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Q. Antigen retrieval 전자레인지
안녕하세요! 지금 조직 염색 하려고 하고 있는데   슬라이드에 조직 붙인 다음에 Antigen retrieval 어떻게 진행하시나요?   큰 비커에 슬라이드를 다 넣고 전자레인지에 돌리라고 많이 말씀하시는데 ㅠㅠ 혹시 슬라이드가 겹쳐도 되는 건지.... 걱정 되어서요.. 그리고 전자레인지로 antigen retrieval 할 때 저는 해동 5분씩 4-5번 (총 20-25 분)하는데 끓진 않고 뜨거운 정도인데 괜찮나요? Abcam protocol 보면 boiling하라고 되어있는데 슬라이드 랙(carrier)에 꽂아서 돌리다 보니 버퍼는 아낄 수 있지만 끓으면서 2-3분만 되도 다 증발되어서 ㅠㅠㅠ    의견 부탁드립니다 ㅎ
회원작성글 뚠뚜딘  |  08.07
Q. Mouse Brain Paraffin section IF staining 섹션 두께
안녕하세요!   현재 mouse brain에서 IF staining을 시도하고 있는데요..   먼저 brain은 PFA 고정 후 Parrafin으로 embedding 하였습니다. 선배랑 제가 따로 section을 진행하였고, sample 모두 받아서 제가 IF staining을 하였습니다. 선배는 5 um으로 section을 하였고 저는 8-10 um으로 section을 진행하였는데요. 일반적으로 parrafin section의 경우에는 5-8 um로 많이 한다고 하더라구요. IF staining 결과 (IF staining 모두 한번에 진행) 선배 slide에서는 signal 이 굉장히 약하고 specific 하게 staining이 되지 않았습니다(거의 staining이 안 되었다고 봐도 무방). 조직 염색의 경우 section이 얇으면 얇을 수록 resolution이 좋고 깔끔하게 data가 나온다고 생각했는데 조직에 따라서는 두꺼울 수록 결과가 잘 나오는 경우도 있나요?  제가 8-10 um로 section을 다시 해서 IF staining하는 게 trouble shooting 이 될지 궁금합니다. 모든 step은 똑같은데, section한 사람만 다르니 ㅠㅠ..   그리고 paraffin section의 경우 8-10 um가 mouse brain 혹은 lung 보기 너무 두꺼운지도 의견 부탁드립니다 ㅎㅎ
회원작성글 뚠뚜딘  |  08.07
Q. 유산균 접종 발효시킨 우유 배지 배양
1. 유산균을 37도~40도에서 4시간동안 중탕으로 증식시킨 우유를 희석해서 mrs 배지에 spreading 평판 도말법을 이용해서 도말하고 뚜껑 닫히는 부분에 진공그리스를 바른 락앤락에 배지를 넣고 48시간 기다릴 계획입니다. 쓸 예정인 동결건조 유산균 제품은 유산균 100%로 혐기성, 호기성 유산균이 둘 다 있다는데요 제가 알기론 혐기성은 산소를 차단해줘야 하고 호기성은 산소 있어도 괜찮다고 알고있는데 진공그리스 발라서 산소 차단해줬으니까 배양 가능할까요… 2. 락앤락에 진공그리스를 어떻게 얼마나 무엇으로 발라야 할까요 정확하게 알 수 있었으면 좋겠습니다 3. 우유에 유산균 넣어서 요거트 만들 때 꼭 일반우유를 사용하라고 하는데 칼슘 우유나 저지방 우유 멸균 우유 유당분해우유 등은 발효가 잘 안된다고만 나와있고 그 이유 원인은 무엇인지 찾을 수가 없어요. 잘 아시는 분 설명해주시면 정말 감사하겠습니다. ㅠㅠㅠ 4. 유산균을 접종한 직후의 우유와 4시간 중탕 후의 우유를 도말할 계획인데 나중에 colony 수를 세어서 어떤 그래프나 표로 비교 분석하는 게 좋을까요 탐구의 목적은 유산균이 가장 많이 증식한 우유와 가장 증식하지 못한 우유를 찾고 그 우유의 다른 우유와의 차이가 되는 성분이 뭔지 조사해서 증식에 도움이 되는/억제가 되는 요소를 예측? 하려합니다.
회원작성글 무지개빛  |  08.07
Q. 항생효과 실험 때 시료액 만드는 법
Day1. 마늘 가루, 생강 가루, 계피 가루 10g씩 에탄올 100ml와 함께 비커에 넣고 섞는다. (추출액을 만들기 위해서) 파라필름으로 비커를 밀봉한 후 냉장고에 하루 동안 보관한다. Day2. (1) 비커에 상층 부분을 스포이드로 거름종이로 한번 거른다. (2) 디스크를 패트릭 접시에 옮기기 전 핀셋을 화염 멸균한다. (계속) 그리고 디스크를 옮긴다. 각 패트릭 접시에 (3) 마늘 추출액을 스포이드로 디스크에 2ml 씩 떨어뜨린다. 3개의 디스크 중 하나에 항생제 2ml을 더 추가한다. 생강 추출액, 계피 추출액도 이와 같이 실행한다. 여기에서 에탄올로 시료액을 만들면 안된다고 하는데 혹시 시료액을 만들 수 있는 다른 방법을 아시는 분 있나요? 학교에서 실험해요..
회원작성글 허브민트  |  08.06
Q. 디스크 확산법으로 천연항생물질과 항생제의 항생효과 비교 실험 피드백 부탁드려요 첨부파일
학교에서 실험합니다. 천연 항생 물질은 마늘 가루 생강 가루 계피 가루를 사용할 거에요! 실험 계획 보고 피드백 좀 해주시면 감사하겠습니다. Day1. 마늘 가루, 생강 가루, 계피 가루 10g씩 에탄올 100ml와 함께 비커에 넣고 섞는다. (추출액을 만들기 위해서) 파라필름으로 비커를 밀봉한 후 냉장고에 하루 동안 보관한다. Day2. (1) 비커에 상층 부분을 스포이드로 거름종이로 한번 거른다. (2) 디스크를 패트릭 접시에 옮기기 전 핀셋을 화염 멸균한다. (계속) 그리고 디스크를 옮긴다. 각 패트릭 접시에 (3) 마늘 추출액을 스포이드로 디스크에 2ml 씩 떨어뜨린다. 3개의 디스크 중 하나에 항생제 2ml을 더 추가한다. 생강 추출액, 계피 추출액도 이와 같이 실행한다. (4) 항생제(페니실린)을 2ml씩 3개의 디스크에 떨어뜨린다. 에탄올도 3개의 디스크에 2ml씩 떨어뜨린다.(대조군 역할) (5) 디스크가 마르는 동안 생물 나라에서 구매한 LB Agar Plate를 하나는 4개의 구역 또 다른 하나는 5개의 구역으로 나눈다. (6) 생물 나라에서 산 대장균 배양액을 피펫으로 (안되면 일회용 스포이드로) 100ul(0.1ml) 를 배지에 접종한다. 접종한 후 스프레더를 화염멸균하고 대장균을 잘 펴 바른다. (7) 나머지 배지도 위와 같이 실행한 후 배지를 말린다. (8) 핀셋을 화염 멸균한 후 추출물, 항생제, 에탄올을 적신 디스크를 배지 위 각 구역에 옮긴다. 옮길 때 디스크가 떨어지지 않도록 핀셋으로 살짝 눌러준다. (할 때마다 핀셋 화염멸균) (9) 배지를 담고 있는 접시를 파라필름으로 밀봉한다. 배양 준비를 끝마친 배지는 뒤집어 놓는다. (10) 배지를 배양기 속에 넣고 37도로 하루 동안 배양한다. Day3. 대장균 생장 억제 정도를 비교하고 자로 재서 정확한 수치를 비교한다. 실험계획에서 피드백해주시면 감사하겠습니당. 그리고 주의할 점도 알려주시면 감사하겠습니다. 질문! 피펫을 사용한다면 대장균을 접종할 때 소독을 어떻게 해야 하나요? 그리고 파라필름으로 밀봉하고 접시를 왜 뒤집어 놓아야 하나요? 그리고 생물 나라에서 디스크를 사려고 하는데 항생제 감수성 디스크랑 그냥 항생제 디스크가 있던데 무슨 차이 인가요?
회원작성글 허브민트  |  08.06
Q. melanoma cell culture 중에 찍은 사진입니다2 첨부파일
배지가 굳어서 갈라진건가요? 배지를 새로 갈아줘아하나요?
회원작성글 단치  |  08.06
Q. melanoma cell culture 중에 찍은 사진입니다 첨부파일
흰색 가느다란 줄 같은게 보이는데 문제가 있는건가요? 배지를 갈아줘야하나요?
회원작성글 단치  |  08.06
Q. 돼지피에 ABO형 시약을 처리한다면 응집될까요?
돼지피는 혈액형이 인간보다 많은 걸로 알고있는데 ABO시약을 돼지피에 넣는다면 하나라도 응집되는게 있을까요? RH+,- 여부도 알고싶네요
회원작성글 흔한수시러  |  08.06
Q. 다른 균을 배양한 두 배양액을 섞었을 때
카테고리는 무시해주세요!!   바실러스 튜링겐시스와 백강균을 배양했을 때 각각 액체 배지인 LB 배지   MCM 배지에 배양하여 혼합하려고 하는데 혼합했을 때 서로의 배지가 영향을   주지는 않나요?
회원작성글 afffdfdee  |  08.06
Q. 세포 주기 조절
실험 관련 내용은 아니지만 여쭙고 싶은게 있습니다 암세포는 성장인자 같은 외부 신호가 없어도  G1기 검문 지점을 지날 수 있나요? 만약 그렇다면, 역으로 암세포가 G1기 검문 지점을 통과할 수 없게 만드는, 즉 G0 성장 정지 상태에 계속 머물게하는 외부 신호를 찾는 연구를 통해서 암세포가 분열할 수 없게 만들 수 있지 않을까요? 혹시 이러한 원리를 가진 항암 요법이 사용되고 있나요? 
회원작성글 수2대  |  08.05
Q. primary fibroblast 제거 방법
안녕하세요.  Skin에서 primary Endothelial cell 연구하고 있는 학생입니다.  Endothelial cell만 배양하고 싶은데 Fibroblast를 어떻게 제거 해야하는지 모르겠습니다.  계대하게 되면 Fibroblast가 우세하게 자라 문제가 되는 상황입니다. 배지는 Endothelial cell 전용배지로 키우고 FBS는 들어있지않습니다.  부착 시간으로 dish 옮겨도 보고, TE를 통해서 진행 해봐도 계속 Fibroblast는 남아있어요 ㅜㅜ MACS 통해서 분리해봐도 (밀테니 회사- 조언받아가면서 진행) 전혀 분리되지 않습니다.  이럴때 방법이 있을까요?
회원작성글 ㅅㄹㅈ  |  08.05
Q. 같은 membrane으로 다른 antibody 붙일때 washing 시간
선배님께서 웨스턴을 두번 돌리기 싫을때 먼저 phospho-p70 antibody를 붙이고 결과를 본뒤 phospho-p70 antibody 붙인 membrane에 milk로 blocking하고 total-erk1/2 antibody를 붙이면 된다고 하시는데 아무래도 detection을 위해서 sustrate를 분주하다보니 washing을 잘해야될거 같은데 저희는 보통 washing할때 10분씩 3반복을 해주는데 이렇게만 해도 sustrate가 완전히 washing이 될까요? 1시간은 해주어야되나요?  
회원작성글 oneday  |  08.05
Q. heat block 온도에 대해 질문 있습니다! 첨부파일
저희 실험실에선 42도, 65도, 95~100도로 heat block을 사용하고 있었습니다. 그러다 문득 저 온도가 진짜 맞나 의구심이 들어 온도계를 꽂아봤는데 42도면 뭐 한 40~41도, 65도면 61도 정도, 95도로 설정하면 89도 이런식으로 heat block 설정 온도보다 실제 온도계로는 더 낮게 나오는 것을 확인했습니다. 이럴 때는 기계와 온도계중 뭘 믿고 해야할까요..? 기계는 정확할 것 같은데 온도계는 아무래도 간단? 하게 측정 할 수 있는 기기다 보니까 찝찝해서.. 왜냐하면 온도계(각각 다른 제조사)를 꽂아도 온도계마다도 조금씩 다르거든요 한 0.5도?? 뭐가 더 정확한건지 조언을 구하고자 합니다 ㅜㅜ 첨부한 사진은 현재 사용중인 heat block입니다 디지털이에요!
회원작성글 하남시보안관  |  08.05
Q. 웨스턴 결과가 none이 이상합니다. 첨부파일
웨스턴을 하였는데  1. a+b처리 2. a라는 처리 3. b라는 처리 4. none 순서대로 하였습니다. phospho-s6 antibody를 붙였는데 none은 당연히 처리가 안되있어서 연해야하는데 제일 진하게 나왔습니다. 제 기억으로는 위에 언급한 순서대로 하였는데 1번과 4번이 바뀐걸까요? 결과만 보면 4번이 none인데.... 처음에 protein 뽑을때 제가 tube를 바꿔 담은건지 ㅜㅜ  현재 다시 protein을 뽑는게 가장 베스트이지만 시간도 없고 treatment가 부족해서 다시할 여건이 되지 않습니다. 저의 실수이지만 도와주세요.ㅜㅜ
회원작성글 oneday  |  08.05
Q. RBC 와 세포 구분?
사람 조직에서 콜라겐 처리해서 세포 프렙 중인데요 세포 카운팅 시 RBC와 세포 구분이 잘 되나요?   트립판 블루 염색해서 카운팅 할때는 항상 동그랗고 살짝 노랗고 투명하고 빛나는? 모양이 세포라 생각하고 카운팅을 하는데 막상 디쉬에 깔아보면 비슷한 세포 수라도 디쉬에 붙어있는 세포가 확 차이가 나던데요 제가 카운팅한 세포에 RBC가 많이 포함이 돼서 그런걸까요? 모양으로 구분이 가능한가요 원래?
회원작성글 ㅇㄹㅅ  |  08.05
Q. transgenic zebrafish의 gene을 clonig 할 때 cDNA 사용
안녕하세요. 현재 zebrafish를 double knockout 해서 만들어져있고,  이때 RNA-seq결과로 나온 특정 유전자들에 대해서 cloming을 하려고 합니다.   그런데 이때 cloning을 하려면 cDNA를 어떤 것으로 사용해야 될까요?   두 유전자가 a, b라고 한다면 wild type   ,    a-/-    ,    b-/-    ,     a+/-,b+/-     ,    a-/-,b-/-  cDNA 나 knockout 한 model에 대해서 개념이 헷갈려서  어떤 것의 cDNA를 사용하여 target gene을 뽑아야 되는지 모르겠습니다 도움 부탁드립니다!
회원작성글 근당근당  |  08.05
Q. 바실러스 튜링겐시스를 배양할 때
분류는 무시하고 봐주시면 감사하겠습니다!!       1 LB 액체 배지에 배양이 가능하나요?  대장균 전용 배지로 알고 있는데, 바실러스 튜링겐시스를 배양 할 수 있는지 또 다른 구하기 쉬운 배지 중 바실러스 튜링겐시스를 배양 할 수 있는 배지가 있는지 알려주세요! LB 배지로 배양을 하여 실험을 한 사례나 LB 배지 사용이 가능하다는 내용이 담긴 논문 같은 출처도 알려주시면 너무너무 감사하겠습니다.   2. PC Broth (액체상태의 Plate Count 배지로서, 대부분의 세균을 배양하는데 사용) 배지에서도 바실러스 튜링겐시스 배양이 가능할까요??   어디에서 더 잘되는지 둘 다 어느 정도 잘 되는지 알려주시면 감사하겠습니다.   3. 또한 생물자원센터에서 바실러스 튜링겐시스와 백강균을 동결 건조 상태로 분양 받으려고 하는데 활성화 시켜 배양하는 방법도 알려주시면 감사하겠습니다ㅠㅠ 한 가지 질문이라도 답변해주실 수 있다면 꼭 답변해주세요. 또한 가능하다면 답변의 근거가 되는 논문이나 책과 같은 출처도 알려주시면 정말 감사하겠습니다.  
회원작성글 afffdfdee  |  08.05
Q. cell line 만들 때 transfection, infection 차이
안녕하세요, 특정 gene을 과 발현 시키는 stable cell line 제작 중입니다. 저는 보통 viral vector를 이용해 virus를 만들어 infection 시켜주는 방식으로 실험을 진행하는데요, 교수님께서 항상 왜 그냥 transfection해서 integration 된 cell을 골라내지 않냐고 말씀하셔서요. 지나가는 소리로 선배들에게 transfection을 하면 infection보다 효율이 안좋다 란 얘긴 들었고, transfection reagent는 핵막을 뚫지 못해서 division 되는 cell에만 들어가고 virus는 (lenti 사용) 핵막을 뚫는다, 정도만 알고 있는데 정확한 효율 차이 등을 아시는 분이 있으신가요? 답변 부탁드립니다 :-)
회원작성글 1461hj  |  08.05
Q. LB 배지로 대장균군
안녕하세요, 식품회사에서 계속 필름배지로 실험을 하다가 agar로 넘어왔는데, 일반세균과 진균은 괜찮은데 대장균군 실험이 애매하더라구요 ,,,,ㅠㅠ LB 배지 제조 시 한천가루를 섞어서 고체배지를 만들어서 공중낙하균 및 각종 미생물 검사를 하려고 하는데,  공중낙하균은 무조건 고체배지로 실험을 해야하는데 다른 세균이 섞이면 골라낼 수 있는지요, 혹은 공중낙하균 검사 장소를 피펫스왑해서 해야하는지,,,ㅋㅋ; 아무튼, 대장균군 외 다른 세균이 LB 고체배지에서 에서 자라거나 이를 골라낼 수 있는지 질문드립니다.
회원작성글 psy2678  |  08.05
Q. 웨스턴 결과 질문이요
웨스턴 결과를 오늘 찍었는데 결과 사진이 밴드가 아예 안 나오고 그냥 검은색으로만 나오는데 이건 뭐 때문에 그런건가요ㅜㅜ    제가 2차를 붙이고 워싱을 원래 10분 3회 하는데 이번엔 까먹고 워싱을 shaker위에 두시간 가량 냅두고 책상 위에 한시간 가량 냅둔 후에 사진을 찍었는데요! 혹시 워싱이 잘 안되면 밴드가 아예 안 보이기도 하나요? 아니면 그 전 과정들이 문제 인가요ㅜㅜ?    진짜 말 그대로 그냥 까매요 아무것도 안 보여요ㅜㅜ gapdh도, target protein도 ,,, 한 membrane에서 잘라서 두개로 나눠서 보는데 안 나와서 당황스러워요.. 웨스턴 하고 transfer 할 땐 마커가 다 넘어가서 transfer까진 문제가 없는 거 같은데ㅜㅜ
회원작성글 열두시삼십분  |  08.05
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