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Q. HPLC 액-액 추출 염석효과
카페인 분석 실험을 진행하는데, HPLC 방법을 이용했습니다. 시료 전처리를 할 때 정제수+카페인+내부 표준 물질이 들어있는 용액에 ether를 녹여 층 분리를 해주었습니다. 그 후, sodium sulfate 1g을 넣어주었는데 염석 효과를 위한 것인지 알겠습니다. 보통 염석 효과에는 NaCl을 넣는데 왜 굳이 Na2SO4를 넣었는지 궁금합니다. 또한 더 많은 양을 넣지 않고 1g만 넣었는지 의문이 들어 질문합니다!
회원작성글 yyy__  |  12.03
Q. 셀 자라는 속도 문의드립니다..
월 : 저녁에 25t-> 75t 하나로 계대 화 : 오후에 30% 찬 것 확인 수 : 저녁에 50% 찬 것 확인 목 : 저녁 8시경 확인했더니 overgrowth, 일단은 계대 진행 금 : 토 : 일 : 사진과 같은 상태 입니다..ㅠㅠ p.1의 b16f10 세포를 분양 받았고 위와 같이 계대를 진행하였습니다. 매일매일 세포 자라는 것을 확인하였고 수요일 저녁에 50% 차서 목요일 저녁쯤 계대하면 되겠거니 생각하고 있었는데 배지가 노랗게 뜨고 overgrowth 된 것 처럼 세포도 붕 뜨더라구요.. 그래도 거의 붙어있어서 그거라도 계대를 했는데 동글동글한 모양으로 본래의 morphology를 잃은 상태로 잘 자라지 못합니다 1. 어떻게 살릴 수 있는 방도가 없을까요? 2. 세포 키우면서 이런 적이 없었는데(계속 b16f10의 동일한 세포만 키워왔음) 갑자기 이렇게 되니 당황스럽습니다.. 보통은 전날 60~70%정도 차도 다음날 저녁에 계대해도 괜찮았거든요. 이렇게 자라는 속도가 갑자기 빨라질 수 있나요? 3. 분양 해주신분 께서 세포 상태가 안좋다고 하셔서 좀 미루다가 그 분께 분양 받은건데, 처음부터 세포 상태가 안좋아서 이렇게 됐을 가능성이 있을까요?
회원작성글 석사과정쥬쥬  |  12.03
Q. westernblot membrane이 왜이럴까요? ㅠㅠㅠㅠ제발도와주세여....
안녕하세요 westernblot 하는데 사진처럼 membrane이 자꾸 어둡게 나와서 뭐가 문제인지 모르겠습니다 ㅠ b-actin은 계속 잘나오는데 나머지Ab들이 자꾸 안나옵니다. 원래 blocking 시간은 1시간, RT 했는데 이번엔 2시간 했고, 1차Ab 농도도 1:1000했는데 1:800으로 늘렸구요, 4도씨 콜드룸에서 O/N했습니다.  워싱은 TBST이용하는데, 짧게 자주 교체해주라고 하시는 분이 계셔서 원래는 10분씩 3회 하는데 8분씩 5회 했고, rpm 도 더 세게 늘렸습니다.  2nd Ab는 원래 1:5000에서 1:10000으로 낮췄습니다. 아, 2nd Ab 하기 전에 re-blocking이 불필요한 detection 없애준다고 해서 10분정도 blocking 했구요. 그러고 나서 8분 5회 워싱 후 LAS 촬영했습니다. 도대체 뭐가 문제인지 모르겠습니다. 심지어.. 이번엔 IL-10이 그 전에는 membrane어둡고 멀티밴드가 나왔는데,  이번에 촬영해보니 군데군데 구멍도 나있고 두번째 membrane에는 그을린 것 같이 일부가 없어져서 나왔더군요... 사진마다 2개의 membrane 중 위의 것끼리는 같은 membrane이고 아래의 것 끼리는 같은 membrane입니다만, 다른 membrane은 다 괜찮은데 IL10은 왜 저런 구멍이 난걸까요 ㅜ membrane 어두운것, 멀티밴드, IL10의 밴드 손상 제발 도와주세요 ㅠㅠㅠㅠㅠㅠㅠㅠㅠㅠㅠ 
회원작성글 dbkorea  |  12.03
Q. PCR 초보 질문입니다ㅠㅠ
PCR을 돌리고 나서 전기영동하고 나면 300bp 또는 500bp에 밴드가 나옵니다 근데 여기서 long pcr밴드를 확인하고자 할때 pcr reaction mix의 람다dna양을 늘리는건가요? 아니면 primer를 더 긴 길이로 바꿔줘야하는건가요?
회원작성글 호로롱슝  |  12.03
Q. adenovirus-36의 감염 기전, 동향 등에 관해서
최근 비만과 관련성있는 바이러스를 발견했습니다. 감염 기전이 어떻게 되는지, 어떤 실험방식을 사용하여 연구가 진행되고 있는지 보고싶은데 알려진게 없네요.. 1. adenovirus-36도 다른 adenovirus처럼 호흡기를 통해서 비말 감염되는 걸까요? 2. 한국 성인 과체중 그룹에서 양성률이 40%로 나타난 걸로 아는데 어떤 방법으로 도출해낸걸까요..? 신뢰성이 있을지 궁금합니다 그리고 관련 자료가 있다면 답변 달아주시면 감사하겠습니다. https://koreascience.kr/article/JAKO200836462219623.pdf
회원작성글 Meningitis..  |  12.03
Q. pcr 밴드보는법?
3번염색체에 위치한 STR마커인 D3S1358 marker를 이용해서 구강상피세포로 PCR진행했는데요.. 결과가 이렇게 나왔는데 1.이때 PCR product의 크기는 약125bp, 130bp, 약170bp, 180bp 이렇게 총 4개 나온거 맞나요?? 대립유전자는 2개라서 2개만 나와야하는거 아닌지,,왜 4개가 나왔는지 아무리 생각해도 모르겠습니다ㅠㅠ   2. 여기서 각 allele의 빈도를 알고싶은데 이때 각 allele라는게 1번에서는 125,127/ 170,180 이렇게 4가지 밴드를 각 allele라고 보는게 맞을까요?(이게맞다면 allele가 4개가 있는건가요>) 아니면 125,127 이거가 한 유전자의 allele이고 170,180이게 또 한유전자의 다른 allele라고 보는게 맞는건가요?
회원작성글 갈색솜뭉치  |  12.02
Q. 농도 계산 방법 (ppm , 몰비)
1. 1:1 몰비로 혼합하여 용액을 제조한다고 하면 결국 그 혼합 용액은 0.5mM이 되는게 맞나요? 이때 용액의 용량은 상관 없나요?   2. 제가 ppm을 계산하고자 하는 용액의 몰질량이 63.5460g/mol 입니다. 이 용액이 0.3mmol/L일때 몇  ppm 인지 구하고자 하여 계산을 해보았습니다. 0.0003mol X 63.5460g/mol = 0.01906g 0.01906g/1000mL X 10^6 = 19.06ppm 이렇게 계산하는 것이 맞나요?
회원작성글 짱이되고싶어여  |  12.02
Q. colony PCR 결과가 궁금합니다
colony PCR 결과입니다. 하나의 plate에서 8개의 콜로니를 따서 PCR진행했습니다. 총 3plate에서 8개씩 총 24개의 결과가 나와있습니다. 순서대로 (1번 8개, 2번 8개, 3번 8개입니다.) 여기서, target size 1번은 875bp, 2번은 906bp, 3번은 921bp가 나와야 합니다. size는 진한 band기준으로 잘 나온 것 같은데, target size 밑에 스미어하게 번지는 부분이 있어서 질문드립니다 ! 2번 lane을 예시로 들면, 진한 band는 size가 맞는 것으로 확인되고, 그 밑에 옅은 band인지, smear하게 번진 것인지 헷갈리는 희미한 부분이 있습니다. 이것이 무엇일까요 ? 제가 생각해봤을때, PCR 할 때 AT값을 56도로 진행했는데, AT값이 맞지 않아 non-specific한 현상이 일어나는 것이라 생각이들어 AT값에 gradient를 주어 AT조건을 변경해 볼 생각입니다. 이런 trouble shooting 말고, 다른 문제일까요 ?
회원작성글 퉤퉤  |  12.02
Q. 골격근 단면적 CSA measure
마우스 골격근 블럭 만들어서 H&E 한 뒤에 CSA를 재고 싶은데요 다른 논문에서 보니까 사진을 찍어서 분석을 의뢰하는 식으로 하던데 비용이 어떻게 되나요? 그리고 제가 직접 할 수있는 소프트 웨어가 있다면 어떤 식으로 할 수 있나요?
회원작성글 별헤는밥  |  12.02
Q. PANC-1, MIA paca-2 차이점
췌장암 관련 논문을 읽고있는데, 이해가 잘 가지 않는 부분이 있어서 여쭤봅니다.... panc-1 : pancreatic ductal adenocarcinoma cell line mia paca-2 : pancreas cancer cell line   흔히 췌장암이라고 하면 췌관선암인 pancreatic ductal cancer이라 panc-1은 알겠는데, mia paca-2 cancer cell line은 그럼 같은 건가요..?
회원작성글 합성인데 생물공부  |  12.02
Q. western blot 시 멤브레인 전체가 흐릿하게 나옵니다..
안녕하세요, western blot 실험을 갓 배워서 이번이 세번째 실험인 초보입니다.. 아래 사진은 맨 처음 실험했을 당시 b-actin에 대한 결과인데, total protein의 농도가 40ug가 되도록 loading해주었습니다. 그런데 밴드가 일정하게 뜨지 않고 진하기가 다 다르게 뜨더라구요. 이 부분은 제가 초보라 정량하는 과정에서 실수가 있었을 수도 있겠구나 생각했습니다. 적어도 이 때는 membrane이 타지도 않았고, reference gene의 expression 정도가 다르게 나타날지언정 background도 뜨지 않아서 정량을 다시 잘 해서 재실험하면 잘 나오지 않을까 막연하게 생각했었습니다. 그런데 2, 3번째 실험을 했을 때는 아래 사진처럼 밴드가 전체적으로 너무 흐릿하게 나오더라구요.. total protein 농도는 똑같이 40ug로 맞춰주었습니다. 넣어주는 protien의 양 자체가 너무 작아서 그런건가 싶어서 찾아보았는데, 다른건 몰라도 b-actin의 경우 보통 50ug 정도면 충분히 잘 나올만한 양이라고 하는것 같아서요..ㅠㅠ 그리고 첫번째 실험했을 때랑 농도도 같은데 왜 이렇게 흐리게 나오는지 모르겠어요. Background도 심한것 같고.. 아 blocking은 3% BSA로 상온에서 한시간 해주었습니다.     제 스스로 조금 걸리는 부분은 Running buffer & transfer buffer를 재사용한 것인데, 제가 실험을 처음 배웠을 때 running buffer와 transfer buffer를 5번까지 재상용한다고 배워서 그렇게 진행했었습니다. 위의 사진은 두 buffer 모두 딱 5번째 재사용한 상태이구요. 그런데 결과가 잘 안나와 찾아보니 buffer를 재사용하지 말라는 말도 많더라구요.. 그리고 1st, 2nd Ab도 재사용하였습니다. 제가 배울때 6개월이 지나지 않은 상황에서는 닳아없어질때까지 써도 된다고 배워서.. 거의 8번정도 재사용한 상황입니다.  그 외에 실험 조건을 적어보면 SDS-PAGE (Running buffer 재사용/5번) - 8% gel - 70V, 0.2A, 300W로 전기영동 15분 (전압 고정) - 100V, 0.2A, 300W로 전기영동 약 한시간 (전압 고정) Transfer (Transfer buffer 재사용/5번) - 얼음 위에서 진행 - 110V, 0.25A, 200W로 2시간 20분 Blocking - 3% BSA로 상온에서 한시간 항체 붙이기& wash - 유리판 위에 membrane 올려두고 1st Ab (1: 1000 희석) 뿌려준 후 먼지 들어가지 않도록 덮어주고 4도에서 overnight - TBST로 5분간 3번 wash - 2차항체 (1:5000 희석) 뿌려준 후 상온에서 한시간 rocking - TBST로 10분간 3번 wash   ECL solution A, B 1:1로 섞어준 후 뿌려주고, 킴텍으로 충분히 제거 후 필름으로 덮어주고 케미닥 찍음   중간중간 조금 생략한 과정도 있지만 대략적으로 이렇게 진행하였습니다. 긴 글 읽어주셔서 감사하고, 많은 지도 부탁드립니다.ㅠㅠ 감사합니다!
회원작성글 천행  |  12.02
Q. Triton X-100 원리
Triton X-100이 세포막의 인지질을 녹일때 일어나는 작용과 반응이 궁금합니다! 상세히 설명해주시면 감사하겠습니다.ㅠ
회원작성글 shu  |  12.02
Q. 가교결합 구조를 선형구조로 만드는 조건
안녕하세요, 고분자의 구조에 대해 궁금증이 생겨 여쭈어 봅니다. crosslinking 가교결합 구조는 고분자 사슬 간 공유결합이 존재하여 폴리머를 단단하게 만들고 내열성을 지니게 하며 linear 선형 구조는 사슬이 유연하여 열을 가했을 때 잘 녹는 성질을 지닌다고 배웠습니다. 저의 지식으로는,, 열경화성 플라스틱처럼 가교결합 구조를 가지는 물질은 높은 온도에서 사슬이 그냥 파괴되어 버린다고만 알고 있는데요,  이러한 가교결합 구조를 선형구조로 바꿀 수 있는 조건에는 어떤 것이 있는지 궁금합니다! (사실 제 관심분야가 친환경 폴리머 소재 연구입니다. 재활용 할때 보통 열을 가해서 녹이는 경우가 많다고 하는데, 이게 가능해지려면 crosslinking을 linear로 바꿀 수 있어야 한다고 생각했습니다.. 이 방법 외에도 다른 친환경 고분자의 구조에는 어떤 것이 있는지요? 답변 주시면 정말 감사하겠습니다:) )    
회원작성글 ataraxia  |  12.02
Q. Real time PCR 기초 질문 입니다.
안녕하세요. Real time PCR을 막 배우게 된 초보 연구원입니다. 다름이 아니라 housekeeping gene은 모든 세포에서 일정하게 발현되는 유전자로 알고 있는데요. 제가 실험에 사용한 gene이 actin-B이거든요. 근데 Ct 값이 28 부근에서 떠서요. 원래는 어느 Ct 값에서 뜨는게 정상인지에 대해 여쭤보고 싶습니다.
회원작성글 medi92  |  12.02
Q. pdx 한계극복방법
환자의 암을 누드마우스에 이식해서 그 종양을 키운 후 다양한 항암제를 투여하면서 효능 확인을 하는때 이때 누드마우스에 이식된 암은 마우스에 적응하는데 환자의 암과 같다고 볼 수 있나요? 아니라면 이 방법을 해결할 수 있는 방법이 있을까요?
회원작성글 duqdlghksd..  |  12.02
Q. 토끼 마취 질문입니다.
항혈청을 얻기 위해 토끼 마취를 진행하려고 합니다. 약 3~4kg의 토끼를 마취하여 심장채혈 할 예정인데 찾아보니 졸레틸 or 케타민과 럼푼을 섞어서 많이 사용하시더라고요. 그 중 졸레틸은 성체 토끼의 경우 마취하는데 있어 적합하지 않다는 말이 있어 케타민을 사용하려고 합니다. 근데 아무리 찾아봐도 용법과 mix 비율을 찾을 수가 없어서 어떻게 사용해야할지 잘 모르겠습니다. 용법을 보더라도 이걸 얼마나 써야하는건지 주변에 알려줄 수 있는 분이 계시지 않아 오로지 혼자 찾아서 이해하고 진행해야하는데 찾더라도 맞게 이해한건지 잘 모르겠네요. 이전 랩에서는 주로 mouse만 써봐서 ether만 사용하다가 이번에 처음으로 주사마취제를 사용하게 되어서 너무 아는 것이 없습니다. 경험있으신 분들의 도움이 절실합니다. 부탁드리겠습니다.
회원작성글 흑묘단단  |  12.02
Q. Fungi cloning...
안녕하세요   현재 fungi cloning을 진행하려고 하는 대학원생입니다..   혹시 fungi cloning protocol있으신 분 있을까요..?   제발 공유 부탁드립니다..ㅠㅠ
회원작성글 으리으링  |  12.02
Q. 혈액 또는 조직에서 추출한 DNA 및 RNA로 할수있는 QI 활동 주제 팁 좀 주세요
혈액 또는 조직에서 추출한 DNA 및 RNA로 할수있는 자원관리에 대한 QI 활동 주제 팁 좀 주세요 인체자원을 수집하는데 평가활동으로 QI 활동을 해야합니다 근데 웬만한 주제는 이미 활동이 진행되어서 주제를 정하는게 쉽지않아서 여쭤보려고합니다 생각나시는 주제있다면 부탁드려요~
회원작성글 뿌압뿌양빠앙  |  12.02
Q. 마우스 background를 PCR로 간단히 확인 가능한가요?
안녕하세요. 저희 연구실에서 C57BL6과 129라인을 키우고 있는데, 최근 실험결과들을 미루어 볼 때 마우스 라인이 오염되었을 가능성을 생각하고 있습니다. 그래서 마우스 background를 확인하는 방법들을 찾아보니 Jackson lab에서 SNP를 이용하여 확인해 주는 서비스를 제공해 주더라구요. 그런데, 다른 선배들 말을 들어보니 해당 마우스 backgound를 대표하는 PCR primer를 이용하여 PCR을 돌려보면 간단히 확인가능하다는 얘기를 들었습니다. 혹시 이와 관련하여 좀 더 자세히 아시는 분이 계실까요?? 저는 C57과 129 마우스 라인에 대해 PCR을 해보고 싶은데, 어떤 프라이머를 사용해야 하는지 잘 모르겠습니다 ㅜㅜ
회원작성글 대학원생인가노예인가  |  12.02
Q. CRISPR Cas9 RNA seq
CRISPR Cas9 을 해서 gene editing을 하였고 exon2번 바로앞의 intron에 point mutation을 일으켜서  splicing vasient를 기대하고  RNA seq 한 결과를 가지고 varient matching을 하였는데 하나도 splicing varient가 detec이 되지 않는다고 합니다. 그런데, RNA seq할 때 3' primer를 쓰면 PCR이 무너져서 그럴 수도 있는지 discussion을 부탁드립니다.    
회원작성글 새슬  |  12.02
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