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Q. 같은 membrane으로 다른 antibody 붙일때 washing 시간
선배님께서 웨스턴을 두번 돌리기 싫을때 먼저 phospho-p70 antibody를 붙이고 결과를 본뒤 phospho-p70 antibody 붙인 membrane에 milk로 blocking하고 total-erk1/2 antibody를 붙이면 된다고 하시는데 아무래도 detection을 위해서 sustrate를 분주하다보니 washing을 잘해야될거 같은데 저희는 보통 washing할때 10분씩 3반복을 해주는데 이렇게만 해도 sustrate가 완전히 washing이 될까요? 1시간은 해주어야되나요?  
회원작성글 oneday  |  08.05
Q. heat block 온도에 대해 질문 있습니다! 첨부파일
저희 실험실에선 42도, 65도, 95~100도로 heat block을 사용하고 있었습니다. 그러다 문득 저 온도가 진짜 맞나 의구심이 들어 온도계를 꽂아봤는데 42도면 뭐 한 40~41도, 65도면 61도 정도, 95도로 설정하면 89도 이런식으로 heat block 설정 온도보다 실제 온도계로는 더 낮게 나오는 것을 확인했습니다. 이럴 때는 기계와 온도계중 뭘 믿고 해야할까요..? 기계는 정확할 것 같은데 온도계는 아무래도 간단? 하게 측정 할 수 있는 기기다 보니까 찝찝해서.. 왜냐하면 온도계(각각 다른 제조사)를 꽂아도 온도계마다도 조금씩 다르거든요 한 0.5도?? 뭐가 더 정확한건지 조언을 구하고자 합니다 ㅜㅜ 첨부한 사진은 현재 사용중인 heat block입니다 디지털이에요!
회원작성글 하남시보안관  |  08.05
Q. 웨스턴 결과가 none이 이상합니다. 첨부파일
웨스턴을 하였는데  1. a+b처리 2. a라는 처리 3. b라는 처리 4. none 순서대로 하였습니다. phospho-s6 antibody를 붙였는데 none은 당연히 처리가 안되있어서 연해야하는데 제일 진하게 나왔습니다. 제 기억으로는 위에 언급한 순서대로 하였는데 1번과 4번이 바뀐걸까요? 결과만 보면 4번이 none인데.... 처음에 protein 뽑을때 제가 tube를 바꿔 담은건지 ㅜㅜ  현재 다시 protein을 뽑는게 가장 베스트이지만 시간도 없고 treatment가 부족해서 다시할 여건이 되지 않습니다. 저의 실수이지만 도와주세요.ㅜㅜ
회원작성글 oneday  |  08.05
Q. RBC 와 세포 구분?
사람 조직에서 콜라겐 처리해서 세포 프렙 중인데요 세포 카운팅 시 RBC와 세포 구분이 잘 되나요?   트립판 블루 염색해서 카운팅 할때는 항상 동그랗고 살짝 노랗고 투명하고 빛나는? 모양이 세포라 생각하고 카운팅을 하는데 막상 디쉬에 깔아보면 비슷한 세포 수라도 디쉬에 붙어있는 세포가 확 차이가 나던데요 제가 카운팅한 세포에 RBC가 많이 포함이 돼서 그런걸까요? 모양으로 구분이 가능한가요 원래?
회원작성글 ㅇㄹㅅ  |  08.05
Q. transgenic zebrafish의 gene을 clonig 할 때 cDNA 사용
안녕하세요. 현재 zebrafish를 double knockout 해서 만들어져있고,  이때 RNA-seq결과로 나온 특정 유전자들에 대해서 cloming을 하려고 합니다.   그런데 이때 cloning을 하려면 cDNA를 어떤 것으로 사용해야 될까요?   두 유전자가 a, b라고 한다면 wild type   ,    a-/-    ,    b-/-    ,     a+/-,b+/-     ,    a-/-,b-/-  cDNA 나 knockout 한 model에 대해서 개념이 헷갈려서  어떤 것의 cDNA를 사용하여 target gene을 뽑아야 되는지 모르겠습니다 도움 부탁드립니다!
회원작성글 근당근당  |  08.05
Q. 바실러스 튜링겐시스를 배양할 때
분류는 무시하고 봐주시면 감사하겠습니다!!       1 LB 액체 배지에 배양이 가능하나요?  대장균 전용 배지로 알고 있는데, 바실러스 튜링겐시스를 배양 할 수 있는지 또 다른 구하기 쉬운 배지 중 바실러스 튜링겐시스를 배양 할 수 있는 배지가 있는지 알려주세요! LB 배지로 배양을 하여 실험을 한 사례나 LB 배지 사용이 가능하다는 내용이 담긴 논문 같은 출처도 알려주시면 너무너무 감사하겠습니다.   2. PC Broth (액체상태의 Plate Count 배지로서, 대부분의 세균을 배양하는데 사용) 배지에서도 바실러스 튜링겐시스 배양이 가능할까요??   어디에서 더 잘되는지 둘 다 어느 정도 잘 되는지 알려주시면 감사하겠습니다.   3. 또한 생물자원센터에서 바실러스 튜링겐시스와 백강균을 동결 건조 상태로 분양 받으려고 하는데 활성화 시켜 배양하는 방법도 알려주시면 감사하겠습니다ㅠㅠ 한 가지 질문이라도 답변해주실 수 있다면 꼭 답변해주세요. 또한 가능하다면 답변의 근거가 되는 논문이나 책과 같은 출처도 알려주시면 정말 감사하겠습니다.  
회원작성글 afffdfdee  |  08.05
Q. cell line 만들 때 transfection, infection 차이
안녕하세요, 특정 gene을 과 발현 시키는 stable cell line 제작 중입니다. 저는 보통 viral vector를 이용해 virus를 만들어 infection 시켜주는 방식으로 실험을 진행하는데요, 교수님께서 항상 왜 그냥 transfection해서 integration 된 cell을 골라내지 않냐고 말씀하셔서요. 지나가는 소리로 선배들에게 transfection을 하면 infection보다 효율이 안좋다 란 얘긴 들었고, transfection reagent는 핵막을 뚫지 못해서 division 되는 cell에만 들어가고 virus는 (lenti 사용) 핵막을 뚫는다, 정도만 알고 있는데 정확한 효율 차이 등을 아시는 분이 있으신가요? 답변 부탁드립니다 :-)
회원작성글 1461hj  |  08.05
Q. LB 배지로 대장균군
안녕하세요, 식품회사에서 계속 필름배지로 실험을 하다가 agar로 넘어왔는데, 일반세균과 진균은 괜찮은데 대장균군 실험이 애매하더라구요 ,,,,ㅠㅠ LB 배지 제조 시 한천가루를 섞어서 고체배지를 만들어서 공중낙하균 및 각종 미생물 검사를 하려고 하는데,  공중낙하균은 무조건 고체배지로 실험을 해야하는데 다른 세균이 섞이면 골라낼 수 있는지요, 혹은 공중낙하균 검사 장소를 피펫스왑해서 해야하는지,,,ㅋㅋ; 아무튼, 대장균군 외 다른 세균이 LB 고체배지에서 에서 자라거나 이를 골라낼 수 있는지 질문드립니다.
회원작성글 psy2678  |  08.05
Q. 웨스턴 결과 질문이요
웨스턴 결과를 오늘 찍었는데 결과 사진이 밴드가 아예 안 나오고 그냥 검은색으로만 나오는데 이건 뭐 때문에 그런건가요ㅜㅜ    제가 2차를 붙이고 워싱을 원래 10분 3회 하는데 이번엔 까먹고 워싱을 shaker위에 두시간 가량 냅두고 책상 위에 한시간 가량 냅둔 후에 사진을 찍었는데요! 혹시 워싱이 잘 안되면 밴드가 아예 안 보이기도 하나요? 아니면 그 전 과정들이 문제 인가요ㅜㅜ?    진짜 말 그대로 그냥 까매요 아무것도 안 보여요ㅜㅜ gapdh도, target protein도 ,,, 한 membrane에서 잘라서 두개로 나눠서 보는데 안 나와서 당황스러워요.. 웨스턴 하고 transfer 할 땐 마커가 다 넘어가서 transfer까진 문제가 없는 거 같은데ㅜㅜ
회원작성글 열두시삼십분  |  08.05
Q. peptide 합성 시 syringe의 갈색 반점
peptide synthesis를 syringe안, RT에서 stirring을 통하여 하고있는데요 가끔 갈색반점이 시린지 표면에 자주 나타납니다. 뭐때문에 이런건지 아시는 분 계신가요?
회원작성글 용가리1  |  08.05
Q. 웨스턴에서 p-AKT와 AKT 안티바디 찍어보신분 (같은 size에서 뜨는 band detection하는법)
제목 그대로, p-AKT와 AKT를 디텍션하려고 하는데, 둘 다 60 kDa에서 뜨는 안티바디라서요. 첨엔 두 gel을 만들어서 각각 찍고 정량을 해봤는데 같은 샘플이어도 gel마다 크리티컬하진 않아도 좀 차이가 있길래 혹 같은 gel에서 찍어야 할까요? 하나 먼저 찍고 washing 후 같은 membrane으로 다음 안티바디 붙여서 찍는걸 추천하시나여? 아님 그냥 각각 다른 gel에서 찍고 정량해도 큰 문제 없을까요? (+)덧붙여, 각각 다른 gel에서 찍었을경우 p-AKT, AKT를 각각의 gel에서 뜬 b-actin으로 정량한 후 그 값을 p-AKT/AKT로 계산하나요, 아니면 p-AKT, AKT 각각의 밴드만 image J로 정량한 후 그 값을 바로 p-AKT/AKT ratio 값으로 계산하시나요?
회원작성글 experiment  |  08.05
Q. 면적당 함유량에 관해 추가질문있습니다 ㅠㅠ
가로 50cm*세로75cm의 샘플의 중량이 75g이고, 중요한 성분이 5g들어갔다고 가정하면 이 샘플은 10cm2 당 중요한 성분이 몇 그램 들어갔는지 계산하는 방법을 문의했고,   [면적을 10으로 나눠서 나온 값으로 5g을 나누면 10cm^2에 들어있는 성분 중량이 나올 겁니다.]   라는 답변을 받았는데 ㅠㅠ 50*75=3750cm2이 면적이고 3750/10=375에서 375/5 를 하면된다는건가요?? 그럼 답이 75인데 10cm당 75g이 된다는건가요...?아님 10cm당 75mg이된다는건가요ㅠㅠ
회원작성글 kksr  |  08.05
Q. beta actin band로 정량해서 protein 용량을 늘려서 western blot 하는 방법도 있나요?
제목 그대로 membrane에 뜬 beta actin band를 image J 같은걸로 정량해서 다시 western blot용 protein sample 제조 할때 protein 갚을 늘리는 방법이 있을까요? rat brain을 일부 잘라서 protein을 추출하여 standard curve로 protein 정량 했었는데 beta actin band의 크기가 일정하지 않더라구요. 교수님께서 샘플의 크기가 일정하게 똑같지 않아서 이런 결과가 나온거 같다며 beta actin band로 정량해서 protein 용량을 늘려보라는데 제가 이렇게 해본적이 없어서 문의 합니다... 방법 아시는 분 답변 부탁드려요!!
회원작성글 스텔라  |  08.05
Q. 면적당 함유량을 알고싶으면 어떻게 하면되나요?
아예 문외한이라서 아무것도 몰라서 감이 안옵니다.. 예를 들어 가로 50cm*세로75cm의 샘플의 중량이 75g이고, 중요한 성분이 5g들어갔다고 가정하면 이 샘플은 10cm2 당 중요한 성분이 몇 그램 들어갔는지 계산하는 방법이 있을까요? 샘플마다 사이즈, 중량, 중요한성분 중량이 모두 다르다고 가정했을때 중요한 성분이 면적 당 얼만큼 함유되어 있는지 알고 싶어서요..
회원작성글 kksr  |  08.05
Q. 콜라겐 분산액 제조법
안녕하세요, 스펀지 형태의 콜라겐을 버퍼나 물에 분산시켜 콜로이드 용액을 제조하고싶습니다. 그런데 계속 용해되고 나서 굳어버리네요,, 콜라겐이 녹지 않고 고르게 분산만 시킬 수 있는 방법이 없을까요? 
회원작성글 koreayoon  |  08.05
Q. 고등학생 암세포 배양 실험 질문 들어주세요
안녕하세요 이번에 제가 암세포 배양과 관련된 실험을 했습니다. 근데 제가 다니는 학교가 과학고나 영재고가 아니라서 실험 기구 등 제약이 있어서 원하는 결과를 얻지는 못했습니다. 실험의 실패 원인을 분석하는 와중에 혼자서 해결하기는 어려운 의문이 들어서 질문 올립니다.  실험의 내용은 대략 약물(영양제)이 배양된 암세포에 미치는 영향을 관찰하는 것입니다. 암세포는 동결되지 않은 상태의 MDA-MB-453 세포를 사용하였고, 세포 배양 방법은 계대배양과 비슷한 방식으로 cell culture flask에 배양했습니다. 질문의 내용은 다음과 같습니다. 1. 이산화탄소를 공급해줘야 하는 이유가 배양액의 pH 농도를 일정 수준으로 유지하기 위함이라고 알고 있습니다. 배양액의 pH 농도 변화가 세포의 생존을 크게 좌우하나요? 2. 배양 과정에서 너무 적은 부피의 conical tube를 사용한 탓인지 원심분리 후 pellet이 눈에 보이지 않았습니다. 그래서 불가피하게 ‘상층액을 suction하고 새로운 medium을 넣어 pipetting’하는 과정을 생략하고 바로 culture flask에 새로 제조한 배양액과 넣었습니다. - 원심분리 후 상층액을 제거하고 새로운 medium을 다시 넣어 재현탁 과정을 거치는 특별한 이유가 있을까요? - 2번 내용이 암세포가 flask에 자리 잡는 데에 큰 영향을 미쳤을까요? 3. 약물 투여 방식과 시점이 적절하지 않았던 것 같습니다. 정제를 직접 빻아 사용했기 때문에 크고 거친 입자가 배양액에 충분히 용해되지 않았습니다. 논문을 찾아보니 실제 연구에서는 동결 건조 분말 상태의 약물을 배양액에 용해한 후 사용한 것을 확인할 수 있었습니다. 보완해서 실험을 다시 설계해보고 싶습니다. 약물 투여 시 분말 형태의 약물을 사용하는 것 이외에는 다른 방법이 없을까요? 결과를 얻기 위해 약물 투여 시점은 어떻게 설정하는 것이 좋다고 생각하시나요?  4. 4번은 실험과는 상관없는 질문이긴 한데  암세포, 종양은 인체 내에서 혈관을 생성한다던가 아니면 다른 부위로 전이된다던가 해서 조직과 상호작용? 을 많이 하면서 성장하는 것으로 알고 있는데 암세포 관련 in vitro 실험에서는 in vivo 실험에 비해 생체 조직과의 관계성이나 어떤 작용 매커니즘을 알기에는 어려움이 있지 않나요? 그저 '암세포'자체 와의 관련성을 확인하는 것인가요? 제 질문 내용이 미흡할 수 있겠지만, 답변해주신다면 정말 큰 도움이 될 것 같습니다. 감사합니다!      
회원작성글 응가응가응가  |  08.05
Q. 암페어와 전기전도도의 값이 음수일 수 있나요? 첨부파일
안녕하세요 최근 action potential을 공부하다 궁금한게 생겼습니다. 전기..에 대해선 문외한이라 잘 아시는 분의 조언을 구합니다. I = electrical current의 amount, g = electrical conductance라 알고 있는데, 제가 밑줄 친 식(ohm's law)에 대해 I와 g는 항상 양수 (또는 0)값만 가질 수 밖에 없는지 궁금합니다. 각각 amount & ability(ease)의 개념이라 음수일 수가 없는건가요? 너무 기초적인 질문일까 부끄럽지만 질문합니다.
회원작성글 코끼리땃쥐  |  08.05
Q. Dialysis buffer 관련 질문드립니다.
Dialysis과정은 처음 해보는 실험이라 모르는게 많습니다..  사용중인 protein이 urea에 용해되어있는데, 이 urea를 다른 buffer로 exchange해주고싶어요. 현재는 총16시간 dialysis를 하고 한번 buffer 교환을 해주는데 어느정도의 buffer와 시간을 얼마나 해야 완전히urea가 다 빠져나오고 buffer change 되는지 잘 모르겠습니다. 계산하는 식이 있는것 같은데 잘 안나오네요.. 혹시 아시는분 계신가요 혹시 관련해서 도움될만한 책이나 자료로 추천해 주실만한게 있나요?
회원작성글 폰지밥  |  08.04
Q. DNA 1kb ladder
현재 바이오팩트 DNA ladder을 사용하고 있습니다. DNA 1kb ladder 5ul 에 6 x loading dye 1ul로 섞어 쓰는 것 아닌가요..? Uv 밑에서 아무것도 안보입니다. 그래서 다른 회사 제품 프로토콜 보고 dna ladder 1ul 6xloading dye 1ul dw 4ul 로 섞어 써도 밴드가 안보여요 ㅠㅠ 제가 아무래도 잘못 알고 있는 것 같은데 어떤 비율로 섞어 써야 할까요?
회원작성글 wowsparrow  |  08.04
Q. Mouse 치아 부정교합 관련 첨부파일
첨부한 사진과 같이 마우스가 부정교합이 있습니다. 이렇게 심하지 않아서 식이 잘 섭취했었는데 지난주부터 갑자기 섭취도 잘 못하고 있고, 4주령부터 8주령 될때까지 주에 3그램 정도 고르게 체중증가 되고 있었는데 8주차와 9주차 비교했을때 갑자기 2.46그램 감소했습니다. 그래서 살펴보니 아랫니가 코옆부분 피부를 뚫을정도로 길어져서ㅠㅠ 많이 아파하고 식이를 잘 못 섭취해서 그런것 같더라구요. 이런경우는 어떻게 해결할수있을까요? 마취하고 손톱자르듯 잘라주고 싶은데 더 아파할까봐ㅠ 경험에서 우러나온 고견 기다리겠습니다.
회원작성글 뽀렙뽀렙  |  08.04
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