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Q. macrophage migration assay 관련 질문이 있습니다.
안녕하세요 석사과정 대학원생입니다.    migration assay (boyden chamer assay - Fluorometric) 관련 조건 실험을 진행하려고 합니다.    NRK52E (rat epithelial cell)에 chemokine 유발 물질을 처리한 medium 과 U937 (human monocyte cell)으로 chemotaxis 실험이 가능 할까요??        
회원작성글 Flb  |  02.06
Q. Agarose 전기영동할때 sample이 퍼집니다.
DNA 전기영동하려고 Agarose gel에 로딩하려고 하는데 sample이 가라앉지 않고 TAE buffer안에서 퍼져서 확산됩니다. PCR product는 아니고 mRNA 합성한것 내려본 것입니다. 샘플이 날라가버렸는데 어떤 컨디션이 안맞는걸까요?
회원작성글 nuco  |  02.06
Q. qPCR 전기영동 band dimer 질문입니다.
평소 실험을 할 때 dimer가 50bp 근처에서 생겨났는데  이번 실험에서는 한참 아래쪽에 band가 생겨서요 이게 dimer라고 하기에는 size가 너무 작아서 질문 드립니다.     목표 product는 70bp정도이고 DNA ladder는 50bp 사용했습니다
회원작성글 안일한녹조식물  |  02.06
Q. 프라이머 ng/ul pmol 농도 계산 변환
안녕하세요 실험실에서 공부 중인 학생입니다 vector sequencing 주문하려고 보니 제가 받은 프라이머의 농도가 100ng/ul 로만 적혀있더라구요 시퀀싱 회사에서는 농도 정보를 꼭 Pmol로 넣어줘야 하는 걸로 되어있어서 구글링을 해보았는데 DNA에서 ng/ul to Pmol 변환에는 분자량이 필요한 것 같더라구요 그런데 저는 이름과 위의 농도를 제외하고는 시퀀스도 분자량도 어떠한 정보도 가지고 있지 않습니다ㅠㅠ   이런 경우에는 농도 계산할 수 없는 걸까요? 혹시 방법을 아신다면 도움 주시면 감사하겠습니다
회원작성글 tami  |  02.06
Q. 전기영동할 때 DNA marker가 삐뚤삐뚤하게 내려와요
안녕하세요! 전기영동할 때 DNA marker (ladder)관련해서 질문드립니다. 맨 왼쪽은 100bp짜리 ladder이고 dye가 포함되어있는거라 2ul 로딩하였고 두번째 lane은 1kb짜리이고 dye가 포함되어있지 않은거라 6X loading dye와 비율 맞추어 섞은 뒤 2ul 로딩하였습니다. 100V로 한시간 running하였는데 100bp짜리는 가지런하게 내려오는데 1kb짜리는 왜 저렇게 사선으로 내려올까요?ㅠㅠ 해결방법 아시는분~! ㅠㅠ 젤은 0.8% agarose입니다!
회원작성글 jeongjjang..  |  02.06
Q. bioinformatics antismash 결과 관련 질문드립니다. 첨부파일
사진의 결과를 보면 100% 부터 25%까지 similarity가 다른 것을 알 수 있는데, 이 전부가 나온다는 결과인건지, 아니면 없는 것도 있는건지, 어떤 방식으로 구분하는건지 궁금합니다.
회원작성글 가별  |  02.06
Q. HPLC 우유 내 당 분석 전처리 방법
기기 : Agilent Technologies 1260 컬럼 : Aminex HPX-87H (7.8 x 300 mm) 이동상 : 0.005M H2SO4 검출기 : RI (G7162A) HPLC-RI를 이용하여 당류 관련 분석을 하고 있습니다. 몇 가지 질문드립니다. 1. 모유올리고당 중 하나인 2'-fucosyllactose(이하 2'-FL) 파우더를 water에 녹인 후 농도별로 분석하여 Calibration curve를 그리려고 하는데, 상기 표에 해당하는 2'-FL 파우더를 스탠다드로 하여 캘리 커브를 그려도 무방할까요? 2. 시판 우유에 2'-FL 스탠다드 용액을 스파이킹하여 회수율을 알아보고자 합니다. 이 때, 우유를 어떤 방식으로 전처리(단백질, 지방 제거 등)하고 분석해야 하는지 알고 싶습니다. 식품공전시험법에는 글루코스와 같은 단당류나 기타 올리고당 등에 대한 방법만 있어서 어떤 조건을 따라야 할지 감이 잘 오지 않습니다.
회원작성글 nounou  |  02.06
Q. RNA-sequencing 분석에서 qPCR 검정을 안 하는 경우도 있습니까?
qPCR 검정 결과 없이 순수하게 RNA seqeuncing 결과로만 논문이 작성된 경우가 있습니까? 그런 논문이 있으면 어떻게 구성되었는지 한번 보고 싶군요.
회원작성글 옹잉잉  |  02.06
Q. Autoclave 질문이에요ㅠ
안녕하세요 Autoclave에 대해서 궁금한점이 있어서 질문남겨요   체임버가 어느 부분일까요..? 
회원작성글 새싹포숌  |  02.06
Q. PCR mixture 제조관련 질문
안녕하세요 궁금한 점이 생겨 이렇게 글을 올립니다.  현재 g사의 PCR KIT를 사용하고 있으며, mixture제조시  buffer, dNTP, DW로만 혼합하여, 분주하여 사용합니다.  제가 궁금한 점은 DW의 경우 Make up을 위해 첨가하는 것이기도하고, DNA의 농도가 각 각 다르기 때문에 Mixture의 분주량이 달라지는데 이럴 경우 buffer, dNTP의 양이 제대로 들어가는지 의문이기에 여쭤봅니다.  물론 사용하기 전에 피펫팅이며, 볼텍싱이며 제대로 섞어주려고 신경은 써줍니다.    
회원작성글 해조칼슘풍덩  |  02.06
Q. Serum 구분
Horse Serum을 구입하려고 하는데요 Donor가 적어져 있는 serum과 안 적어진 serum의 차이는 무엇일까요? 그리고 custom serum도 있던데 혹시 어떤건지 알려주실 수 있을까요?   도와주세요!
회원작성글 BIOHIII  |  02.06
Q. 써모GC 사용중입니다만 Amount 값은 무엇을 의미하는건가요?
GC사용중에 내부물질(EG)을 분석하는데Rel.Area값과 Amount값이 나오는데. Amount 값으로 데이터를 사용했는데요 Amount 값은 각각 내부물질 함량으로 봐도 될까요?
회원작성글 궁금이입니다.  |  02.06
Q. Streptavidin (conjugate용) 국내 제조업체 문의
안녕하세요.  현재 streptavidin conjugate 실험을 하고 있습니다. streptavidin 1g 이상 한번에 구매를 하고 싶은데요. 혹시 국내 제조업체가 있을까요? 문의 드립니다. 
회원작성글 전사  |  02.06
Q. CFU assay 질문: liver로 translocation한 대장균 확인을 위한 실험
  안녕하세요, intestinal barrier관련하여 박테리아의 liver translocation을 확인하고자 CFU를 진행하였습니다. liver 0.15g 또는 kidney 1개를 통째로 1XPBS base 0.05% NP-40, 1%BSA solution 2ml에 갈았습니다. 이때는 dounce tissue grinder 를 사용하였습니다. (A,B pestle을 모두 사용)   이후 희석하지 않은 원액 100ul을 포함하여 serial dillution한 용액을 100ul씩 LB plate에 도말하였는데  12시간 정도 지나 확인하였을때 원액을 도말한 plate에서 조차 colony가 확인되지 않았습니다.   여러가지 trouble shooting을 해보려 논문도 찾아보고 이것저것 검색해보았는데 도저히 잘못된 점이 무엇인지 알기가 힘들어 이렇게 조언구하고자 질문드려봅니다.   대장균의 translocation을 확인하기 위함이라 LB plate를 사용한 것에는 문제가 없어보입니다. buffer역시 NP-40의 농도차이는 있어도 여러 논문에서 해당 buffer를 사용하는 것을 확인했습니다. 직접 연구실의 DH5a를 해당 buffer에 1/10 희석하여 도말해보아도 잘 자라는것을 확인 했습니다. buffer와 LB plate모두 아래 논문을 참고하였던 것입니다.  https://doi.org/10.1016/j.immuni.2018.12.020 dounce grinder를 사용하였을때 B pestle의 유격이 너무 좁아 bacteria가 죽었을까 생각도 했었는데, bacteria크기는 고작 2um이하이고, B pestle의 유격은 20um이라 문제 없을것 같습니다.   위의 논문의 figure7을 보면 정상 WT mouse에서도 CFU가 어느정도 측정되는것을 확인할 수 있는데, 저는 대조군과 실험군 모두에서 단 하나의 colony도 관찰할 수 없었어서... 조언 주시면 정말 감사하겠습니다. 긴글 읽어주셔서 감사드리며 좋은 한주 되세요
회원작성글 아이이이잉  |  02.06
Q. 희석 계산 질문이 있어서 질문드립니다.
저희가 가지고 있는 시약은  0.25mg 의 NAD 입니다. (Molecular Weight는 663.43 입니다) 1M NAD 를 만들려고 하는데, 어떻게 계산을 해야 하나요? 
회원작성글 Illl!Ill  |  02.06
Q. 콜라겐 코팅한 hepg2 세포의 morphology가 괜찮은 건가요? 첨부파일
안녕하세요, 저번에 hpeg2 세포가 정전기적 표면처리된 T25 Flask에서 잘 부착되지 않고 뭉치는 문제로 이 게시판에 질문을 남겼었습니다.   그래서 이번에 0.1 mg/ml 농도로 콜라겐을 T25 Flask에 코팅한 후에 세포를 thawing해 보았는데요, 괜찮은 건가요? 비교 사진을 첨부하였습니다. 참고로 사용한 미디어는  MEM 90% + 10 % FBS+ 1% P/S 입니다. 제가 보기에는 콜라겐 코팅 Flask에서 더 잘 부착되어 보이는데... 다른 분들이 보시기에는 어떠신가요 ㅜㅜ?  
회원작성글 cheer up c..  |  02.06
Q. Raw cell passage
안녕하세요 저는 Raw cell을 이용해서 실험을 하고 있는 학생입니다. 다름이 아니라 p10 정도 되는 cell을 stock으로 만들었는데 이 stock을 다시 풀면 p10에서부터 카운트 해야 할까요? 아니면 p1에서 다시 시작하는건가요? 만약 p1부터 시작하는거라면 cell이 n2 tank에서 회복을 하는 것인지 궁금합니다 또한 passage 관리하는 방법도 알려주시면 감사드리겠습니다!
회원작성글 감귤서리범  |  02.06
Q. cloning 과정 ampicilin plate
ligation 후 E.coli competent cell 에 transformation을 진행 후 ampicilin plate에서 키운 후 overnight 된 뒤 plate를 확인해보면 콜로니가 골고루 plate에 뜨는게 아니라 가운데 콜로니 하나에 주변에 콜로니가 모여서 뜨는 현상이 나타납니다. 냄새도 오염된거 같은 냄새가 나고요. competent cell이 문제인가 싶어 바꾸서 진행해도 똑같은 현상이 일어나서 질문드립니다. 제가 ligation 시 vector와 insert의 농도를 잘못 계산하여 진행해서 이런 현상이 발생하는것인지, 아니면 실험과정에서 오염이 발생해서 이러한 현상이 나타나는것인지 궁금해서 여쭤봅니다
회원작성글 분자생물학도  |  02.06
Q. PCR primer design 도전 중 고난과 역경..
안녕하세요 최근 PCR을 세팅하고있는 피린이 입니다. 현재 apoptosis 관련된 마커들을 몇가지 확인하고자 primer design을 진행 중 입니다. 여기서 한 가지 궁금한 점이 생겨서 이렇게 질문드리게 되었습니다.  보통 Primer를 짜기 전에 보고자하는 유전자서열을 전체 긁어온뒤 프라이머를 짜고있습니다. 조금 더 구체적으로는 NCBI, UCSC 에서 해당 유전자를 검색하고 타겟 유전자를 불러와 유전자멥을 그려놓습니다. 프라이머를 20-24 mer 정도의 크기로 Tm 값이나 GC%, target gene size 등 확인하며 디자인 진행 중에 있었습니다. 여기서 궁금한 점은 다음과 같습니다. 1) target gene만 인식하는지는 어떤식으로 평가를 하시나요? 2) cleaved form 의 유전자들을 어떻게 디자인을 해야할까요..?? 유전자를 검색해도 cleaved ~~~ 이렇게 검색하면 따로 검색이 되지 않아서 위의 방식으로 디자인을 진행하지 못하고 있습니다..ㅎㅎ.... 여기저기 검색해가며 찾아보려하는데 이렇다할 해답을 얻지 못했습니다ㅠㅠ 물론 다른 논문들을 찾아보면서 해당 primer의 sequence를 얻을 수는 있었습니다만, 저는 제가 직접 짜는 방법을 알고있는 것이 더 좋을거라 생각이 들어 이렇게 질문드립니다.  염치없지만 PCR 고수님들은 보통 어떻게 찾으시는지 도움을 부탁드리겠습니다!!
회원작성글 대하권생  |  02.05
Q. stem cell seeding 부착문제 or Cell death
안녕하세요 석사과정 2년차 대학원생 입니다ㅠㅠ 지금 3일째 hESC(human stem cell)을 풀었다가 다시 시도하는 것을  반복중입니다.... -80도 deepfreezer에 2017년도에 얼린 cell을 matrigel coating된 well에 풀었습니다.  근데 hESC들이 부착되지 않고 대부분 single colony가 되어  둥둥 떠다닙니다...  부착이 되지 않은 것인지, cell들이 다 죽어서 떠다니는 것인지ㅠㅠ 3일동안 너무 스트레스 받네요ㅠㅠㅠ   stem cell에 대해서 잘 아시는 분 계실까요?
회원작성글 약대석사응애  |  02.05
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