안녕하세요.    이번에 virus 감염 실험을 처음 해보게 되었는데요.  ATCC에서 virus를 분양받아서 실험을 하게 되었는데 protocol에는 0.01MOI로 계산해서 감염시키라고 적혀있습니다. 그런데 제공받은 virus titer에는 8.9 x 104 TCID50/mL in 8 days on cells at 37°C with 5% CO2. 이렇게 나와있는데요.  그럼 이게 TCID 50 값인 건가요? 이걸 이용해서 MOI를 계산할 수 있을까요?  MOI는 탁도니까, 탁도계를 이용해서 0.01 맞춘 다음에 감염시키면 된다고 하시는데 그게 맞는건가요?

안녕하세요. 이번에 처음으로 low melting agarose를 이용한 virus plaque assay를 진행했는데요. CMC media를 사용하면 media를 흡입하여 제거하면 끝이지만 agarose는 물리적 충격을 주어서 떨어뜨려야 한다고 배웠습니다. 실제로 진행하니 잘 안되더라구요. formaldehyde로 fixing 한 후에 2hr을 두고, 제거하려다보니 잘 안되어서 suction기로 끝부분을 살짝 띄워서 제거하는 방식으로 진행하였습니다. 혹시 잘 떨어뜨리는 노하우를 가지고 계신분 도와주실 수 있으신가요? 그리고 CMC media보다 agarose를 사용했을 때 plaque 형성 기간이 길어지는 것 같은데 맞는지도 궁금합니다.

안녕하세요. Influenza, herpes 등..여러 바이러스로 plaque assay를 진행중입니다. 마지막 단계에서 agar overlay후에 배양하고 며칠 지나면 agar에 세균이 자랍니다ㅜㅜㅜㅜㅜ agar는 당연히 오토클레이브 돌렸구요... agar랑 같이 섞어주는 배지는 필터링 하였습니다. 고정하고 염색해보아도 agar에 난 오염으로 cell이 죽는건지.... plaque는 잘 보이지도 않습니다..ㅡㅜㅜㅜㅜㅜㅜㅜ 혹시 오염나지않게 AA를 첨가했는데 농도를 더 올리면 될런지요..

이런 식으로 gel running을 할 때 계속해서 휨 현상이 관찰됩니다.. 제가 할 때만 그래서 기계 잘못은 아닌 것 같고, 다른 분께서 만들어주신 gel을 이용해도 휨 현상이 발생해서 gel 만드는 법이 잘못되었을 것 같지는 않습니다. 무엇이 문제일까요..

제 바이러스가 cell에서 역가는 4.0*104TCID50정도이고 qPCR상의 역가는 4.0*108copies/ml 일 정도로 copy값은 높지만 감염력이 낮아요,, host에 감염됐을 경우에 폐사율은 높긴한데 이렇게 감염력이 낮은 바이러스의 경우 선생님들께서는 어떤것이 중요하다고 생각하시나여?? 감염된 세포 gene발현?이나 그런것들..? ㅠㅠ..  

안녕하세요. 바이러스를 처음 접하게 된 학생입니다. MOI 계산이 생소하여 질문드립니다. cell count했을 때 2.25*10^6cells/ml이 나왔습니다. 5MOI로 계산하면 11.25*10^6 virus/ml이 나오는데, virus stock이 2*10^9 virus/ml이므로 11.25*10^6 virus/ml로 만들어주면 된다고 생각했습니다.  177.77배가 희석해주면 되는것이니까 총 20ml에 0.112ml=112ul를 넣어주면 된다고 생각했는데, 45ul가 정답이었습니다. total cell 기준으로 생각해야하는건가요?헷갈려서 질문드립니다.  

MDCK cell로  influenza를 plaque assay나 TCID50 test를 할 때 TPCK-treated trypsin을 첨가하는 이유가 궁금합니다. protease로서 a-2, 3 또는 a-2, 6와 결합된 HA1을 끊어준다고 하는데,, 이게 감염에 도움이 된다는데 어째서 그런것인지 궁금합니다.

안녕하세요 protein 합성을 위한 여러 모델 중 sf9 등 insect cell과 이를 감염시키는 recombinant AcMNPV baculovirus를 이용하는 시스템을 사용하고자 합니다. 그런데 다른 baculovirus들의 연구는 biosafety level 2가 필요하다고 하는데 AcMNPV는 biosafety level 1에서도 연구가 가능하다고 하는 보고가 있습니다. 혹시 이 시스템으로 단백질을 추출해 보신 분(혹은 가까이서 보신 분)이 계시다면 AcMNPV를 이용한 단백질 합성이 biosafety level 1에서도 가능한지 알려주신다면 감사하겠습니다.

바이러스가 RNA,DNA바이러스로 구분되는 걸로 알고 있습니다 처음 보는 바이러스가 RNA바이러스인지, DNA바이러스인지 어떻게 확인하나요,,?  아무리 찾아도 안 나와요ㅠㅠ

EO 가스 멸균법에 대해 조사한 후 실험을 진행 하려고 하는데 가스 상태 또는 분무 상태로 분무하여 멸균 한다고 나와 있는데, EO 가스 멸균법은 가스 상태로 멸균 하는거 아닌가요 ? 분무라는게 가스보다는 무거운 느낌의 에어로졸인데 그렇다면 가스 상태와 분무 상태일 때 사용하는 상황이 다른가요 ? 다르다면 어떤 경우에 다른가요 ?

  포름알데히드 농도 8%, 10분에서는 폴리오바이러스만 불활성화 시키나요 ? 아니면 다른 바이러스도 불활성화 시키나요 ? 불활성화 시킨다면 종류는 무엇이 있나요 ? 아무리 찾아봐도 정보가 없어 문의 드립니다 !

안녕하세요 virus의 genome에 modification한 후에 pcDNA에 클로닝해서 Mammalian cell에 transfection하여 recombinant virus를 만드는 실험을 하고 있습니다.   기존에 HEK293T와 HeLa에서 모두 바이러스가 잘 나왔었는데요 몇 달 전부터 HeLa에서만 바이러스가 만들어지는데 HEK293T에서는 transfection이 잘 되지 않는 현상이 나타나고 있습니다.   transfection할 때 사용하는 lipofectamine과 DNA의 양은 조건이 잘 잡혀있는 상태입니다. HeLa에서는 정상적으로 transfection이 되기 때문에 plasmid의 문제는 아닐 것이라고 예상하고 있습니다. 혹시 제가 사용하고 있는 HEK293T cell에 문제가 생겼을 가능성이 있나요? overgrowth가 된다거나 했을 때, transfection이 잘 되지 않게 cell line이 변화하는 경우가 있나요?? 다른 연구실에서 HEK293T를 새로 받아서 실험해볼 계획입니다.   미리 감사드립니다!  

구리의 향균력에 대한 실험이 이미 진행되었다는 것은 알고 있는데 엘리베이터에 붙어있는 것은 구리 이온 향균 필름 입니다! 구리 이온 향균력에 대한 실험을 진행할 수 있을까요..? 만약 가능하다면 어떤 준비물이 필요한지 알려주세요 ㅠㅠ

MS2 bacteriophage 보관 관련해서 질문드립니다. 제가 전공이 아닌데다가 실험 메뉴얼만 받고 실험을 진행하다 보니 보관에 문제가 있는 것 같습니다. 전에 E.coli를 배양했을 땐  (TSB 액체배지에 균을 24h 배양 후 1ml 채취하여 마이크로튜브에 넣은 후 냉동) 이렇게 보관을 했었습니다. 그래서 MS2 phage도 TSB에 E.coli와 MS2 혼합 후 24h 배양한 것을 똑같은 방식으로 채취하여 보관하였는데요 동결건조되어 있던 MS2로 바이러스 실험을 진행했을 땐 바이러스가 확인이 되었는데, 저렇게 보관한 샘플로 실험 진행하였더니 바이러스가 확인되지 않습니다. 혹시 보관방법에 문제가 있는 걸까요?

비전공자라 원인을 모르겠어서 질문드립니다ㅠㅠ MS2 phage (숙주 E.coli 사용) 배양하였는데, 첫번째 사진만 배양에 성공하고 이후 배양이 안되기 시작하더니 이번엔 아무 흔적도 없이 배지만 뿌옇게 됐습니다. 원인이 뭔지 알 수 있을까요??실험에서 실수한 부분이 뭔지 모르겠습니다.. 최대한 메뉴얼 보고 했는데도 계속 실패하네요 답변부탁드립니다 감사합니다

안녕하세요 현재 library 제작하여 phage display 실험 진행 중인데 round 별 sequencing 진행 시 pIII gene이 deletion된 phage가 있어 왜 이런 현상이 발생하는지 원인을 찾고자 질문 올립니다. 제가 알기론 pIII가 있어야 cell에 infection이 되는 것으로 알고 있는데 pIII gene이 없으면서 어떻게 infection되어 colony가 뜬 건지 모르겠습니다. phage infection 후 plate에 speading하여 키울 때 cell 내에서 gene이 deletion 되었을 가능성이 있을까요? 또한 pIII gene 말고 insert도 일부 deletion 또는 통째로 deletion되는 경우도 많이 발생하고 있는데 이런 non-specific한 phage를 제거할 수 있는 실험적인 방법에 대해 아신다면 답변 부탁드립니다. 사용 중인 phage는 M13이고 TG1 cell에 infection하고 있습니다.

plaque assay시 Overlay media가 정확히 뭘까요?... 구글링을 해도 잘 뜨지 않아서 고수님들의 의견을 듣고자 합니다 그리고 Overlay media 관련된 논문이 있을까요?

SARS-CoV-2 바이러스 배양액   구매해서 진단 실험에 이용하려 하는데  전부 국외 수입밖에 없어서 기간에 엄청 차질이 있습니다.    혹시 국내에선 Culture Fluid로 구매하는거 빠른곳 있을까요?? 아직 초보라서 이런일에 숙달되지 못합니다 ㅠㅠ     

인플루엔자 Plaque assay시 사용하는 tpck-trypsin은 어디다 녹이나요?   Reference를 찾아보아도, 농도는 적혀있으나 처음 reconstitution하는 방법에 대해서는 설명이 되어 있지 않네요.   thermo 제품 datasheet에도 적혀있지 않아 문의 드립니다.   도와주세요.

바이러스를 원래 -70도씨에 보관하는데 3일동안 -20도씨에 보관해버렸어요,, 문제가 생겼을까요?