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BioLab 정래동 교수
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Q. 암페어와 전기전도도의 값이 음수일 수 있나요? 첨부파일
안녕하세요 최근 action potential을 공부하다 궁금한게 생겼습니다. 전기..에 대해선 문외한이라 잘 아시는 분의 조언을 구합니다. I = electrical current의 amount, g = electrical conductance라 알고 있는데, 제가 밑줄 친 식(ohm's law)에 대해 I와 g는 항상 양수 (또는 0)값만 가질 수 밖에 없는지 궁금합니다. 각각 amount & ability(ease)의 개념이라 음수일 수가 없는건가요? 너무 기초적인 질문일까 부끄럽지만 질문합니다.
회원작성글 코끼리땃쥐  |  08.05
Q. Dialysis buffer 관련 질문드립니다.
Dialysis과정은 처음 해보는 실험이라 모르는게 많습니다..  사용중인 protein이 urea에 용해되어있는데, 이 urea를 다른 buffer로 exchange해주고싶어요. 현재는 총16시간 dialysis를 하고 한번 buffer 교환을 해주는데 어느정도의 buffer와 시간을 얼마나 해야 완전히urea가 다 빠져나오고 buffer change 되는지 잘 모르겠습니다. 계산하는 식이 있는것 같은데 잘 안나오네요.. 혹시 아시는분 계신가요 혹시 관련해서 도움될만한 책이나 자료로 추천해 주실만한게 있나요?
회원작성글 폰지밥  |  08.04
Q. DNA 1kb ladder
현재 바이오팩트 DNA ladder을 사용하고 있습니다. DNA 1kb ladder 5ul 에 6 x loading dye 1ul로 섞어 쓰는 것 아닌가요..? Uv 밑에서 아무것도 안보입니다. 그래서 다른 회사 제품 프로토콜 보고 dna ladder 1ul 6xloading dye 1ul dw 4ul 로 섞어 써도 밴드가 안보여요 ㅠㅠ 제가 아무래도 잘못 알고 있는 것 같은데 어떤 비율로 섞어 써야 할까요?
회원작성글 wowsparrow  |  08.04
Q. Mouse 치아 부정교합 관련 첨부파일
첨부한 사진과 같이 마우스가 부정교합이 있습니다. 이렇게 심하지 않아서 식이 잘 섭취했었는데 지난주부터 갑자기 섭취도 잘 못하고 있고, 4주령부터 8주령 될때까지 주에 3그램 정도 고르게 체중증가 되고 있었는데 8주차와 9주차 비교했을때 갑자기 2.46그램 감소했습니다. 그래서 살펴보니 아랫니가 코옆부분 피부를 뚫을정도로 길어져서ㅠㅠ 많이 아파하고 식이를 잘 못 섭취해서 그런것 같더라구요. 이런경우는 어떻게 해결할수있을까요? 마취하고 손톱자르듯 잘라주고 싶은데 더 아파할까봐ㅠ 경험에서 우러나온 고견 기다리겠습니다.
회원작성글 뽀렙뽀렙  |  08.04
Q. cell density 와 시약의 독성관련문의
96 well plate에 같은 양의 cell을 seeding 하고 농도를 다르게 해서 시약을 처리하였습니다.  plate를 한개는 10,000 cells/well, 다른 한개는 100,000 cells/well로 10배 차이나게 해서 두 plate를 깔고 시약의 처리농도는 각 plate마다 같게 하였고 24시간 처리 후 CCK-8 assay를 하였습니다. 시약의 농도가 높아질 수록 viability가 감소경향을 보이는 것 같기는한데요,  문제는 cell이 10배 높게 seeding 된 plate에서 viability 감소경향이 더 가파릅니다.  10,000 cells per well plate에서는 비처리군과 가장 높은 처리군의 차이가 10%가 안되는데, 100,000 cells per well plate에서는 30% 정도 차이가 날정도로 가파르게 감소합니다.  제가 생각할때는 cell이 10배나 차이가나는데 만약 시약에 독성이 있다고 하더라도 cell이 더 적은 쪽에서 급격한 감소를 보일 것이라고 생각했는데 그반대라 오히려 납득이 안되서요..   이런경우가 가능할지.. 혹시 아신다면 왜 그런지 알려주실 수 있으실까요..  
회원작성글 판돌판돌  |  08.04
Q. Westernblot band 안뜸과 non specific.. 첨부파일
안녕하세요. Westernblot 은 많이 해뵜다고 자신하던 연구자인데... 또 이렇게 벽에 부딫히네요 ㅠㅠ Tubulin 은 너무 선명하게 잘 뜨구요. Ponseau S 시 확인했을때 transfer 나 running 도 문제없다고 생각합니다. 그런데 target 항체에서 band 가 너무 지저분하게 잡히네요.... 5% BSA blocking 1hr RT 진행했고, Ab 도 같은 solution으로 진행했습니다. 2차는 3% BSA 로 1:3000 진행했는데... 2차가 너무 쎗을까요? 다른 연구원이 skimmilk 로 굉장히 데이터가 잘 나왔다고 해서 skim 을 썻는데 오히려 더 지저분 하네요 ㅠㅠ 더 바꿔볼 컨디션이 있을까요? 2차를 약하게 붙히면 깨끗해 질지.... 도와주세요 고수님들 ....😭 그냥 안티바디가 거지같은걸까요....?
회원작성글 써니22  |  08.04
Q. LB배지 만들때 엠피실린 농도가 200ug/ml이여도 괜찮나요?
안녕하세요. 학부연구생입니다. 오늘 클로닝을 하려고 LB배지를 만든 후에 엠피실린을 넣는 과정에서 100ug/ml 넣어야하는데 실수로 200ug/ml을 넣었습니다. 이 배지를 사용해도 괜찮을까요?  LB배지의 총 볼륨은 500ml이었습니다. 엠피실린 stock 농도는 100mg/ml이었습니다.  
회원작성글 망고야얼망고  |  08.04
Q. Skim Milk Agar 제조 관련 질문입니다
Skim Milk Agar 배지를 600ml 만들어야하는데 해당 배지가 없어서 skim milk와 agar 혼합하려합니다. Skim milk 1%와 agar1.5%를 섞어야한다는데 Skim milk는 D.W 1L당 배지100g 기준으로 만든 것을 300ml의 1%인 3ml와 D.W 297g을 다시 혼합해서 사용하는게 맞을까요? Agar는 4.5g + D.W 295.5ml 용액인건 알겠는데 Skim milk가 어렵네요...
회원작성글 실험실애기  |  08.04
Q. RWD사의 Stereotaxic 사용해보신 분 계실까요?
기존에 스털팅 사의 Stereotaxic 을 사용해봤었는데, RWD 라고 중국기업에서 마취기를 비롯해서 stereotaxic 도 나오는 것 같더라고요.   새로 하나 들여야할 것 같은데.. 가격이 좀더 저렴하면 고려해보려고 합니다. 혹시 사용해보신 분들 어떠셨나요? digital meter를 사용해야 해서 혹시 정확도가 좀더 떨어지는 것 같다던지 하는 이슈만 없으면 괜찮을 것 같습니다.
회원작성글 탱탱마루  |  08.04
Q. Ligation 결과 band 해석
1번 3번 5번이 각가 다른 Vector이고 Ligation 시킨 sample이고 2번 4번 6번이 각각 그 Vector를 digestion 시킨 상태의 Vector를 컨트롤로 걸어둔것입니다. 여기서 든 의문이 Control로 잘린 Linear한 Vector DNA를 넣어줬는데 왜 Band가 Ligase 처리한 Vector DNA[Circular form]보다 더 아래에 있는가 궁금해서요.. 혹시  1.Vector DNA + Insert DNA[159bp]의 Size가 당연히 더 크기 때문? 2.Restriction 처리가 한쪽만 일어나서 한쪽 부분의 Vector와 Insert만 붙어서 Ligation이 실패한것 인건가요?
회원작성글 BIOKKKS  |  08.04
Q. vector double digest 질문
안녕하세요. vector를 BamHI, XhoI으로 double digestion하고 있습니다. (vector에 다른 Bam, xho site는 없습니다.) 그런데 RE처리 할 때 Bam,Xho로 한번에 처리하니 extra band가 생기고, 이상해서 1. Bam 2. purify (pcr purification , D.W 40 Elu)  3. Xho  이 순서로 digestion 했습니다. 이때 2번과정 이후 EP를 내려보니 3개의 band가 형성되었는데, 3번 Xho 효소를 처리한 후, 다시 EP를 내려보니 하나의 band만 남은 것으로 확인되었습니다.   결과는 이렇게 나왔습니다.   1. BamHI이  star activity가 있다고 알고 있는데 그래서 enzyme을 너무 과량으로 넣어서 그런건가요?   2. Bam -> purify -> xho 까지 하고 나니 band가 다시 정상적인 size의 band로 나왔는데 이것도 왜그런 것인지 모르겠습니다. 3. 이 sample들 모두 버리고 다시 xho, Bam순서로 진행해야 할까요?
회원작성글 근당근당  |  08.04
Q. p19cl6 Cell 분양 문의드립니다.
안녕하세요, 세포 실험하는 학생입니다. p19cl6 Cells로 실험을 계획하고 있는데 혹시 해당 세포를 분양해주실 분이 계실까요? 만약 있으시다면 쪽지 부탁드리겠습니다ㅠㅠㅜ   감사합니다.   
회원작성글 밍z  |  08.04
Q. sequencing 시 data가 깨끗하게 나오지 않아요
  SARS-CoV-2의 spike protien을 Sanger sequencing을 통해 확인하고 있습니다.    one step RT-PCR kit(HyQ One step RT-PCR kit)를 이용해 cDNA 합성과 PCR까지 한번에 진행하고 있고, 전기영동 상에서 band가 뜨는 것을 확인 후sequencing을 업체에 의뢰하고 있습니다.    그런데 결과를 받아보면 여러개 sample 중 한두개씩 결과가 좋지 않네요ㅜㅜ    아래와 같이 comment를 받았습니다.    실험실에서 확인했을 때는 아래와 같이 band가 명확하게 확인되어 의뢰했는데 왜그럴까요..? (영동 사진의 4,5번이 sequencing 결과가 나오지 않았고, 나머지 sample은 sequencing 결과를 받았습니다.)      각각의 sample은 CT값을 기준으로 비슷한 정도의 것입니다.    10개 정도의 sample에서 한두개가 이렇게 튀니 속상하네요ㅜ   생각해볼 수 있는 원인이 뭐가 있을지 궁금합니다.
회원작성글 타코  |  08.04
Q. Nde1, Hind3제한효소처리 Pet23b 전기영동 관련 질문입니다.
안녕하세요. 대학교 학부 실험생입니다. 다름이 아니라 최근에 전기영동 실험을 하는데 Hind3와 Nde1으로 cut하는 결과값이 계속 잘 안나와서 스트레스를 받아서 질문글을 남깁니다. 사용하는 백터는 Pet23b 이며   insert가 다른 플라스미드 3가지(앞에3개), 뒤에는 하나가 안나왔지만 Hind3와 Nde1으로 double cut한 plasmid 3가지 입니다. 여기서 뭔가 이상하게 나와   Plasmid , Hind3처리, Nde1처리, Hind3+Nde1 처리한 순입니다. 해당사진으로 Nde1이 이상해 cut이 안나는거 같아 Nde1으로 농도만 다르게 한체 실험한 결과  Plasmid, Nde1(1), Nde1(1.5), Nde1(2) 순의 결과가 나왔습니다.()<-괄호 안 숫자는 제한효소 양입니다. Nde1의 띠가 자꾸 이상하게 나오는데 band가 2곳에서 생기는게 아닌거보면 잘리는거같기도하고 의문점이 너무 강하게 듭니다. 질문 1. Hind3가 잘못된게아닌 Nde1이 안잘린게 맞는건가요?? 아니면 둘다 cut되었는데 다른곳에서 잘못되어 결과가 이상하게 나온건가요?? 1-1. Nde1이 컷이 안되었다면 어째서 band가 한곳에서만 나오는건가요?? 2. Nde1과 Hind3를 처리할때 D버퍼에서 활성도차이가 Nde1(75~100), Hind3(10~50)이라 차라리 single cut을 두번하는게 나을까요?? 2-1. Single cut을 두번한다면 에탄올침전법을 이용하여 분리하면 된다는데 해당방법에 대한 설명을 조금더 해주실 수 있을까요? 혼자 연습해보니  유실이 너무 많이되는거 같습니다. 제 지식이 너무좁아 부끄럽지만 질문 글 읽어주셔서 감사합니다.
회원작성글 toret  |  08.04
Q. 곰팡이 배양
여러 조건(빛, 온도, 습도)들이 곰팡이 생장에 어떤 영향을 미치는지에 대해 실험을 계획 중에 있습니다 당초 계획은 빵에 핀 곰팡이를 멸균된 이쑤시개를 통해 PDA배지에 옮겨 PDA배지 전체로 퍼질 때까지의 기간을 측정한 후(대조군), 조건을 설정하여 곰팡이를 배양해 곰팡이가 PDA배지 전체로 퍼질 때까지 걸리는 시간을 측정하여 대조군에서의 기준 시간과 비교하는 것을 계획했었습니다 저희가 이 실험을 진행하면서 생겼던 문제점과 질문을 말씀드리겠습니다 1. 저희는 곰팡이를 멸균된 이쑤시개로 빵을 콕 찌른 다음에 PDA배지에 살짝 문지르는 방법으로 옮겼는데요. 이경우 곰팡이가 도말된 곳에서만 곰팡이가 자랐습니다. 왜 이러한 현상이 생기는지와 이를 보완할 수 있는 방법이 있을까요? 2. 온도와 습도를 조절하여 실험을 진행하고 싶은데, 고등학생이다 보니 많은 실험 기구가 있지 않습니다. 20도 이상 온도 조절이 가능한 인큐베이터 하나 뿐입니다. 온도 변인을 30도, 4도, 영하 20도 (각각 인큐베이터, 냉장고, 냉동고 온도와 비슷하기 때문에)로 계획했었는데요. 각각의 경우에 습도를 일정하게 만들어줄 수 있는 방법을 모르겠습니다. 고가의 습도 조절기를 사용하지 않고 습도를 조절할 수 있는 방법이 있을까요? 3. 일반 빵에도 곰팡이를 옮겨 생장 정도를 측정하려 하는데, 곰팡이를 옮겨도 일반 빵에서 더 이상 생장이 일어나지 않습니다, 이러한 현상이 나타나는 이유와 그 보완책에는 무엇이 있을까요?
회원작성글 정하연  |  08.04
Q. 0.45um syringe filter를 0.2um syringe filter로 대체해서 buffer를 멸균해도 괜찮을까요?
안녕하세요. 실험실에서 일하는 학부생 연구원입니다. 논문을 보고 electroporation에 필요한 버퍼를 만들어서 멸균하려고 하는데요. autoclaving보다 filtration을 권장하는 버퍼가 있어서 고민입니다. 논문에서는 0.45um syringe filter로 filtration을 하라고 하는데, 저희 랩실에는 0.2um syringe filter밖에 없습니다. syringe filter를 하는 이유가 bacteria를 없애기 위한 거라면 0.2um가 더 좋긴 하겠지만, 혹시 0.2um의 filter를 사용했을 때 buffer의 화학조성이 바뀌지는 않는지 궁금합니다. 다음은 제가 0.45um syringe filter 대신 0.2um syringe filter로 filtration 하려는 buffer들입니다. (참고로 ultrasonication 과정은 생략하고 magnetic stirrer로 대체할 것 같습니다.) 1. Glycine (w/v) 3.75g (25ml) Dissolve it in a small amount of DDW by ultrasonication & agitation. → add DDW to 25ml 2. MgCl2 (95.211 g/mol) 38mg and KH2PO4 (136.086 g/mol) 136mg (20ml) dissolved in a small amount of DDW → add DDW to 20ml 구글에 찾아보니 Glycine은 입자크기가 거의 나노미터 단위라 상관없을 것 같은데, MgCl2는 또 500um이라고 하더라고요(이건 물에 안 녹았을 때 이야기 같은데) magnetic stirrer를 오래 돌려서 물에 다 녹이면 화학물질들 사이즈가 딱히 상관이 없을까요?
회원작성글 dndb1303  |  08.04
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