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BioLab 장재봉 교수
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질문/투표/프로토콜 등록
Q. SF9 cell
   27c incubator 에서 media에 키우고 있는 SF9 Cell을 팔콘에 넣고 30분간 차량 이동해도 문제가 없는지요? 얼린 stock 은 액체질소에 넣고 운반해봤는데 media에서 자라고 있는 sf9 cell을 일부 팔콘튜브에 담고 차량이동 20~30여분 이동해서  가지고 와서 counting해서 미디어 넣고 계대배양 하는게 괜찮은지 궁금합니다. 감사합니다.
회원작성글 BBluee  |  01.19
Q. 효소 농도 기초적인 질문드립니다
효소 실험을 하다가 궁금한 것이 있어서 질문드립니다. 전년도 초에 만들어서 냉동시켜 사용중이던 효소의 활성이 많이 떨어졌습니다. 그래서 다시 효소를 만들어 실험하고자 합니다. 그런데 효소 농도 계산이 맞는건지 궁금합니다. sigma aldrich에서 판매중인 α-Glucosidase from Saccharomyces cerevisiae(G5003) 100Unit 짜리를 이용해 0.5 unit/mL로 만들고자 합니다. 이 효소 한통이 100 unit이니까 buffer 200 ml에 녹이면 될까요? 효소 실험을 할 때 이렇게 만들어서 여러 tube에 분할해서 냉동보관하고 있습니다. 이렇게 할 경우 어느정도까지 보관할 수 있는건가요?
회원작성글 연구직렬  |  01.19
Q. knock-out mice model 주문 업체 질문
안녕하세요   연구 중에 knock-out mice가 필요하게 되어서 주문을 하려고 하는데, 이 분야를 처음 다루다보니 아무 정보가 없어서 혹시 선생님들 알고계시는 업체나 주문 방법을 알 수 있을까 해서 질문등록합니다.   감사합니다.
회원작성글 약닥터  |  01.19
Q. 칼슘 어세이 efficacy 구하는 법
GPCR 활성 측정을 위해 다양한 리간드를 농도별로 칼슘어세이 실험을 하고 있습니다. 결과를 prism으로 다음과 같이 분석을 하고 있는데요. 다양한 리간드 농도별 칼슘 형광 측정 후, area under curve 계산 => log [농도]로 transform => normalize (0%= smallest mean each data set, 100% = largest mean each data set) => non-linear regression하여 EC50 값을 구하고 있습니다.   제가 궁금한 부분은, 각 리간드의 efficacy (Emax)도 구하고 싶은데, normalize에서 0%, 100% 기준을 위와 같이 설정하니,  여러 리간드가 각각 모두 100% response에 도달하더라구요.. 그래서 100% 기준을 형광 세기가 가장 높았던 리간드 기준으로 normalize를 하니 EC50 값이 굉장히 다른 값으로 나왔습니다. normalize를 어떻게 설정해야, 혹은 어떤 다른 방식으로 분석해야 efficacy를 정확히 구할수 있을까요?
회원작성글 babababo  |  01.19
Q. 난임연구원으로 취업하려면 어느학과에서 공부하면 될까요..?
난임연구원으로 취업하려면 어느학과에서 공부하면 될까요..? 전문대 출신인데 4년제 편입을 생각하고 있는데 어느쪽으로 공부해야할지 막막합니다..
회원작성글 푸르른  |  01.18
Q. ELISA 고수님들 질문드려요~!!!!
ELISA 초보의 질문입니다... 환자에서 자가항체를 검출하기 위해 ELISA를 계획하고 있는데, 발견되지 얼마 안 된 항체라 그런지 제대로 된 kit가 없어서 antigen을 코팅해서 직접 develop할 계획입니다. 근데 중간중간 헷갈리는 스텝이 많아서 도움 요청합니다ㅜ 제가 있는 실험실은 ELISA를 거의 하지 않아서 잘들 모르시네요.  우선 Nunc Maxisorp ELISA plate에다가 1) 자가항체가 타깃하는 항원 (protein)을 coating하고, 2) Blocking 후 환자 혈청을 dilution해서 incubation, 3) Human IgG Fc에 대한 HRP-conjugated 2'를 붙이려 합니다.  이 과정에서 각종 buffer 조성이 고민입니다. 제가 참고하는 논문들은 제각기 다르고 언급이 없는 논문들도 많아서요... 1. Coating buffer: 그냥 PBS에다 해도 되는 것인지, 별도 buffer가 추천되는지요? 제가 찾은 reference들은 절반 이상은 PBS에다 한다고 하고, 0.1M carbonate buffer에 썼다는 논문도 있습니다.  2. Diluent buffer: serum을 dilution하는 용액도 마찬가지로 PBS에다 하는건지, 보편적으로 추천되는 희석 버퍼가 있는지요?  3. Blocking buffer: 논문들에 따라 5% nonfat milk in PBS 혹은 0.5% casein sodium in 0.05% PBS-Tween20을 얘기하는데 어떤 차이점이 있는건가요...? 감사합니다.      
회원작성글 뉴로민  |  01.18
Q. SDS-PAGE 결과에 대한 질문이 있습니다.
Ni-NTA 친화 크로마토그래피를 통해 정제한 his-tag가 달린 단백질을 sds-page를 한 결과입니다. 크로마토그래피를 할때 elution을 다섯 번 했고, 각각 다른 tube에 elution 했습니다. 왼쪽부터 순서대로 elution 1, elution 2, elution 3, elution 5, elution 4  입니다.   1) 왜 elution 횟수가 늘어날수록 정제한 elution의 진하기가 옅어지는지 궁금합니다. 2) 네 번째에 있는 elution 5의 결과는 왜 다른 elution들에 비해 깨끗하게 결과가 나오지 않았는지 알고 싶습니다.
회원작성글 바테크  |  01.18
Q. SDS-PAGE 결과에 대한 질문이 있습니다. 도와주세요..
sds page를 하고 질문이 있어 질문 올립니다.   1) Ni-NTA 친화 크로마토그래피로 정제해 얻어낸  elution(대장균의 his-tag 단백질)에서 왜 75kDa가 가장 많이 나온건지 모르겠습니다. 그저 이 단백질에 75kDa가 많이 들어있어서 그런건가요? 2) washing을 두 번 하고 각 washing에서 얻어낸 wash I, wash II에서는 대략 25kDa가 가장 많이 정제된 것을 확인할 수 있었는데 이 wash는 무슨 이유로 elution과 다른 결과를 보이는 건가요? 3) sds page의 결과로 나타난 밴드의 해석은 어떻게 하는 건가요?  (예를 들어, 밴드의 길이, 밴드의 진하기 등)   질문이 애매해 죄송합니다. 그래도 답변 달아주신다면 정말 감사하겠습니다!
회원작성글 바테크  |  01.18
Q. GST purification 과정 중 ethanol 이 첨가될 시의 문제점
GST-tag protein purification 과정 중, 실수로 그만 GST sepharose bead 를 washing 하지 않고 그대로 cell lysate 와 혼합해버렸습니다. 해당 bead 는 100% ethanol 1:1 slurry 상태로 보존된 것이라, 아마 제 lysate 20ml 에 대략 500ul 정도의 ethanol 이 첨가되었다고 추측됩니다. 이 경우 purification 과정, 혹은 purification 된 protein 의 activity 등에 문제가 생길지 궁금합니다. 열심히 E.coli 키워서 가장 마지막 bead binding 단계에서 이러니 너무 허탈하네요...
회원작성글 움가  |  01.18
Q. protein size?????
웨스턴을 진행해서 봐야할 타겟 단백질이 Caspase-1 이라는 protein인데요. 이 protein의 size를 알고 싶어서 cell signalling이라는 사이트에 들어가서 caspase-1을 검색해보니까 MW 20, 22 이렇게 나오는데 이게 이 protein의 size 범위가 20~22라는 건가요? 그리고 IL-1β 같은 경우는 17,31 이렇게 나오는데 이런 경우에는 왤케 레인지가 큰 건가요? 단백질의 size가 정해진 게 아닌건가요??
회원작성글 남홀  |  01.18
Q. 해당 균이 무슨 균인지 아시나요
YM agar에서 아래와 같은 형태의 균이 자랐는데 아래와 같은 형태의 균 이름을 알고 계시는 분이 있을까요...?   현미경 검경 결과도 첨부합니다.
회원작성글 Levilactob..  |  01.18
Q. 미생물 용해물 제조법에 대해 궁금합니다.
안녕하세요. 미생물 쪽은 처음인지라 질문 올립니다.   미생물 (박테리아) 용해물을 만들어서 샘플삼아 실험하고싶은데, 논문을 찾아보니 대부분 액체배지에 배양된 박테리아를 centrifuge를 돌려 상층액을 filter 한 후 동결건조하여 사용한다고 되어있더라구요. 저는 직접 채취한 시료에서 분리 동정하여 얻은 미생물을 샘플로 사용하고싶은데, 저런 방식으로 용해물을 얻으면 될까요??   답변 부탁드립니다.
회원작성글 thfqldqld  |  01.18
Q. 웨스턴 블롯 p-Jnk 질문이 있습니다..
암세포에 약물을 처리하고 p-Jnk의 발현을 확인하는 실험을 하는 중인데, 메커니즘은 약물이 ER stress를 일으켜 Jnk를 인산화시켜 CHOP의 발현량이 증가하여 세포를 사멸한다고 알고 있는데, p-Jnk가 p46, p54라고 jnk1, jnk2가 있더라구요..  p54는 시간별로 증가하는데 p46은 점차 감소하는 양상으로 확인이 되었는데  p46과 p54의 각각의 차이와 관계에 대해서 알고 싶습니다.. 제가 검색해서 봤을 때는 설명에 대해 이해를 잘 하지 못하겠어서 질문을 올립니다
회원작성글 열심히는하고싶은  |  01.18
Q. cell lysis
cell lysis 해서 WCL만드는데 lysisbuffer(cell signaling제품 쓰고있어요)에 PIC 랑 PMSF 넣고 스크래퍼로 긁었어야했는데 lysisbuffer만 넣고 긁었어요.. 긁고나서 PIC랑 PMSF 나중에 넣어줘도 되나요?ㅠㅠㅠㅠ
회원작성글 묭실  |  01.18
Q. LDH assay (abcam) 질문입니다.
HepG2에 약물을 처리해서 Cytotoxicity를 abcam의 LDH assay kit를 이용해서 확인하려고 합니다.   예비 실험으로 Acetaminophen을 20mM농도와 5mM농도로 처리 해봤는데 결과가 이상하게 나오는데 이유를 모르겠어서 질문 남깁니다. 프로토콜은 먼저 WST substrate mix를 1.1ml ddH2O에 녹이고 Assay buffer와 200uL : 10mL 비율로 섞어 LDH reaction mix를 제작하고 농도별로 acetaminophen을 처리 한 세포의 배지를 100uL씩 따서 96well plate에 옮긴 후, 거기에 LDH reaction mix를 100uL씩 넣어 digital rocker에서 10분간 반응시킨 후 ELISA reader를 이용해 450nm 파장으로 absorbance를 측정했습니다.   예상한 결과는 acetaminophen 20mM농도로 처리한 cell의 배지에서 가장 높은 OD값이 나오고 아무 처리 하지 않은 cell에서 가장 낮은 OD값이 나오는 것인데   실험 결과는 20mM 농도에서 가장 낮은 0.2의 OD값이 나타났고 5mM가 가장 높은 1.05의 OD 값이 나타났고 Control그룹에서 0.6정도로 중간 값이 나타났습니다.그리고 Background control로 cell 배양에 사용하지 않은 새 배지를 사용했을 때는 1.5의 높은 OD 값이 나타났습니다.   5mM에서 Cell이 많이 죽은것이라면 20mM에서 죽지 않은것으로 나타난것도 의아하고 세포배양에 사용하지 않은 새 배지에서 1.5로 높은 OD 값이 나타난게 이해가 되지 않습니다.   프로토콜의 문제일까요.. kit는 새거라 kit 문제는 아닌 것 같습니다.  고수 분들 도와주세요 ㅠㅠ
회원작성글 gongbaek  |  01.18
Q. 저분자량 단백질 사이즈 확인 방법 질문이요 ㅜ
50~100kDa짜리 단백질을 효소로 펩티드 단위로 쪼개서 약 5kDa정도로 만들고 있습니다.   5kDa 이하가 될 수도 있는데 제가 원하는 사이즈는 5~10kDa 여서 사이즈 분포를 확인하면서 최적 조건을 찾으려 하는데  사이즈가 작아서 SDS PAGE로는 보기가 어려울 것 같아서..   분자량 분포를 확인할 수 있는 다른 방법은 뭐가 있을까요?ㅠㅠ 감사합니다!
회원작성글 GE  |  01.18
Q. Endnote 쓰는데 도와주세요ㅠㅠ
졸업논문으로 챕터 2개로 쓰려고 하는데 챕터 1에서도 2에서도 레퍼런스 시작할때 1로 시작해야 하더라구요. 챕터 1은 문제가 없는데 챕터 2에서 챕터 1의 번호를 이어서 가더라구요. 챕터2에서 레퍼런스 숫자가 1이 나오게 할 수 있는 방법 아시나요ㅠㅠ
회원작성글 ono  |  01.18
Q. 컴셀에 형질전환할때..
형질전환과정에서 궁금한게 생겨서 질문들비니다 컴셀에 kanamycin저항성이 있는 백터를 섞어주고 ice에 30분 반응 후, 42도에 90초 heat shock하고나서, 얼음에 1분박고, LB media에서 1시간 배양하는데 근데 1시간 배양할때, 그냥 LB media를 써야하나요 아니면 LB+kanamycin media를 사용해야 하나요? 그냥 LB media를 계속 써왔는데 궁급해서 물어봅니다
회원작성글 대학원생(진)  |  01.18
Q. cloning
TA cloning 진행 중인데,  X-gal 도포한 plate에서 white colony가 떠서 sequencing을 보냈는데 공백터로 나옵니다. 왜 그럴까요? insert 농독가 단단위대로 낮기는 했는데, 그래도 molar ration 맞추어서 넣은건데 그렇습니다.    
회원작성글 새슬  |  01.18
Q. 황포균 희석법에대해 질문 드립니다. 첨부파일
안녕하세요. 실험하면서 주입평판법(희석법) 을 진행했는데, 첨부한 사진을 보면 세가지 형태의 황포균이 확인되었습니다.   이론상으로는 배지 속에서 자란 균과 배지 표면에서 자란 균 두가지 타입으로 균이 자란다고 알고있는데,   제가 두번 반복해서 실험을 했는데 세가지 타입으로 균이 자라더라구요. 배지 속에서 자라는 균을 제외하고 넓게 퍼지면서 자란 균과 균을 중심으로 하얗고 투명하게 조금 번져서 자란 균 두가지 타입은 어떻게 이해하면 될까요? 질문드립니다.. 감사합니다!
회원작성글 세균걸  |  01.18
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