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 카테고리: 전체 > Molecular Biology-DNA
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Q. 1M Tris-HCl(pH8.5-8.8) 180µL 제조 방법
1M Tris-HCl(pH8.5-8.8) 180µL에서 pH가 8.5-8.8인데 여기서 HCI을 몇 mL를 넣어줘야 하는지 궁금합니다.ㅠㅡㅠ 
회원작성글 JHS3219  |  09.15
Q. 2차 Nested PCR 진행시 NC, PC(negative control, positive control) 샘플링
2차 Nested PCR 진행시 NC, PC(negative control, positive control)도 시료와 같이 1차 PCR 진행했던 것에서 샘플링 해야 되나요?
회원작성글 그리심  |  09.15
Q. 10% SDS 20µL 시약 제조법을 모르겠어요
이번에 실험을 하게 되어서 10% SDS 20µL의 시약 제조법을 알아야 하는데 관련 내용을 찾기가 힘들어서 이 제조법에 대해 아시는 분들 답변 부탁드립니다. ㅠㅡㅠ 
회원작성글 JHS3219  |  09.15
Q. yeast amp plate
amp가 E.coli에서 colony selection을 하기위해 항생제를 넣어주는걸로 알고있는데요. yeast로 ransformation 과정을 진행중입니다 yeast 에서의 Amp plate도 같은 원리로 사용하는건가요..? E.coli에서만 amp plate를 꺼보고 YPD amp plate는 써본적이 없어서 질문드립니다.
회원작성글 겨율까지  |  09.15
Q. real time pcr 띄 없음
생명과학 고수님들 안녕하세요! 저는 고등학교에 다니고있는 학생입니다.  학교에서 구강상피세포를 이용하여 ACE 유전자 타입을 알아보는 실험을 했는데 모든 조에서 DNA 밴드를 관찰할 수 없었습니다 ㅠㅠ 예상되는 이유가 몇개 있는데 1. 히팅블럭 사용의 유무 ( 학교에 히팅블럭이 없어 그냥 끓는 물에 가열했습니다. 일정한 온도로 가열할 수 없었는데 이것이 세포막 파괴에 영향을 주었을까요? ) 2. 피펫 사용 미숙으로 시료가 균일하게 섞이지 않았다. 3. Agarose gel을 만드는 과정에서 EtBr을 너무 높은 온도에서 섞으면 안된다고 알고있습니다. 이것이 사실인가요? 만약 사실이라면 이유가 무엇일까요? 또 저희는 실험 과정에서 ErBr이 아니라 생물나라의 SafeShine™ DNA Stain을 사용했는데 이 시약도 높은 온도의 Agarose와 섞으면 안되는 걸까요? 4. 실험이 예상보다 지연되어서 냉동보관이 필요한 시약들이 상온에 꽤 오랜시간(약 1시간) 방치되었습니다.    크게는 이렇게 4가지 이유가 있는데 고수님들께서 보시기에는 어떤 이유가 가장 가능성 있다고 생각하시나요? 그리고 pcr과정 말고 전기영동 자주 나오는 실수는 어떤게 있을까요?
회원작성글 생쪼  |  09.15
Q. Nested PCR 중 NC, PC 샘플링 문의
분자 진단을 이제 배우며 시작하는 단계라 부끄럽지만 문의 드립니다. Nested PCR 중 negative, positive control 도 시료와 같이 1차 PCR 진행한 것에서 샘플링 해야 되는건지 궁금합니다. 박사님께서 1차 PCR 완료된 것에서 샘플링 하여 진행하는 걸로 알려주셨는데 NC에서도 밴드가 계속 보여서 NC만 1차 PCR 진행하지 않고 2차 PCR 진행하여 확인했는데 밴드가 보이지 않습니다. 정확히 어떻게 해야 하는지 궁금합니다. 그리고 2차 PCR때 primer 농도에 따라 결과 값도 달라지던데 자세한 답변 부탁드립니다. ^^;;    
회원작성글 그리심  |  09.14
Q. 1M Tris-HCl 제조 방법
제가 시약 제조법에 대해 배우고 있는 중인데 1M Tris-HCl(pH8.5-8.8) 180µL의 제조법에 대한 정보를 알고 싶습니다.
회원작성글 JHS3219  |  09.14
Q. small panel hyb 관련 질문
혹시 굉장히 작은 사이즈의 패널로 하이브 해보신 분 있으신가요?   큰패널로 실험하고 남은 하이브 전 라이브러리 재활용 해서 다른실험에서 spike in용으로 쓰던 65K 정도 사이즈 되는 패널로 하이브 해보려는데 이렇게 작은 사이즈는 경험이 없어서 잘 될 지 몰라서요. 경험 해 보신 분들이 있는지 궁금합니다. 또 저렇게 작은 걸로 하이브를 길게하면 offtarget이 심할 것 같은데 보통 얼마나 주는지도 궁금합니다.
회원작성글 QIWIEI  |  09.14
Q. Yeast Lysis
안녕하세요 언제나 BRIC을 통해 많이 배우고 있는 대학원생입니다.   C.albicans gDNA를 Kit 를 통해 추출하려고 합니다.  그런데, protocol에서 Lyticase나 Zymolase가 Lysis를 위해 필요하다고 하는데 저희 실험실에는 없어서요ㅠㅠ 혹시 대체 할 수 있는게 있을까요?   논문을 찾다보니 Lysozyme에 다른 계면활성제(Tween20,Tween80,SDS..?)를 더 하면 효모의 세포벽을 파괴할수있다고 하는데 더 찾아봐도 논문이 비공개 되어있는 것들이 많아서 찾기 어려워서요 ㅠ 혹시 경험으로 어느 정도로 넣으면 되는지 아시는분 있으실까요? 꼭 답변 부탁드려요 감사합니다.  
회원작성글 김두루마리  |  09.14
Q. PCR에서 증폭이 되지 않습니다
안녕하세요. 현재 석사 하고 있는 대학원생입니다.   제가 primer를 새로 디자인하여 PCR을 해봤는데, real time 그래프로도 그렇고 전기영동에서도 전혀 증폭이 되지 않아서 질문 드립니다.   디자인할때 Tm값을 낮게 디자인하긴 했는데, 그렇다기엔 다른 target으로 디자인한 비슷한 Tm의 primer는 증폭이 잘 되었습니다.   간혹 이런 경우가 있을 수 있나요? 찾아보아도 원인이 뭔지 잘 모르겠어서 질문 남깁니다.
회원작성글 미니썬  |  09.14
Q. DNA복제를 추적할 때 BrdUTP 대신 BrdU를 쓰는 이유가 무엇인가요?
BrdU는 nucleoside인데 왜 nucleotide형태인 BrdUTP형태로 안쓰고 BrdU를 넣어줘서 세포내에서 BrdUTP가 되게해서 쓰는건가요?  도파민이 BBB를 통과하지 못해 L-도파를 넣어주는 경우와 같은 이유에서인가요? 아니면 tri phosphate이 붙으면서 negative charge에 의한 membrane 투과성 문제일까요..? 너무 궁금합니다 
회원작성글 포차코  |  09.13
Q. Cloning 관련 질문
안녕하세요. 클로닝 고수님들 지나가다 도와주시면 감사하겠습니다. 아래 1, 2번이 동일한 조건에서 동일한 vector에 다른 종류의 insert를 클로닝한 것인데요 ligation plate에서 self-ligation (40개 정도)과 비교해서 콜로니 개수가 1. 유사하게 형성 (40개 정도) 2. 2배 이상 형성 (100개 정도)   RE 처리해서 밴드 확인한 결과, 오히려 콜로니 개수가 적은 1번에서만 clone을 확인할 수 있었습니다. 많은 콜로니 개수가 많은 clone을 의미하는 것이 아닌지요? 제가 잘 몰라서..자세하게 알려주시면 감사합니다ㅜㅜ 2번 ligation plate에서 콜로니 picking을 다시할지, insert Back-transformation을 다시 해서 다시 클로닝할지..둘 다 해 볼지 모르겠어요
회원작성글 작은제인  |  09.13
Q. 고등학생 dna extraction
안녕하세요. 생명공학과를 희망하는 고3입니다. column 방식을 공부하던 중 적은 수의 검체에 용이하다는 글을 봤습니다. 그러면 대용량 검체의 경우에는 어떤 원리, 방법을 통해 실험하나요? ( 내용이 다 영어여서 좀 어려웠는데  etbr-staining 과정으로 염색? chaotropic salt- 수소~ 억제.? bead방식- column같이 dna 분리 방법 중 하나 (영어로 구슬,,?) silica membrane- dna 분리시 사용되는 막 agarose gel- 전기영동 할때 판? 같은 크기 별로 구분가능한 거 정도로 이해했는데 정확하게 알수있는 강의나 자료 있을까요.. ㅜ)          
회원작성글 강민04  |  09.08
Q. 제한효소 inactivation
PCR 후에 제한효소 처리해주고  Gel 로딩하기 전에 제한효소 Inactivation 처리해주려고 80도씨 20min heat block 정치했습니다. 근데 제가 제한효소를 착각해서 Inactivation이 필요없는 sample도 같이 같은 온도,시간 조건에서 heat block 처리를 하고 gel에 로딩했는데 괜찮을까요? Band는 선명하게 잘 뜨기는 했습니다.
회원작성글 ss20172289  |  09.08
Q. pET 28a enzyme cutting
안녕하세요~! pET vector 사용해서 cloning 하려고 하는데 제한효소를 선택하는데 바로 옆에 붙어있는 제한효소 두개를 선택해서 사용해도 문제 없나요? vector map 보니까 BamH1이랑 EcoR1이 바로 붙어있더라고요,,
회원작성글 qwe4r  |  09.08
Q. 유전 형질 비율 관련 질문
안녕하세요. 생명 관련 자율동아리 하고 있는 중3인데요. 제가 이번에 친구들이랑 비멘델 유전 가지고 파이썬으로 시뮬레이션을 만들어서 복대립 유전이나 중간유전 같은 것들을 구현했는데, 시뮬레이션의 결과가 어느 정도 정확한지 알고 싶어서요. 예를 들어서 완두콩의 유전형질 비율은 멘델이 실험을 했었어서 1:2:1인 게 널리 알려져 있잖아요. 근데 초파리 눈 색이라던지, 나팔꽃의 엽형과 같은 형질은 인터넷에서 제 수준으로는 형질 간의 비율이 대략 어떠한지에 대한 연구결과를 찾기가 어려워서요. 어떻게 찾을 수 있을까요?
회원작성글 e3s  |  09.07
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