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 카테고리: 전체 > Immunology
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Q. T cell differentiation 실험 질문 드립니다.
안녕하세요. 갓 입학한 새내기 대학원생입니다. 저는 특정 질병이 있는 mouse와 건강한 mouse의 면역세포의 차이를 보고자 합니다. 골수에서 세포를 분리하여 분화능이나 사이토카인 분비능을 확인하고자 합니다. 골수에서 primary cell을 분리하여 T cell로 분화시켜 질병 유무에 따라 분화능에 차이가 있는지 보려고 하는데, 보통 T cell로 분화시킬 경우에 어떤 과정으로 진행하시는지 궁금합니다. -> 저는 hematopoetic progenitor cell marker인 CD34를 이용해 sorting 후 T cell로 분화시켜 FACS로 확인하려고 합니다. 가능할까요? 그리고 T cell로 분화시키는 방법을 구글링해보았는데, 제가 서툴다보니 정확한 정보를 찾지 못했습니다. 제가 이해한 바로는 progenitor cell에 anti-CD8 항체를 treat 해주면CD8으로 분화가 유도되는게 맞을까요? T cell 실험을 진행해보신 선배님들의 많은 조언 부탁드리겠습니다. 감사합니다!
회원작성글 cp2c  |  02.15
Q. sodium citrate dihydrate로 antigen retrival buffer를 만들고자합니다.
sodium citrate dihydrate로 antigen retrival buffer를 만드는과정에서 D.W와 sodium citrate dihydrate를 넣고 pH를 맞추는데 HCl로 맞추다가 너무 낮아졌을 경우 NaOH로 맞췄을 때 NaCl이 생길텐데 이는 antigen retrival buffer 역할을 하는데 영향을 줄까요..? 보통 다른 buffer pH를 맞출 때 HCl로 맞추다가 pH가 너무 낮아졌을 때 NaOH를 사용하나요 아니면 새로 만들어서 사용하시나요?
회원작성글 실험어린이1  |  02.14
Q. immunofluorescence에서 U0126 , RAPAMYCIN
immunofluorescence 실험중에서 treatment과정에서  U0126 , RAPAMYCIN 억제제를 사용하였습니다.  U0126 , RAPAMYCIN이 억제제 역할을 하는 것은 알고 있는데 어떤 역할을 하나요?
회원작성글 oneday  |  02.08
Q. 마스크 관련 이슈
요즘 마스크 관련하여 가장 큰 이슈는 무엇일까요?   마스크를 착용해도 바이러스나 가스는 통과할 수 있고 정확한 마스크의 착용도 힘드므로 그런 것에 대한 궁금증이라던가 기침이라던가 실제 호흡의 차이라던가 새로운 소재로 만들어진 마스크라던가 사람들이 가장 궁금해 하는게 무엇일지 여쭤보고 싶습니다.
회원작성글 nature1  |  02.08
Q. ELISA 세팅 도움
안녕하세요 ELISA 세팅중인 대학원생입니다. 다른게 아니라 House dust mite Specific IgE ELISA를 하려고 하는데.... Capture Ab에 정하는데 있어서 애로사항이 많아 질문글을 올립니다. 논문들이 하나 같이 그냥 HDM 100 ug/ml를 Capture Ab로서 깔았다. 라고 하는데 도대체가 무슨 HDM을 깔아서 Ab로 썻는지를 모르겟네요.... 다른 dection이나 enzyme, TMB에 대해서는 제품명이라도 적어두는데 유독 Capture에 대한 정보가 부족하네요 혹시 아시는분 계시면 답변좀 꼭 부탁드립니다.
회원작성글 Remin  |  02.07
Q. 임신진단키트
선생님들 안녕하십니까. 너는 늦게나마 대학원에 진학하여 학위를 이수중에 있습니다. 최근 연구 중 너무 막막하여 자문을 구하기 위해 왔습니다.... 저의 연구 내용은 두가지 이상의 여성호르몬을 동시에 검출할 수 있는 kit 제작입니다. 처음에는 정말 간단하게 결과가 나올것 같았습니다만.... 시작조차 제대로 되지않아 여러가지로 많은 스트레스를 받고 있습니다. 두가지 호르몬은 커녕 가장 기본적인 HCG 호르몬 검출도 되지 않습니다. 현재 실험 단계입니다. 1. 면역크로마토그래피(샌드위치법)을 사용하여 호르몬을 검출하기 위해  - HCG antigen - HCG beta colloidal gold - HCG alpha antibody - Absorbent Pad - Conjugate Pad - Sample Pad - NC Membranes 등의 항원과 항체를 구입하여 실험을 진행하였으나 전혀 검출되지 않습니다.   2. NC Membranes 등의 문제로 사료되어 각 패드와 시약을 종류별로 구입하여 수십가지 조건으로 실험을 진행하였나 검출되지않았습니다.   3. 금입자를 담지한 Conjugate Pad를 기존에 판매중인 임신테스트기에 사용해본결과 정상적으로 검출이 되었습니다.   4. 기성제품의 Conjugate Pad를 실험실에서 제작(조립 및 항체도포)한 NC Membranes에 사용해 본 결과 검출이 되지않았습니다.   저는 NC Membranes이 문제가 있다고 판단하였고 여러 서적을 찾아보았으나 상세하게 실험의 방법과 내용이 포함된 문헌을 찾지 못하였습니다. 대략적으로는 NC Membranes에 항체를 도포하는 방법과 후처리 공정이 존재하는것으로 파악하였으나, 이 또한 정확하게는 파악하지 못하였습니다.   아래는 질문입니다. 1. NC Membranes에 detection항체를 도포하는 특별한 방법이 있나요? (저는 붓으로도 발라보고... 점으로도 찍어보고 스템핑도 해보았으나 결과가 다르지 않았습니다.) 2. 항체 도포후 추가적인 코팅이나 후처리 공정이 있나요? 3. 제 실험에 틀린 부분이 있으면 지적 부탁드리겠습니다. 참고할만한 문헌을 추천해주시면 더욱더 감사드립니다.   긴글 읽어주셔서 감사합니다.   이상입니다.  
회원작성글 송대표  |  02.06
Q. antibody-rat, monkey, chicken
antibody-rat antibody-monkey antibody-chicken 등등  때에 따라 antibody를 다르게 쓰는 건지는 알 것 같으나..... 왜 나눠지며, 어느 때에 어떤 antibody를 써야 하는지,  각각의 특징이 무엇인지... 구글링해봐도 전혀 감을 잡지 못해 이렇게 질문 드리게 되었습니다. 답변 부탁드려요ㅠ
회원작성글 dkaneh  |  02.03
Q. elisa 1차2차항체질문드려요
멍청한 질문일 수 있지만 인터넷에 서칭해도 나오지 않아 질문드립니다..   1차항체와 2차항체는 서로 다른 종에서 추출해야 한다고 알고 있습니다. 같은 종에서는 항체로부터 항체를 만들 수 없기 때문이죠. 1. 2차 항체가 1차 항체에 붙는 것은 2차 항체가 1차 항체를 항원으로 인식해서 붙는 것 인가요? 2. 2차 항체는 왜 처음 바닥에 깐 항원에는 붙지 않는 것 인가요??
회원작성글 딥퍼플  |  01.29
Q. TLR2 or 4 ELISA
안녕하세요. 지금 1년반차 석사생입니다.   제가 PCR을 위한 cell을 저장 못 하고 배양액만 저장했었는데,   TLR2,4를 찍어보고싶은데 대부분 PCR로 찍더라구요, 근데 ELISA kit를 찾아보니 TLR2,4의 kit가 존재하더라구요.   근데 TLR은 receptor인데 어떻게 배양액을 통해 ELISA를 찍었을때 나올 수 있는건지 궁금합니다.   감사합니다.
회원작성글 Crea  |  01.28
Q. 논문 "IL-6-/- mice" 뜻
IL-6-/- mice   가 무슨뜻인가요?   유전자 조작으로 인터류킨-6가 없는 생쥐를 말하는건가요?
회원작성글 혐오  |  01.27
Q. Western blot 또는 IF 실험에 사용하는 1,2차 항체 형태는 IgG, IgG1 상관 없이 사용 가능한가요?
안녕하세요. 석사 과정 중인 대학원생입니다. Human cell로 Western blot과 IF 실험을 진행하려고 하는데, 항체를 사용할 때 다음과 같이 사용하려고 합니다.   <1차 항체> Host : rabbit Species reactivity : Human Antibody form : IgG1 <2차 항체> Host : Goat Species reactivity : Rabbit Antibody form : IgG   위와 같이 사용할 때, antibody form의 경우, 1,2차 항체 둘 다 IgG 또는 IgG1로 통일시켜서 사용해야 하나요? 아니면 상관없이 사용 가능한가요?   답변 부탁드립니다...ㅎㅎ
회원작성글 에피리월드굿  |  01.26
Q. 수지상 세포에 exosome treat 농도와 양에 관해 질문이 있습니다
안녕하세요 저는 석사과정 학생입니다.   이번에 제가 할 실험이 그 동안 모은 exosome sample을 dendritic cell에 처리하여 변화 양상을 보려고 하는 것입니다.   하지만 제가 못 찾은 것일수도 있으나 100개 이상의 수지상 세포와 엑소좀에 관련된 논문을 찾아보았는데도 그 농도에 대한 내용이 보이지 않습니다.   혹시 저와 같은 실험을 해보신 분이 계시다면 어떤 농도와 양으로 어떻게 투여했는지 알려주시거나 혹시나 참고할 논문이 있다면 알려주시면 정말 감사하겠습니다.
회원작성글 실험 왕왕초보  |  01.25
Q. ELISA에 점액을 사용할수 있나요?
보통 ELISA를 사용해서 사이토카인을 찾는경우에, 혈액을 원심분리해서 혈청을 사용하더라고요. 그런데 혈청대신 비강에서 채집한 점액을 사용할수 있나요? 만약 안된다면, 비강점액에서 사이토카인을 정량할수 있는 방법이 ELISA 말고 뭐가 있을까요?   제가 ELISA를 설명서대로 한번 해본게 다라서 잘모르는데, 구글링해봤는데도 안나와서 여쭙니다
회원작성글 혐오  |  01.25
Q. Mouse Liver tissue에서 CD45+ cell중 F4/80+ cell이 FACS 분석시에 몇 % 정도 나오시나요?
안녕하세요, 물론 mouse stain 마다 다르고,   Tissue prep protocol에 따라 다르겠지만, 혹시 mouse liver 실험하시는 분들중에  FACS Analysis 하시는 분들  전체 CD45+ cell 중에서 F4/80+ cell  평균적으로 몇 % 정도 나오시나요?  ㅎㅎ..   
회원작성글 이상을현실로  |  01.25
Q. Co-IP buffer와 lysis buffer
안녕하세요, 공부한지 벌써 1년이 된 석사 2차 입니다!!   지금 co-IP 실험을 한지 꽤 되었지만 제대로 된 결과를 본 적이 없어 buffer에 대해 의구심이 들었습니다.   제가 현재 사용하는 IP buffer의 조성은 50mM Tris HCl pH7.4 15mM Nacl 1mM EDTA 0.1% triton x-100 입니다.   IP를 할 때는 cytoplasm fraction kit를 통해 뽑은 세포질 protien을 사용했습니다. 그러나 브릭에 검색해보니 'fraction으로 뽑은 단백질은 salt를 맞춰야한다', 'SDS는 들어가면 안된다' 등 있었습니다. 그래서 lysis buffer와 IP buffer에 대해 궁금점이 생겼습니다.   1. 제가 사용하는 IP buffer의 조성은 괜찮은가요? 2. 검색해보니 "lysis buffer=IP buffer"로 둘의 의미가 같은것 같은데 protein 뽑을 때 쓰는 RIPA buffer로 IP를 하시나요?? 혹은 IP buffer로 lysis를 하시나요?? 3. 만약 위의 대답이 모두 yes라면 제 IP buffer로 protein을 뽑아도 되나요??     지난 1년동안 선배님들 답변 덕분에 많은 것을 배웠습니다. 항상 감사합니다! 조금 늦었지만 새해 복 많이 받으세요:)!!
회원작성글 신짜오  |  01.20
Q. lentivirus infection
293T로 lentivirus 를 만들어서 (T cell) infection할때, 0.45um 여과 후 진행을 해야하는걸로 알고 있는데요. 만약 (-80oC에 1년 보관 후) filter없이 infection을 진행하면 어떻게 되나요? infection 에는 문제가 없나요? 아니면 방해가 되까요? T cell에 놓은 virus titer를 측정할건데.. co culture 될까요?
회원작성글 I아니  |  01.20
Q. FACS에서 CD25 staining 관련해 여쭤봅니다.
FACS 실험을 진행중에 있습니다. CD25(clone PC 61.5) 를 스테이닝해야하는데, 이 친구가 포르말린 fixation 이후에는 staining 이 잘되지 않는거 같습니다ㅠ  fresh 한 상태에서는 잘되는듯합니다만, fixation 했다가 나중에 다시 염색해서 재분석하고 싶을 때는 안되더라구요ㅠㅠ 혹시 이 부분 해결하신 분들이 계신가요?ㅠㅠ
회원작성글 아이고야  |  01.19
Q. 세포에 바이러스 감염방법
안녕하세요. 바이러스 초짜입니다. 실험실에서 adenovirus(type 2) -> vero cell, infection media: 2% FBS human rotavirus A -> CV-1 cell, infection media: 1㎍/ml trypsin Rhinovirus(type 14) -> mrc-5 cell, infection media: 2% FBS 이렇게 접종하고 있습니다. 10일 넘게 두어도 CPE가 보이지 않아서 질문드립니다. 다른 논문들읽어보니 다들 비슷한 조건에서 감염시키는것같아서요... 혹시 해당 바이러스를 다뤄보셨다면 답변 부탁드립니다.
회원작성글 아웃풋  |  01.18
Q. FACS MFI 값 계산에 대해 궁금한 점이 있습니다.
FACS  분석을 한창 하고 있는 대학원생입니다. 히스토그램으로 표현된 그래프에서 MFI 값을 구해야하는데, BD FACS calibur 를 이용해 통계치를 내보면 Mean, geometric mean, median 값이 나옵니다. MFI 값은 여기서 Mean 값을 의미하는걸까요..? 그리고 구하는 공식이나 다른 수식이 있나요? 구글링을 해봐도 딱 MFI 가 어떤 값이다! 하고 보여주는 글은 못찾겠어서(median 이다 mean 이다 왔다갔다하더라구요ㅠ) 확실하게 알고넘어가려고 질문글을 올려봅니다.  
회원작성글 아이고야  |  01.18
Q. Spleen으로 실험 해보신 분들께 조언을 구합니다.
  안녕하세요. Spleen으로 실험을 진행을 할 때 선배님들께 조언을 구하고자 이렇게 글을 적습니다. 제가 향후 실험에서 Spleen으로 FACS, 조직학 실험, qPCR 등 여러 곳에 사용하려고 합니다. 하나의 조직을 여러 등분을 하여 사용하면 실험에 용이할 것이라 생각하여 서칭을 하였습니다. 그런데 몇몇 FACS 실험에서 whole spleen을 사용했다는 것을 봤었어서 FACS 실험에는 half spleen을 사용하면 안되나 라는 의문이 들어 질문을 드립니다. germinal center가 spleen에서 랜덤하게 생성되기 때문에 half spleen을 쓰더라도 FACS 실험에 충분한 양의 세포만 존재한다면 크게 문제가 되지 않을 것 같다고 생각하는데 선배님들께서는 어떻게 생각하시는지 그리고 half spleen으로 실험을 해보신 경험이 있으신지 궁금합니다. 혹시 FACS 실험을 할 때 반드시 whole spleen을 사용해야 하는건가요? 감사합니다.
회원작성글 지얀  |  01.18
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