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웹진 Vol.24, No.10 (2022년 10월) 발간
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 카테고리: 전체 > Cell Biology > Cell lysis/Apoptosis
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Q. cell lysis 진행할 때 Elution buffer를 오래 진행하면 안되는지 궁금합니다.
단백질 정제를 할 때, Ni-NTA binding 한 단백질을 정제 컬럼에 넣어 정제한 후, Wash buffer로 충분히 씻어준 뒤에 Elution buffer를 넣고 용출? 침출시키는데 왜 5분 이상 진행하면 왜 안되는 지 궁금합니다...
회원작성글 박용수1  |  2019.03.07
Q. TUNEL assay와 Annexin V assay와의 차이??
원리면에서, 두 어세이의 차이는 무엇인지 궁금합니다.둘 다 apoptosis를 볼 수 있다는 공통점이 있고, 보통 형광으로 확인이 가능하죠.TUNEL은 late phase에 있는 apoptosis를 검출할 수 있고,Annexin V는 early와 late apoptosis 둘 다 동시에 검출할 수 있다는 장점이 있지만 FACS와 같이 고가의 장비가 있어야 한다는 단점이 있죠.혹시 이 두 assay를 다 할 경우의 장점이 무엇이 있는지도 궁금합니다.감사합니다.
회원작성글 대학원생인가노예인가  |  2019.02.22
Q. autophagy 하시는 분들
안녕하세요 대학원 신입생인데요autophagy를 inhibit/activate하는 compound와 관련된 실험을 하는데 GFP-LC3 cell에 inhibitor(bafilomycin), activator(rapamycin)처리를 해주고 있어요.1.nagative control로 DMSO를 사용하는데요 bafilomycin,rapamycin이 DMSO에 녹았기 때문에 DMSO가 negative control이라네요 이게 이해가 잘 안되요 ㅠㅠ 왜 DMSO가 negative control인가요?2.LC3가 형성이 되면 cell에 dot이 관찰되잖아요?? 그럼 DMSO는 어떤 식으로 관찰되어야 하나요? inhibitor activator와 비교했을 때 dot이 적어야 하나요 많아야 하나요?부탁드립니다 도와주세요 ㅠㅠ
회원작성글 xekh13  |  2019.01.25
Q. HaCaT cell UV 조사 질문드립ㄴ디ㅏ
HaCaT cell 에 UV조사를한후에 filaggrin 이나 involucrin 등.. 조사를좀하고싶은데 10-40 mJ / cm^2 사이 많이 하더라구요 그런데  cm^2의미랑 10-40 mJ / cm^2 사이 조사시간을 알고싶은데  얼마나 조사를해야하는지는 찾기가 어렵더라구요 혹시 조사시간은 어떻게정해야하는지도좀 알려주실수있을까요?
회원작성글 구구갸갸  |  2019.01.22
Q. 소핵 실험 flow cytometry 원리 질문 첨부파일
안녕하세요 유세포 분석기로 연구 진행중인 연구원입니다.연구 진행중에 이해 안가는 부분이 있어서 질문드립니다.flow cytometry(유세포 분석) 원리에 대해 잘 아시는 분이 계셨으면 좋겠습니다.Svetlana L et al.(2006)-in vitro micronucleus scoring by flow cytometry: differential staining of micronuclei versus apoptotic and necrotic chromatin enhances assay reliability(사진).위 논문을 참조해서 소핵시험을 진행중에 있습니다.소핵은 세포가 분열하는 과정에서 유전자 변이에 의해 유전자 조각이 작게 떨어져나와서 생성되는 작은 핵을 말하는데, 이로 인해 암 등이 발생할 수 있어서 유전독성의 측정방법으로 사용이 됩니다.구글에서 '소핵'으로 검색해서 이미지를 보면 세포의 핵 옆에 작은 소핵이 관찰되는 이미지를 볼 수 있는데요. 세포를 핵 염색물질로 염색을 시켜서 현미경 관찰을 통해 소핵 생성 여부를 판별할 수 있습니다.이를 유세포분석기를 이용해서 실험을 진행한 논문이 위의 논문입니다.제가 궁금한 부분은!!유세포 분석기는 세포를 한개씩 레이저에 통과 시키면서 형광값을 측정하는 기계로 알고 있습니다. 이 논문을 보면 소핵이 존재하는 세포는 소핵의 형광값이 작기 때문에 형광값이 작게 나오는 걸로 되어 있습니다. 하지만 한개의 세포에 소핵만 존재하는게 아니고 기존 핵이 있는 상태에서 소핵이 존재하기 때문에 오히려 형광값이 조금 더 크거나 거의 차이 없게 나와야 되는거 아닌지 생각됩니다.만약 형광값이 작게 측정이 된다면 한개의 세포를 기본핵 형광값으로 한번, 소핵 형광값으로 한번, 총 두번 측정을 한다는 말 아닌가요??이게 가능한 이야기인지, 원래 그런 원리인지 궁금합니다.제가 이해하기 어렵게 글을 썼다면,carisma-j-h@hanmail.net으로 연락주시면 좀 더 자세한 자료를 통해서 이야기를 나누고 싶습니다. 고수님들의 조언 부탁드립니다.
회원작성글 연금술샤  |  2019.01.11
Q. technical grade가 '공업용'이 맞나요?
시약을 구매하려 찾아보는 중인데,종류가 굉장히 다양하더라구요..그 중에서 technical grade(용액)와 analytical standard(파우더)가 있습니다.이전에 샀었던 건 technical grade인데,이번에는 화학식이 유사하지만 다른 물질을 사려고 보았더니 technical grade가 없었습니다(analytical standard만 있었습니다).보통 시약을 구매하실 때, 위 두 grade에 차이점을 두고 구매를 진행하시는지 여쭤보고 싶습니다.
회원작성글 아이브릭  |  2018.11.05
Q. jc-1 assay 해보신 분 도와주세요
mitochondrial membrane potential assay로 abnova꺼 jc-1을 사서 쓰려고 하는데요아직 실험해보진 않았고 프로토콜만 읽어봤는데 jc-1을 처음에 1:10로 미디어에 dilution해서 쓰는 것 같더라구요 다른 회원분들 글 읽어보니 잘 안녹는다고 하는데 50ml conical tube에 섞어서 vortexing하면 될지...?형광 현미경이랑 plate reader기 이용해서 할 거구요, 프로토콜 중에 plate에 넣은 채로 centrifuge 돌려서 pellet 남기고 석션하는 게 있던데 보통 plate에서 그대로 석션하나요, 아니면 처음부터 e-tube에서 진행하고 centri돌린 후에 최종적으로 찍을 때만 plate로 옮기나요? 그런데 400g로 돌려야돼서 e-tube담는 작은 centri로는 못돌리고 plate 통째로 넣어서 돌리는 큰 centri로 써야 되긴 해요... 해보신 분 조언좀 부탁드려요
회원작성글 망량  |  2018.10.25
Q. 세포 막투과성 비교 좀 도와주세요 ㅠㅠ
glycerol urea formamide methanol ethanol propanol 6개 용액으로 각각 적혈구 용혈 실험을 했는데각각 용액의 막투과성 순서와 차이가 나는 이유가 무었때문인가요??ㅜㅜㅜ 
회원작성글 망유  |  2018.10.24
Q. 세포에 10mM H2O2 treatment했는데 전혀 죽지를 않습니다.
C2C12 cell에 H2O2를 treatment하여 apoptosis를 보려고 합니다.10mM 농도 (1ml DMEM + 0.86ul H2O2, H2O2는 junsei 35%입니다)로 24h treatment 후 harvest하였는데 세포가 안 죽습니다.... control과 비교하여 아무런 차이가 없습니다.유통기한이 지난 것은 아닙니다.원액통은 시약장에서 상온보관이고, 원액을 1ml 정도씩 EP tube에 덜어서 호일로 감싸 종이박스에 실온보관하고 있고요.실험 바로 전 DMEM에 희석하였습니다.뭐가 문제일까요? ㅠㅠ 도와주세요
회원작성글 뷰냐  |  2018.10.12
Q. DAPI 염색에서 cell apoptosis 확인
동물세포 형광염색을 하는데 제가 apoptosis되는? 되고있는? 과정중의 세포를 확인해야합니다.DAPI 염색으로  apoptosis가 확인 가능한가요???
회원작성글 생공생공  |  2018.09.05
Q. DAPI 염색에서 cell apoptosis 확인
동물세포 형광염색을 하는데 제가 apoptosis되는? 되고있는? 과정중의 세포를 확인해야합니다.DAPI 염색으로  apoptosis가 확인 가능한가요???
회원작성글 생공생공  |  2018.09.05
Q. 형광 파장을 optimization한다고 해서 값이 완전히 달라질 수 있나요?
예를들어 1보다 2가 3배이상 증가해야하는 상황인데,실제로 실험해보니 1보다 2의 형광값이 오히려 적게 나왔습니다. excitation/emission값을 조금 조정하다보면 1과 2의 fold차이가 2배, 2.5배.. 이런식으로 좀 간격이 벌어질거라는 이야기는 들어봤는데, 형광값이 1>2인 상태에서 파장을 바꾼다고 1<2 가 될 수 있나요???;;;바꿔도 10nm정도 수정하려나요...
회원작성글 나왜초보  |  2018.08.06
Q. Annexin V 염색 시 질문입니다.
안녕하세요? Apoptosis 관련하여 실험중인 연구원입니다.저는 APC annexin V를 이용하여  FACS와 형광현미경으로 apoptosis를 확인하고 있는데요.여기서 궁금한 것은 다른 염색실험들은 마지막에 back ground를 없애기 위해 wash과정을 거치는데annexin V는 어느 회사 제품을 찾아봐도 마지막에 wash단계가 없어 질문합니다.제 실험의 경우 형광현미경으로 확인하였을 때 negative control에서도 annexin V의 파장이 보입니다.하여 마지막 단계에서 wash를 안해서 그런 것인지 의문 입니다.annexin V는 왜 마지막에 wash 를 하지 않는지 여러 선생님들께서 알려주셨으면 합니다.감사합니다.오늘도 행복한 하루 되세요.^^
회원작성글 young0264  |  2018.07.04
Q. apoptosis assay
안녕하세요..!지금 저는 HCT116(colon cancer cell)에 합성한 chemical compound를 처리한 후 48hr 이후에 annexin V/PI (Abcam)로 staining하여 flow cytometry로 분석하는 실험을 진행하고 있습니다.그런데 합성한 chemical compound이 형광을 가지고 있는데 이 형광이 annecin v에 conjugation되어 있는 FITC와 영역대가 비슷하여 이 둘이 겹치는 형광때문에 실험을 진행하지 못하고 있습니다.compensation을 진행할 때 chemical compound를 처리한 cell들로 apoptosis, necrosis 기준을 잡고 찍으면 될까요?그런데 제가 positive control로 cisplatin을 사용하고 있는데 cisplatin은 형광이 없는 물질이라 cisplatin과 합성한 chemical compound를 따로 compensation을 잡아야 할까요??제가 이런 식의 실험이 처음이라 논문 searching해도 어떤식으로 실험했는지 나와있는것도 별로 없고 너무 어렵네요ㅠㅠ혹시 비슷한 실험을 해보신 분이 계신다면 꼭 도움주시면 감사드리겠습니다..!;)
회원작성글 yeah_zi  |  2018.06.14
Q. Delayed-onset apoptosis 라는 단어가 궁금합니다
안녕하세요 실험관련은 아니지만 질문을 하나 드리고 싶습니다! Apoptosis 관련 논문들을 읽다가 어제 Early / delayed-onset apoptosis 라는 단어를 처음 발견했습니다. 처음 보는 단어들이라 검색을 해보고 있는데, 정의를 딱 내려주는 논문을 찾지 못했습니다ㅠ Early / late stage apoptosis와 동일한 단어 인가요?
회원작성글 nsy0420  |  2018.05.28
Q. 세포 파쇄 온도
안녕하세요? 세포 배양~정제 과정 공부하고 있는 학생입니다. upstream~downstream 공정이 설계된 flow sheet를 보고 있는데 궁금한 게 있어 여쭤봐요 E.coli를 배양한 후 파쇄할 때 4도의 온도 조건이 붙던데, 왜 4도에서 진행하는 건가요? 그리고 homogenization 사용 전 storage tank에서도 4도로 cooling을 하던데 4도에서 보관되어야 필수적인 이유가 있는건가요?
회원작성글 메탄얼음벌레  |  2018.05.26
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