이번에 회사에 취직해서 처음으로 실험세팅을 하게되었습니다. 석사 기간 동안 실험 세팅을 처음부터 끝까지 한번도 해본적이 없어서  어떻게 해야되는지 자세히 알고자 질문 올리게되었습니다.   제가 생각하는 세팅은 1.Reference 논문의 실험 방법 참고 2.Reference 논문의 실험이 재현이 되는지 확인 3.Reference논문 참고하여 회사 프로토콜 정립 4.실험 조건(마우스 연령, 성별, strain, 실험 횟수 등) 정립 5.실험 라고 생각하는데   혹시 제가 잘못 생각하고있는것인지, 그렇다면 추가해야 될 부분있으면 답변부탁드립니다!!   도와주세요 ㅠㅠ 하..

궁금한 것이 2가지가 있습니다.  혹 둘중 하나라도 아시는 분이 있으시면 답변 부탁드립니다.    1. Naive와 Sham에 대한 용어 차이인데, cancer cell line을 injection 하여 만든 xenograft model 일 경우에, naive는 그냥 cell 을 injection하지 않은 말 그대로 naive한 WT (normal) 마우스고, Sham은 xenograft model그룹이 맞나요?? (거기서 나중에 그루핑하여 vehicle과 약물처리군으로 나눠지기 전에)  즉, CDX model에서 vehicle이나 아무것도 넣지 않은 그루핑 전의 마우스는 sham이 맞나요? naive가 맞나요? 둘도 아니면 그냥 (negative) control....이 되나요??    2. cell culture시, 예를 들어 175T flask에서 media 30mL에 1x10^6 cells씩 똑같은 조건으로 split하여 subculture를 한다고 했을 때, 그것이 5일만에 자란다고 하면, 여기서 달라지는 조건이 media의 양인데 media를 30 mL로 해서 할때 5일 자라면 만약, 더 많은 60 mL에 cell split을 하게되면 4일만에 다 자란다거나 하는 더 빨라지나요??? (추가로, 30 mL로 했을때 2~3일마다 media를 교체하고, 5일간 media를 교체하지 못할 경우 60 mL media에 sub를 했을때 cell 성장 속도에 이론적으로 차이가 나나요??) 

안녕하세요 저는 카이스트 박사과정중인 학생입니다. 제가 종양에 physiology를 실시간으로 확인하는 센서를 만들었는데 마우스 종양모델 실험을 할 방법을 찾지 못해 문의드립니다 저희는 기계과 실험실이라 동물실험이 불가능하고 동물실험 가능한 실험실과 협업하고 싶습니다. 종양의 종류는 cancer cell이면 모두 괜찮고 마우스/rat종류는 상관없으나 마우스정도면 충분합니다 종양의 크기는 2mm 내외이면 좋을것같은데 논의가능합니다. 개체수 n은 3이상이면 통계적으로 충분한데 사실 n=1이라도 실험이 필요하네요,, 동물실험 협업은 다들 어떻게 시작하게 되시는지.. 기계과에서 실험해보려니 어렵네요,, 도움과 조언 주시면 감사하겠습니다. 혹시 실험이 가능하신 곳이 있으면 댓글이나 메일 ssvvkk@kaist.ac.kr 주시면 열심히 준비해서 최소한의 마우스를 통해 실험 하려고 합니다 감사합니다

안녕하세요. 대장암 마우스 모델로 동물 실험 중에 있습니다. 대장암은 AOM/DSS를 급여하여 유도를 했습니다.   부검 후 암 판정을 할때, 종양이 몇개고 부피가 어떻게 된다 말고, 이 마우스가 암이 유도 됐냐 아니냐 판단할 수 있는 기준이 있나 여쭙습니다. 다른 레퍼런스를 참고했을 때, tumor 관련 지표들은 조직병리학적이나 단백질 분석 등으로 확인하는 거 같은데 확실하게 암인지 아닌지 확답한 논문도 잘 안나오고, 이게 원래 확언할수 있는게 아닌가 궁금합니다. 많은 의견 부탁드리겠습니다:)

폐동맥 고혈압 관련하여 in vivo 실험을 할때 우심실 수축기 혈압 (RVSP), 또는 폐동맥 혈압(PAP)이  반드시 들어가는 데이터인 것으로 알고 있는데요  측정 방법이 1. 정맥 통해서 심장으로 들어가도록 센서 있는 카테터 삽입 2. 심초음파 이용  3. 센서달린 카테터 혹은 니들을 우심실에 직접 삽입 이 3가지 방법 중에 하나인 것으로 알고는 있는데  어딜가도 자세한 방법이나 영상이 없어서요 ㅠㅠ 혹시 측정해보신 분 있으실까요?   

동물시험 논문 디자인이 잘 이해가 안되서 질문 드려요.. 해당 논문의 실험군은 시험물질을 15일간 섭취하다가 질병을 유발하고 추가로 1, 3일을 더 섭취 했구요, 대조군은 시험물질을 15일간 섭취하고 질병을 유발하지 않고 1, 3일을 더 섭취했습니다. 바이오마커는 면역관련 사이토카인이구요.. 이 논문에서는 왜 실험군 대조군 모두 시험물질을 섭취하는 디자인으로 만든건지 이유가 궁금합니다. 예방 효과?를 보려고 한 걸까요? 제가 그동안 봐온 논문은 시험물질을 먹거나 안먹거나로 실험군, 대조군을 나누는 것만 봤는데 해당 논문의 의미를 잘 모르겠습니다. 추가로 이 논문과 동일하게 수행되었으면서 동일한 사람이 쓴 선행논문이 있습니다. 그 논문은 시험군에 질병유발하고 1,3,5,7,15일을 면역지표를 보았고, 대조군은 아무것도 안하고 1,3,5,7,15일을 면역지표를 보았습니다. 이렇게 따로따로 논문을 내면 두 논문사이에 통계처리가 안되서 두 논문을 비교하는게 무슨 의미가 있을지 약간 의아합니다.  후행논문에서 선행논문과 비교하여 봤을때 시험물질의 섭취는 면역을 조절한다고 언급하더라구요. 이렇게 비교할 거였으면 왜 한 논문에 싣지않고 따로따로 출간한 걸까요...(?)   제가 질문드린 논문은 International Journal of Molecular Science에 발간되었고 선행논문은 Journal of Clinical Medicine에 발간되었습니다.  논문 수 늘리려고? 일까요?   아시는분 답변 부탁드려요....

안녕하세요. 제가 계산문제만 나오면 머리가 정지가 되서 정말 간절히 질문을 드립니다. 답변 달아주시면 참고하여 열심히 공부 하겠습니다. 질문 내용은 제가 마우스 6마리에 물질을 투여를 할 건데요. 마우스 한마리당 20g입니다. 물질은 500ul 씩 투여를 할건데, 투여 물질은 Mixture로써 농도를 VEGF-A 100ng/ml, 특정물질 33nmol/20g이 되게 투여를 하려고 합니다 (Working 농도) 6마리에 500ul씩 투여하려고 6*500ul (3ml)을 여유분으로 4ml로 total volume을 만들려고 하는데요. 현재 제가 가진 VEGF-A의 Stocking 농도는 (100ug/ml), 특정물질 (1mM)입니다. Mixture 4ml을 만들기 위해서 DW에 VEGF-A (100ug/ml), 특정물질 (1mM)을 얼마나씩 넣어야 VEGF-A 100ng/ml, 특정물질 33nmol이 되는지 꼭 좀 답변 해주시면 감사드리겠습니다. 농도희석 계산식은 Working 농도/Stocking 농도 x total volume하면 stocking 물질을 얼마나 넣어야 하는지로 알고 있는데요. 계산 적용이 잘 안될 정도로 기초가 없습니다... 꼭 좀 도와주시면 감사드리겠습니다...

심근경색 모델을 만들어야하는데 레퍼런스나 방법을 아시는 분 있으시면 공유좀 부탁드립니다. 감사합니다. 

안녕하세요   연구 중에 knock-out mice가 필요하게 되어서 주문을 하려고 하는데, 이 분야를 처음 다루다보니 아무 정보가 없어서 혹시 선생님들 알고계시는 업체나 주문 방법을 알 수 있을까 해서 질문등록합니다.   감사합니다.

Mouse testis 조직을 paraffin block으로 제작하려고 하는데 저희 실험실에는 장비가 없어서 업체에 의뢰를 하기로 하였습니다. 업체에 문의해보니 4%PFA에 고정상태로 업체로 보내달라고 하셨는데요. 제가 paraffin block 제작 자체가 처음이라서요. 아예 과정을 모릅니다. 조직을 적출하면 washing을 하고 4% PFA solution에 24시간정도 넣어두고 이후에 업체로 보내면되는건가요? 아님 중간에 무슨 과정이 필요한가요? washing은 어떤 시약으로 하며 4% PFA solution에 24시간을 두고 보내면 배송과정동안 시간이 지나는데 24시간 이상 4% PFA solution에 조직을 넣어나도 아무 상관이 없는건가요? 제가 아무것도 몰라서 여기에 이렇게 질물하게 되었습니다. 답변해주시면 감사하겠습니다 ㅜㅜ

안녕하세요.  Mouse의 순환교배에 대해 알아보고 있습니다. 순환교배에 대해 자세히 나오지 않아 질문 올립니다. 혹시 순환교배에 대해 자세히 알고 계신 분이 있으실까요? (Random 교배에 대해서 같이 설명 부탁드립니다. 감사합니다.)

flox-cre 시스템으로 tissue specific mouse를 만들었는데 실험할 때 WT이랑 해도 되는거 아닌가요? 같은 실험실에 다른 분이 Flox(Homo) mouse를 control로 사용해야한다고 하시는데 어차피 penotype은 같을텐데 싶어서요

안녕하세요. 마우스에 특정 물질을 투여하고 독성 평가를 하기 위해 준비중인 학생입니다. 독성평가를 할때 주로 간, 신장을 보는 걸로 알고 있는데, 간, 신장 이외에 비장, 심장, 폐에도 염증관련 독성 평가를 H&E staining을 통하여 보고자 하거든요. 지금 말씀 드린 장기들이 독성평가와 연관성 있는 장기인가요?

안녕하세요. 마우스 실험을 하다가 특정 약물을 주사 후에 장기에서 독성평가를 하려고 계획 중에 있는 학위과정 학생입니다. 독성평가를 위해 간, 신장, 비장을 적출하여 포르말린에 고정 후에 H&E staining을 진행하여 조직을 관찰하려고 하고 있고요. 궁금한건 장기를 적출해서 lysis를 하여 유전자를 뽑아 낼 수 있는 방법이 있나요? 방법이 있다면 독성평가를 위해 자주보시는 유전자들이 어떤게 있는지, 제가 생각하기로는 면역, 염증 관련 유전자를 마커로 설정하고 장기에서 DNA를 추출하여 Real time PCR을 진행하거나 Western blot을 진행 할 수 있는지 질문을 드립니다. 내용이 어수선 해 보일수도 있는데 정리가 안된점 양해 부탁드립니다.

안녕하세요. Heparin을 희석하려고 하는데 이해가 잘 가지 않아서 질문드립니다. 사용하려는 Heparin은 H6279-25KU , 25000UNITS (Sigma 제품) 입니다. 논문에서 보면 20UNITS으로 희석하여 사용한다고 하는데요. 해당 제품이 파우더다 보니까 PBS로 희석하여 사용하는 줄 알고 있는데요. 25000UNITS을 20UNITS으로 희석하기 위한 Volume을 어떻게 해야하는지 잘 몰라서 질문을 드립니다. 25000UNITS 몇 g을 취해서 PBS 1ml에 녹여 20UNITS을 만드는지 방법 좀 알려주시면 감사드리겠습니다.

안녕하세요. Heparin 희석을 하려고 하다가 확인 받고 싶어서 질문을 드립니다. 구매하려는 Heparin이 25000unit (파우더) 인데요. 100U/ml로 1ml을 만들기 위해서 몇 g을 넣어서 녹여야 하는지 알고 싶습니다... 산수 문제인데 이런 질문 드려 죄송합니다...