μM) and labeled with TUNEL and DAPI after 24 h of PSII treatment. Images of random fields (n=10)/slide (n=3) were collected at x400 for dataanalysis. Data are presented as the percentage of TUNEL-positive cells (green fluorescence)/total number of treated cells (blue DAPI staining). Representativefigures of treated cells labeled for TUNEL and counterstained with DAPI are shown. PSII, Paris saponin II.논문에는 이렇게 표시되어 있습니다.
eh56  |  2016.07.26
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