안녕하세요, intestinal barrier관련하여 박테리아의 liver translocation을 확인하고자 CFU를 진행하였습니다. liver 0.15g 또는 kidney 1개를 통째로 1XPBS base 0.05% NP-40, 1%BSA solution 2ml에 갈았습니다. 이때는 dounce tissue grinder 를 사용하였습니다. (A,B pestle을 모두 사용)   이후 희석하지 않은 원액 100ul을 포함하여 serial dillution한 용액을 100ul씩 LB plate에 도말하였는데  12시간 정도 지나 확인하였을때 원액을 도말한 plate에서 조차 colony가 확인되지 않았습니다.   여러가지 trouble shooting을 해보려 논문도 찾아보고 이것저것 검색해보았는데 도저히 잘못된 점이 무엇인지 알기가 힘들어 이렇게 조언구하고자 질문드려봅니다.   대장균의 translocation을 확인하기 위함이라 LB plate를 사용한 것에는 문제가 없어보입니다. buffer역시 NP-40의 농도차이는 있어도 여러 논문에서 해당 buffer를 사용하는 것을 확인했습니다. 직접 연구실의 DH5a를 해당 buffer에 1/10 희석하여 도말해보아도 잘 자라는것을 확인 했습니다. buffer와 LB plate모두 아래 논문을 참고하였던 것입니다.  https://doi.org/10.1016/j.immuni.2018.12.020 dounce grinder를 사용하였을때 B pestle의 유격이 너무 좁아 bacteria가 죽었을까 생각도 했었는데, bacteria크기는 고작 2um이하이고, B pestle의 유격은 20um이라 문제 없을것 같습니다.   위의 논문의 figure7을 보면 정상 WT mouse에서도 CFU가 어느정도 측정되는것을 확인할 수 있는데, 저는 대조군과 실험군 모두에서 단 하나의 colony도 관찰할 수 없었어서... 조언 주시면 정말 감사하겠습니다. 긴글 읽어주셔서 감사드리며 좋은 한주 되세요

제가 푸른곰팡이를 배양하려 하는데 귤껍질이나 상한 음식에서 푸른곰팡이가 자라나면 포자를 루프로 때어내서 바로 배지에다가 접종시기면 될까요..?

안녕하세요. 개미 표면에 상주하는 박테리아 종류가 뭐가 있는지 알아볼려고 하는데요. 당면한 문제가 2가지 있습니다. metagenomics는 비용 문제로 쓰지 못하므로 관련 내용 언급은 삼가주세요.   1. 개미 표면에서 어떻게 혼합균주를 떼어낼 수 있을까요? 개미를 핀셋으로 잡아가지고 그대로 배지에 문지를 수도 없고 말입니다. 2. 1.을 해결하기 위해 한 가지 방법을 생각해 봤는데요, 다음과 같습니다. 희석한 생리식염수나 3차 증류수를 살짝 묻힌 멸균 면봉으로 개미 표면을 닦아낸 후, 그 면봉 끝을 액체배지에 담갔다가, 그 액체배지를 3일 후 다시 고체배지 위에 도말한다   인데... 뭔가 이래도 되나 싶기도 한 방법이라.... 이렇게 해도 될까요?  그리고 1. 질문도 답변 부탁드립니다.

TLC관련 질문 드립니다. 왼쪽은 쿠마린 이라는 스탠다드 물질의 농도를 잡기 위해 실험한것으로 0.2,0.02,0.002g/ml입니다. 오른쪽은 양쪽이 스탠다드이고 중간에 세개의 spot은 곰팡이의 배양액입니다. 배양액이다 보니 탄소원이 들어있어서 파란색으로 나온것인지 아니면 아예 다른물질들이 들어있어서 파란색으로 나온것인지는 잘 모르겠으나 실험 결과 상 쿠마린 스탠다드와 동일한 위치에 밴드가 없는 것으로 보아 이 배양 액에 쿠마린이 없는 것으로 판단해야 될지 모르겠습니다. 추가적으로 배양액 sample들이 전개 되지 않은것이 이동상이 잘못되어서 인지 아니면 sample에서 많은 물질들이 추출되어서 인지 잘 모르겠습니다.

Gluconacetobacter xylinus 를 키우고 있는데, 논문들을 찾아서 여러가지 배지조성으로 키워봐도 OD값이 전혀 안올라가고 있습니다. Cellulose 를 생성하는 균주라 접종 후 7일정도 되면 배양액 위로 두꺼운 막 형태의 cellulose gel 이 형성되는 것이 관찰되고 agar 배지에 도말해봐도 colony 가 나타나는 것으로 보아 균이 자라기는 하는 것 같은데, 논문들에서는 배양 시 균체 증식에 따라 OD 값이 증가한다고 되어 있는데 동일한 형태로 자라지 않아 pilot scale 진행을 못하고 있습니다. 배지조성이 문제인지, 다른 문제가 있을지 조언 부탁 드립니다.

오버나잇한 컬쳐를 50ml에 od=1.8당 1ml 희석하라고 하셨는데 od값이 1.6 나왔습니다 그럼 0.8ml 접종을 하면 되는게 맞는지.. 여쭤봅니다. 오디값이 더 낮게 나왔으니 더 많이 접종해야 할 것 같은데 계산을 잘 못하겠네요 ㅜ 실험이제 처음 시작한학부생입니다 ㅜ

두 곰팡이를 co-culture 한 배양액중에 tannic acid가 생성되었는지 확인하기 위한 목적으로 TLC실험을 진행하였습니다. 우선 tannic acid의 분자량은 1,701.19g/mol입니다. 아세톤으로 추출을 진행하였으며 농축한뒤 첫번째 이동상(CH3 Cl: ethyl acetate: formic acid=5:4:1)으로 tlc를 내려보았더니 거의 전개가 되지 않은것을 볼수있었다.그래서 이동상을 바꾸어 보았다.                             두번째 이동상은 에틸 아세테이트: 포름산: 아세톤: DW= 100: 11: 11: 27를 이용하였으며 그 결과 이전보다는 전개가 되었지만 실리카겔의 위쪽까지 전개되지는 않았다. 맨 왼쪽은 dw에 희석한 standard tannic acid이고 맨 오른쪽은 acetone에 희석한 tannic acid 이다. 질문사항은 1. 두개의 standard 중 어떤 용매에 희석한 standard가 더 적합한지?  2.sample이 전개되지 않은 이유가 이동상이 적합하지 않아서 인지, 분자량이 커서 인지 아니면 제가 따로 정제 과정을 거치지 않았기 때문인지 궁금합니다. 3.스탠다드와 샘플이 다른 속도로 전개된 이유에 대해서도 궁금합니다 4. 스탠다드의 농도 설정을 어떻게 해야될지  궁금합니다.

안녕하세요. 농도에 따른 물질 혼합물을 만들려고 하는데요. 각 물질을 혼합하면 농도가 달라질거 같아서 계산을 하려는데 이해가 잘 안가서 질문을 드리게되었습니다. 혼합하려는 물질 stock 농도가  VEGF-A (100ug/ml) 특정 물질 (80nmol 동결건조 상태 -> PBS 80ul를 추가하여 80nmol/80ul로 만들어서 1mM) 제가 Mixture를 4ml 만들기 위해 VEGF-A와 특정물질을 특정 농도가 되게 만들려고하는데요. 4ml을 만들기 위해 DW에 VEGF-A는 100ng/ml농도가 되게, 특정물질은 33nmol이 되게 DW에 혼합을 할건데 각각 얼마나 넣어야 하는지 계산을 잘 못해서 질문을 드립니다... 꼭 좀 도와주시면 감사드리겠습니다. 

유전자 분석 맡기기에는 가치가 조금 떨어지는 것 같아 먼저 여쭤봅니다. 하루만에 이렇게 자라는 균은 거의 바실러스균으로 보여지는데요. YPG배지에 Cycloheximide를 적당량 첨가하여 항생배지를 만들었는데 하루만에 바로 저런 형태의 균이 자라네요. 동그란 형태는 바실러스로 추정되는데, 실타래는 궁금해서 여쭤봅니다.  

현재 저희 실험실 deep freezer에 캠필로박터 stock이 있어서 이걸로 배양하려고 하는데요 실험 하기전에 동정 맡겨보려고 합니다  제가 궁금한 것은 식품공전을 보니까 modified campy blood free 한천 배지, abeta-hunt blood 한천배지, preston 한천배지 등등에서 분리배양한다고 되어있는데 NA배지에 배양하면 안되나요..?  NA 배지가 대부분의 미생물 배양할 때 사용한다고 하는데 캠필로박터는 호염성이고 미호기성세균이라 좀 까다로워서 안될지 궁금해서 여쭤봅니다  

ATCC에서 Staphylococcus aureus를 분양받아 계대 하려고 합니다.   1. 1차스톡(마스터스톡) 만들 시 균 수를 몇 승 정도 하는게 좋은가요? 2. 배양액과 글리세롤은 1:1 비율로 하는게 좋은가요? 아니면 8:2가 좋은가요?  

안녕하세요 제가 소독액성능시험을 해야하는데 균 컨트롤이 잘 안돼서요ㅠㅠ 혹시 소독액성능시험하시는 분들 중에 시험균주 어떻게 만들어서 사용하시나요? ㅠㅠ 저는 tsb 2ml에 균주 넣고 배양한다음에 생균수 얼만지 계산하고 다음날 그 균주로 희석해서 사용하는데 원하는 범위로 컨트롤이 잘 안돼서요ㅠㅠ

YM agar에서 아래와 같은 형태의 균이 자랐는데 아래와 같은 형태의 균 이름을 알고 계시는 분이 있을까요...?   현미경 검경 결과도 첨부합니다.

안녕하세요. 미생물 쪽은 처음인지라 질문 올립니다.   미생물 (박테리아) 용해물을 만들어서 샘플삼아 실험하고싶은데, 논문을 찾아보니 대부분 액체배지에 배양된 박테리아를 centrifuge를 돌려 상층액을 filter 한 후 동결건조하여 사용한다고 되어있더라구요. 저는 직접 채취한 시료에서 분리 동정하여 얻은 미생물을 샘플로 사용하고싶은데, 저런 방식으로 용해물을 얻으면 될까요??   답변 부탁드립니다.

안녕하세요. 실험하면서 주입평판법(희석법) 을 진행했는데, 첨부한 사진을 보면 세가지 형태의 황포균이 확인되었습니다.   이론상으로는 배지 속에서 자란 균과 배지 표면에서 자란 균 두가지 타입으로 균이 자란다고 알고있는데,   제가 두번 반복해서 실험을 했는데 세가지 타입으로 균이 자라더라구요. 배지 속에서 자라는 균을 제외하고 넓게 퍼지면서 자란 균과 균을 중심으로 하얗고 투명하게 조금 번져서 자란 균 두가지 타입은 어떻게 이해하면 될까요? 질문드립니다.. 감사합니다!

의약품 미생물 한도시험중인 대학원생입니다. 한도시험 결과 오염이 많이되어 원인 규명을 하고자 하는데, 생균수 시험과 특정미생물 시험 시 오염 인자들을 최대한 줄여보고자 멸균에 한계가 있는 오토 파이펫 대신 멸균 일회용 눈금 스포이드를 사용해 검액 1mL, 0.1mL씩 채취하여도 되는 건지 궁금해서 질문 남깁니다. (생균수는 한천평판혼합법을 이용합니다.) 생균수 시험같은 경우에는 정량시험이라(오차범위때문에,,, 스포이드의 오차범위는 2% 이내입니다.) 안될 것 같고, 특정미생물 시험시는 가능할 것 같아 여쭤봅니다,,,,

안녕하세요! C.glutamicum으로 실험 진행중입니다! 그러나 몇 개월째 cp cell 및 transformation이 제대로 되지않아서 조언을 얻어보고자 질문 남깁니다.. ㅠㅠ Competent cell 및 transformation 프로토콜이 있다면 공유해주시면 감사하겠습니다 ㅜㅜ.. 실패 원인에 대해 여러가지 생각해보고 모두 반영하여 시행해봤지만 아직도 지지부진 하네요 ㅠ..ㅠ 그래서 다른 분의 프로토콜과 비교해보고 진행해보고 싶습니다 Transformation이 되지않아서 실험이 전혀 진행이 되질 않습니다 .. 실험이 전혀 되질 않아서 저의 적성에 맞지않는건가 싶기까지합니다 ,, 잘 아시는 분이 계시다면 한번만 도와주세요 ! ㅠㅠ Corynebacterium glutamicum C.glutamicum Cp cell competent cell transformation plasmid vector protocol

A 용액을 증류수를 이용하여 500배 희석하고자 한다면, A용액:증류수 = 1:499 비율로 넣는 게 맞을까요...?    그렇다면 각각 얼마씩 넣어야 30mL의 부피로 제조 가능할까요ㅜㅜ

Humic acid가 들어간 배지를 만드는데, UV-C에 구조가 깨지나요? Humic acid가 UV에 깨지면 말릴 떄 UV로 못 말려서, 고민 중입니다!

소독액 성능시험에서 정해진 균수(1.5~5.0x10^8/ 6.0x10^~3.0x10^3) 로 희석하려고 하는데 희석 방법이 헷갈려서요! 예를 들어서 9.0x10^9짜리 균 2ml을 가지고 3.0x10^9를 만들려면 균주 1ml에 희석액 2ml을 넣어야 하는건가요?