gene silencing 관련 논문을 읽던중, RMD(RNA-mediated Defense)라는 것이 나왔는데 PTGS와 RMD가 무엇이 다른건지 정확히 모르겠습니다ㅠㅠ

안녕하세요 미생물 성장곡선의 각 lag, exponential, stationary, death phase을 판단하는 수학적 판단 기준이 있나요?   감사합니다

마우스 조직에서 RNA extraction하는데 pellet이 안보여요.. trizol로 extraction하는데, 뭐가 문제인지 도통 모르겠습니다.... isopropanol 넣고 centri 돌린 후에 pellet이 안보여요..   답해주신 것 중에 isopropanol 넣고 30min동안 incubation 했는데도 다시 centri 돌렸을 때 pellet이 관찰되지 않았습니다..   어느 과정에서 RNA가 손실됐는지 어느 과정을 중요시 해야할지.. 누가 답 좀 알려주시면 감사하겠습니다...  

LC-MS를 이용하여 EDTA-Pb 용액에서의 EDTA를 정량하려 합니다. 몇번 분석을 하였지만 예상농도보다 적은 신호가 잡혀 논문을 찾아보았는데요. 용매의 증발과 이온 생성을 돕기 위해 분석 직전 시료에 15% methanol과 0.3% acetic acid를 첨가한다고 합니다. 이 때 15% methanol과 0.3% acetic acid는 어떻게 제조해야하는건지 잘 모르겠습니다.  LC-MS grade methanol과 99.0% acetic acid 용액을 가지고 있습니다. 용액 전체를 100이라고 하면 15%가 methanol, 0.3%가 acetic acid 이고 나머지는 DI로 채우면 되는 걸까요?

안녕하세요, serum 으로 주로 실험을 하는데, 문득 궁금한 점이 생겨 질문 올려봅니다. 사람의 혈청은 대부분 노란 빛을 띠고있는데 쥐의 혈청은 굉장히 투명하고 깨끗하더라구요. 혈청이 노란 빛을 내는 이유가 빌리루빈 때문으로 알고 있는데, 쥐의 혈청에는 이 빌리루빈이 상대적으로 적은 건가요? 아니면 혹시 다른 이유가 있나요? 구글에 찾아보아도 정확히 알 수 없어 이곳에 질문 올려봅니다.

Cloning을 해야할 일이 있어서 사용할 Backbone vector를 쓰려고하는데 정량으로 양을 확인하려고 하니까 정량 할수록 자꾸 점점 양이 줄어드는 기이한 현상이 생겨서 갖다버리고 (예전에도 기억에 얼핏 문제가 있었던 것으로 기억)... 새로 stock에서 prep해서 뽑았는데 정량은 되는데 1ug정도의 plasmid를 enzyme으로 cut을 하면 이게 밴드가 없습니다. 아무리 하루 overnight해서 전부 다 잘라버리는 현상이 있는가 싶어도 여러 밴드도 아니고 아얘 아무것도 안보이는 건 말도 안된다싶어서 남은 vector를 시퀀싱을 맡겼는데 primer가 binding되지않는다며 시퀀싱에 실패(....) 그럼 그 이전에 만든 stock으로 다시 prep을 해봤지만 역시나 정량은 되는데 밴드가 안보이는걸 봐선 해당 plasmid stock이 옜날부터 맛탱이가 간 것 같습니다. (옛날에 계신 선배나 박사님이 만든걸로 추정됨) 밴드도 안뜨는데 그럼 도대체 뭐가 정량이 되는걸까요?;; Genomic DNA는 prep 과정에서 침전되는걸로 알고있는데..... 집어넣을 DNA PCR까지 잘 끝났는데 해당과정에서 문제가 생겨서 진행을 못하고 있습니다.

항생물질의 미생물학적 역가시험법에서 KP에서 Gentamicin Sulfate의 경우  표준품을 건조하여 사용하라고 되어있는데 표준품을 건조하지 않고 사용하는 이유는 뭔가요?     표준품의 경우 USP를 이용하고 있고 표준품 설명을 봤을때, 건조한 다음 671μg 으로 사용할 수 있다는 것으로 이해했습니다. 결과 구하는 수식에서는 따로 건조감량 값을 사용하지 않고 있습니다. 건조감량 등에 따른 보정을 하지 않고, 그냥 표준품을 사용해도 되는 건가요?  

cloning하는 중에 콜로니 dna prep후 enzyme double digestion해서  gel run했는데 위에 밴드는 무엇일까요? uncut? 2개 엔자임중에 한개가 아무래도 유효기간이 오래 된 것이라 working안한건지 .....아래밴드는 5kb정도에서 보이긴 하는데 이 gel 사진만으로 콜로니들이  pseudo colony라고 판단할 수 있나요?

주사제 무균시험 직접법시 사용 시약,기구 및 기기 와   멤브레인필터로 진행시 사용기기 시약, 기구, 스털라이저?가 필요하다고 들었는데 브랜드 몇개와 구매처 같이 세세하게 알려주시면 감사하겠습니다.

안녕하세요, 대학교에서 실험을 영양소 검출 실험을 진행 중에 탄수화물 검정에서 베네딕트 시약을 이용한 실험을 진행하였는데, 궁금한 점이 있어 질문 드립니다!  베네딕트 용액을 제조해서 사용할 때 시약1과 시약2를 나눠서 제작 후 반응을 할 때만 섞어서 사용하던데, 왜 시약을 한번에 제작하지 않고 나눠서 제작하는지 그 이유를 알 수 있을까요?  인터넷에 찾아봐도 잘 나오지 않아서 질문드립니다!!

이전에 G bead 에 1st antibody 를 붙여 pull-down assay 를 진행하여 target protein 과 GST fusion protein 이 binding 한다는 결과를 확인했습니다. 그런데 동일한 방법으로 GST pull-down 을 진행하자 GST fusion protein 은 잘 나오지만 target protein 의 binding 이 전혀 나타나지 않는 상황입니다. HEPES pH7.5 20mM, NaCl 150mM, NP-40 1% 로 두 실험 모두 동일한 buffer 를 사용하고 있는데, 도대체 어떤 문제 때문에 결과에 차이가 나타나는 걸까요?

클로닝 하기위해 벡터를 double digestion 한뒤 CIP처리하면 벡터만 self ligation된 콜로니가 절대 뜰수가 없나요? 콜로니가 7개만 떴고 DNA 프랩후 잘라보니 insert size0.7kb는안보이고 벡터인지 뮌지 알수없는 사이즈가 보여서요.모두 Pseudo인까요?

사실 이번 DNA/RNA 키트를 처음 사용하다보니 막히는 부분이 생기더라고요 그래서 여쭤보고자 합니다.   1. Incubate at room temperature (15~25℃) for 10 min의 의미가 실험실인 상온에서 10분을 둬야한다는 의미인건지 궁금합니다. 아니면 Incubate at RT for 1min이 상온에서 둬야하는 건지 알고 싶습니다. 

안녕하세요. 저는 실험에 대해 배워본 적 없는 일반 학생입니다. 이번에 elisa 실험을 처음으로 배우게 되었는데요 단위부터해서 희석까지 이해되는 것이 하나도 없습니다 ㅜㅜ 소 면역 글로불린 igg stadard 농도를 2000mg/dl로 보통 잡는다는데 맞는지 궁금합니다.   Recommend to dilute the serum or plasma samples with SampleDiluent(1:500)before test. The suggested 500-fold dilution can be achievedbyadding5μlsample to 95μl of Sample Diluent first, then complete the 500-folddilutionbyadding 10μl of this solution to 240μl of Sample Diluent. Therecommendeddilution factor is for reference only. The optimal dilution factor shouldbedetermined by users according to their particular experiments. ---> 어떻게 500배 희석이 되는건지 알려주세요 ㅜㅜ   Wash Buffer(1x)- If crystals have formed in the concentrate, warmuptoroom temperature and mix gently until the crystals havecompletelydissolved. Dilute 20 ml of Wash Buffer Concentrate (25 x) intodeionizedordistilled water to prepare 500 ml of Wash Buffer (1 x). --> wash buffer 20ml를 증류수에 희석하여 500ml로 만들려면 480ml 증류수를 넣어야 하는건가요? 그럼 24배 희석한거 아닌가요? 500ml증류수 넣으면 총 520ml가 되는데 그럼 25배 희석이 되는거니 500ml증류수를 wash buffer에 넣어야 하는건가요??     질문이 난해할 수도 있는데 제가 아무런 경험이 없어서 정말 모르겠습니다ㅠㅠ 도와주세요....

안녕하세요. 저는 현재 A549 세포에 LPS로 염증 반응을 유도하여 western blot 확인 중 입니다.   Inducer를 처리해도 유도가 안되는 문제는 많이 봤지만 non treat group과 LPS treat group의 밴드 둘 다 진하게 나오는 문제를 겪는 중입니다. LPS 처리조건을 정하기 위해 시간 (6, 24, 48) 및 농도 (1, 10, 20, 50, 100 ug/mL) 별 확인 해보았는데도 그룹 간 차이가 없습니다.   marker로는 MAPK, AKT, NF-kB를 주로 확인했는데 다른 cell line에서 잘나왔던 antibody이며, LPS는 sigma 055:B5로 구입한지 얼마되지 않았습니다.   조언 부탁드리겠습니다.

안녕하세요.  콩에서 단백질을 추출하여 western blot을 진행중인데  endo H를 사용하니 단백질이 너무 뭉개져서 target band가 너무 안나오는것 같아 lysis buffer를 사용하여 진행하려 시도중입니다.  우선 저희 실험방에선 endo H 외에 다른 buffer를 사용한 경험이 없어 타 실험방 lysis buffer를 사용하여 진행하였는데 잘 추출이 안되는 것 같아요. endo H를 사용했을때는 콩의 털 같은 찌꺼기(?)들이 많아보였지만 상층액 자체는 초록물이였는데 lysis buffer를 사용하니 상층액 자체가 되게 맑은 물같은 느낌이라서요ㅠㅠ 현재 사용중인 lysis buffer 조성은 50 mM Tris-HCl(pH 7.5), 150 mM NaCl, 1 mM EDTA, 0.1% Triton-X 100 입니다.  샘플을 액체질소로 얼린 후 갈고, 샘플 100 mg에 버퍼 200 ul 첨가하여 한번 더 갈아주었습니다.  해당 방법이 잘 안되는 것 같아 sonicator를 이용하였더니 그나마 조금 초록물이 나오긴 하지만 endo H 사용할때 만큼은 아닌것 같아서요...   혹시 콩으로 실험중인 분 계신다면 이에 대해 피드백좀 부탁드립니다ㅠ