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 카테고리: 전체 > Cell Biology > Cell Culture
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Q. 세포 정지상일때는 약물 흡수가 느린가요?
세포를 media에서 키울때 영양분이 고갈되면 정지상(stationary)에 들어가게 되는데 이때는 약물의 흡수가 증식기일때보다 느린가요???
회원작성글 미유미유  |  06.10
Q. [긴급] Accutase 사용하시는 연구실 있나요??? 한번만 도와주세요 ㅠㅠ 첨부파일
Cell 키울 때 사용하는 Accutase cell detachment solution 사용하는 연구실 있을까요? 급하게 필요해서 여기서 찾게 되었습니다. 지역은 서울이면 좋을 것 같습니다! 문제시 글 삭제하겠습니다.
회원작성글 티몬  |  06.09
Q. HT-22 cell line 분양
안녕하세요.   HT-22 cell line 이 실험에 꼭 필요한데 구하기가 쉽지 않더라구요.   혹시 배양하고 계신 분들이 계신다면 꼭 좀 연락 부탁드립니다.   현재 KIST 본원 (성북구) 연구실에 있습니다. 서울대 근처 (관악구) 도 괜찮습니다!    wls935@kist.re.kr 로 연락 부탁드려요ㅎㅎ
회원작성글 wls935  |  06.09
Q. plasmid vector 에 LB를 잘못 넣었을 시 대처법
Transformation을 진행하던 중,  heat shock 후 LB 1ml을 넣는 과정에서 실수로 heat shock을 준 cell이 든 e.tube가 아닌 vector가 보관되어있던 e.tube에 LB를 넣었습니다.  Transformation은 그냥 원래 넣으려고 했던 e.tube에 LB를 넣어 실험을 진행할 수 있었지만, 제가 LB를 실수로 넣은 e.tube에 있던 vector를 어떻게 사용 할 수 있게 복구할 방법이 없는지 알고 싶습니다. 같은 여러 개의 vector들 중 가장 농도가 높았던 vector여서 소중해서 이렇게 질문 글 씁니다. 혹시나 방법이 있다면 알려주시면 감사하겠습니다..
회원작성글 aquariuss  |  06.07
Q. 100파이 dish에서 media 양 여쭤봅니다
보통 저희 실험실은 100파이 dish에서 Media 9 ml 정도를 넣고 cell maintain을 진행합니다.  몇 시간전에 Cell culture을 하다가 배지양이 모자라 5개의 dish 중 3개는 Media 7-8ml 사이를 넣었는데  지금 다시 media를 9 ml로 맞춰서 change 해야할까요? 
회원작성글 쥬뗌므  |  06.07
Q. (사진있음)세포 배양 중에 fungi contamination인데 무슨 곰팡이인지 모르겠습니다ㅠㅠ 첨부파일
세포실험 진짜 어렵네요ㅠㅠ 배지교체를 하고자 세포상태를 살펴봤는데요.ㅠㅠ 곰팡이 오염인 것 같아 해당되는 plate는 전부 폐기처리 했습니다 ㅠㅠ 구글 찾아보니 곰팡이 오염이라던데요. 형태가 mycoplasma는 아닌 것 같아 여쭙니다. 어떤류의 곰팡이인 줄 알아야 다음에 대처할 수 있어서요ㅠㅠ clean bench 들어갈 때 70% 에탄올 뿌리고 사용했고, 피펫팁, 코니칼튜브, 피펫 모두 bench 내에 있습니다ㅠㅠ 혹시 세포가 수용할 수 있는 배지의 양이 적어서일까요? RPMI media가 옅은 소변색으로 자주 변해요. 세포를 일부 버린 상태에서 배지만 채워줬습니다. passage 늘어나는 것이 싫어서요. 세포실험이 쉽다는 분들도 계시지만 저는 미치겠네요ㅠㅠ 답변 부탁드립니다 ㅠㅠ 감사합니다 ㅠㅠ
회원작성글 아스널  |  06.07
Q. HeLa FFA (PA) treatment
HeLa cell 에 FFA ( Palmitic Acid ) treatmetn 실험을 계획중에 있습니다.  혹시 HeLa cell 에 PA treatment 실험 해보신 분 계신가요?  논문에서 발췌한 내용인데 HeLa cell 에 특정된 protocol을 못 찾아서 이거대로 진행하기 전에 혹시나 싶어서 여기에 한번 여쭤봅니다.   
회원작성글 비포어위스타  |  06.07
Q. MC3T3-E1 Cell Medium
안녕하세요~! 제가 Bone 관련 in vitro 실험으로 MC3T3-E1 세포주를 이용하여 실험을 set up하려고 하는데, 여러 논문들을 보고 조금 헷갈리는 부분이 있어서 질문을 하게 되었습니다 !   세포주는 MC3T3-E1 subclone 4 (ATCC, CRL-2593) 혹은 MC3T3-E1 (RIKEN, RCB1126) 세포주를 구매하려고 하고 있습니다. (같은세포, 다른회사) 여기에서 MC3T3-E1 subclone 4 (ATCC, CRL-2593)의 recommendation media는 MEM-alpha without ascorbic acid (A1049001) 이고,  MC3T3-E1 (RIKEN, RCB1126)의 recommendation media는 MEM-alpha (GIBCO (12571-063)) 입니다. 여기서, 두 media의 차이는 ascorbic acid (50mg/L)의 유무 입니다. (가격 차이도..)  본래라면, ascorbic acid는 osteoblast로의 differentiation을 유도하기 때문에, proliferation 할때에는 without ascorbic acid media를 사용하는게 맞다고 생각하지만,  최근에 publish된 논문,  Title: Evaluation of MC3T3-E1 Cell Osteogenesis in Different Cell Culture Media Doi: https://doi.org/10.3390/ijms22147752 을 보시면, 두 media (ascorbic acid, without ascorbic acid) 제품을 사용하여 MC3T3-E1 Cell line에 비교하였을 때, proliferation 관련해서도 차이가 없었고, 분화 후의 ALP activity, 그리고 mineralization nodules 까지도 차이가 없는 결과를 볼 수 있었습니다. 또한 gene expression에서 또한 몇몇 gene 빼고는 거의 차이가 없었습니다.   논문에서는 media안에 들어있는 ascorbic acid가 산화하여 이와같은 결과가 나온 것이라 생각하고 있습니다. 이 실험은 Riken cell bank의 세포로 진행되었고, 여기서 제가 궁금한 점은 ATCC의 같은 세포주인 MC3T3-E1 subclone 4에서도 MEM-alpha (with ascorbic acid, 12571-063) 제품을 사용할 수 있는지에 대한 여부 입니다.  MC3T3-E1 (ATCC) cell을 사용한 여러 논문에서는 대부분 사용한 media의 표기에 MEM-alpha 라고만 명시하고, 따로 without ascorbic aicd 제품을 사용하였다고 표기한 논문은 거의 없었습니다.  ATCC 세포와 MEM-alpha (12571-063)를 사용하려는 이유는, ATCC 세포가 더 빠르게 도착하고, media는 비용적인 차이 때문입니다. 감사합니다.  
회원작성글 호기심러  |  06.07
Q. 혹시 TEER 기계나 electrode 가지고 계신분 있으실까요??
안녕하세요 현재 transwell 에 caco2 cell 을 키워 monolayer 형성확인을 위해 TEER 측정을 하고있는 대학원생입니다..  현재 가지고있는 TEER 기계가 너무 오래돼서 측정값이 불안정합니다  혹시 TEER 기계나 electrode를 가지고있는 분이 계실까요?? 부탁드립니다 ㅜㅜ
회원작성글 누우누  |  06.06
Q. puromycin selection 너무 고농도로,,
안녕하세요. puromycin selection에 관련하여 도움을 받고 싶스니다 ㅠ_ㅠ lentivirus transduction하고 48hr이 지난후에 puromycin selection을 진행했는데요 positive control cell이 하루만에 죽은 상황입니다. 지금 cell line은 별도로 test는 거치지 않았고, reference를 찾아서 concentration을 찾았는데요. 2mg/ml으로 puromycin을 처리했습니다. 다행히 transduction한 cell에서는 cell death가 거의 없는데 지금이라도(selection후 하루 지남) media를 1mg/ml으로 바꾸는게 좋을지 여쭤보고싶습니다 ㅠ
회원작성글 rlaeheod  |  06.03
Q. cell lysate 얼려두라는 교수님의 지시사항 제가 이해 부족 ㅠ
안녕하세요 Dot blot Asaay  set up 중입니다.   교수님께서 293T Cell_NRF2  에서 , NRF2가 과발현 되는 약물 처리후, 4시간뒤에 cell lysate는 얼려두고, 바닥에 붙은 cell 은 gDNA추출 하라고 하셨는데요   1. cell lysate라는게.....  그냥 cuture 배지를 그대로 수거 해서 (배지에 발현된단백질이 떠다닐 텐데요),  코니컬 튜브에 담아서 -80도에 보관하라는 말씀이겠죠......?     
회원작성글 leanonhelp  |  06.03
Q. Media adding 또는 media change
3일전에 자궁경부암세포주 종류인 CaSki cell을 culture 하였는데, 현재 50% 미만의 confluency를 띄고 있습니다. 둥둥 떠다니는 세포가 보이는데  Media를 change하는게 좋을까요 아니면 그냥 계속 놔두는게 좋을까요?   
회원작성글 쥬뗌므  |  06.02
Q. caco2 부착이 안되어서 고민입니다..
안녕하세요 만년석사입니다.. ATCC 에서 caco2 분양을 받고 stock wash 후 t-75 flask에 풀었습니다. wash & subculture 시 1200rpm 5min 사용 (media 조성 = EMEM+10% FBS+1% p/s) 이후 부착을 기다리는데 전~~혀 붙지가 않아서 고민인데요 공간이 넓어서 덜 붙을 수 있다고 해서 T-25 flask 에도 옮겨봤지만 붙을 생각이 없습니다 ㅠㅠ media는 2~3일에 한번씩 갈아주고 있었는데 붙지도 않는데 자꾸 건드려서 더 안붙는건가싶기도 하고요.. ATCC에서 분양받은 stock 은 2개였고, 두 stock 모두 부착이 안된걸 확인했습니다..  어떤게 문제일까요?ㅜㅜ   또 번외로 질문 드리고 싶은건 Tight juncion protein 확인 목적으로 배양 중인데 꼭 Trans well 에 배양을 해야하는 건지도 궁금합니다 보통의 12well or 24well 에서 키우면 TJ 분석이 불가능 할까요?    답변 기다리겠습니다 ㅠ 감사합니다..!
회원작성글 mingudam  |  06.02
Q. 3T3-L1 분화시 질문
3T3-L1로 지방분화하는 논문을 읽다가 궁금증이 생겼습니다. 3T3-L1는 분화 시 WAT 와 BAT 둘다 될수있는건가요? 대표적으로 어떤 cell로 될수있나요?
회원작성글 아라온  |  05.31
Q. MAT B III를 RPMI-1640 미디엄에서 배양해도 될까요?
ATCC에서 MAT B III와 해당 cell에 해당하는 미디엄인 McCoy's 5A 미디엄을 함께 구매해 배양하려고 하고 있습니다. 그런데 제조사 측에서 미디엄 제조 및 납기일을 계속 미루고 있어, 불가피하게 다른 미디엄을 사용해야할 것 같습니다. 몇 reference에서는 RPMI-1640에서 MAT B III를 배양한 케이스도 있는것 같은데, McCoy 미디엄과 같은 메뉴얼로 RPMI 미디엄에서 배양해도 괜찮을지 궁금합니다.
회원작성글 블랙독  |  05.31
Q. Cell 실험 하시는 분들 cell에 PBS나 배지 처리하여 washing할 때 첨부파일
안녕하세요. Cell에 PBS나 배지 처리하여 washing할 때 가끔 cell들이 뻗어있던 것이 전부 줄어들고 떨어져있는 게 보일 때가 있습니다. pbs는 1X제품을 사서 분주하고 있습니다.(위 상피세포 AGS CELL 사진첨부) 혹시 이거에 대한 이유를 아시는 분이 계실까요?? 제 생각에는 배지나 PBS가 산화되어서...? 인 것 같은데 이 경우에는 산화된 배지를 어떻게 해결하시는지도 궁금합니다 ㅠ 코니칼에 소분해서 쓰고 있다보니 배지에 양이 적으면 산화가 잘 되는 느낌이더군요...
회원작성글 와디와디  |  05.31
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