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 카테고리: 전체 > Microbiology > Virus
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Q. PFU 측정 double layer agar 방법에서 top agar 상태가 이상합니다. 조언부탁드립니다.
안녕하세요. 이제 갓 바이러스를 시작한 연구자입니다. 박테리오파지 MS2를 이용하는 본 실험에 들어가기 전 연습삼아 titer 측정을 하고 있는데 처음 titer 측정법을 배우며 실험했을때는 soft agar가 매끄럽게 굳고 plaque 형성도 잘 되었는데, 몇 주 후에 다시 배운 방법 그대로 연습을 시작하니 첨부한 사진처럼 soft agar 층이 매끄럽게 형성되지도 않고, control에서 plaque가 형성되지도 않고 soft agar 자체가 오돌토돌하거나 덩어리진 느낌이 있습니다. 처음엔 실수가 있었겠지 하고 다시 해봤는데 두 번째에도 이러니 답답하네요..  저희 랩에서는 LB (2.5g/100mL) + agar (1.3g/100mL)로 soft agar를 만들고 시험관에 나눠 50도 워터배스에 보관하다 사용하고 있습니다. 제가 생각하기에는 처음 배울때보다 몇 주가 지난 상태라 실내 온도가 많이 떨어져 있어 soft agar를 나눠 시험관에 분주할때나 워터배스에서 꺼낼 때 금방 식어버려 눈에는 멀쩡해보이지만 꺼내는 순간 이미 응고가 진행되고 있어 뭉치는건가 싶은데.. 제생각일 뿐이고ㅠㅠ 경험많으신 분들의 조언 부탁드립니다. 아 그리고 혹시 soft agar가 엉성하게 굳어도 plaque는 잘 생기나요..? 그렇다면 파지와 호스트 cell의 상태도 확인해야할 것 같습니다.  감사합니다.
회원작성글 Eer  |  11.16
Q. bacteriophage plaque assay에서..
top agar로 tryptone soft agar를 사용하려고 하는데요, water 1L+tryptone 10g+KCl 5ml+agar 9g에서 KCl을 대체할만한게 없을까요?? 아니면 다른 composition이 있다면 알려주시면 감사하겠습니다ㅜㅜ TSA Media를 사용합니다.
회원작성글 바박이  |  11.11
Q. seaplaque agarose와 비슷한 제품이 있을까요?
Plaque assay용으로 Lonza의 seaplaque agarose를 사용합니다. 이 제품을 다시 사려하니 한 달이 걸린데서 다른 제품을 주문하려고  다른 promega제품이나 seakem? 제품도 찾아봤는데 대부분 전기영동이나 다른 실험용이더라구요 그냥 쓸까 싶다가도 Gel strength가 다르니 좀 찝찝하기도 하구요 Lonza거랑 비슷한 low melting 제품 추천 해주실 수 있을까요?  
회원작성글 밈스  |  11.02
Q. human papillomavirus (hpv) 바이러스 효능 실험하는 대학이나 업체 있을가요?
회사측에서 HPV 를 가지고 항바이러스 효능실험을 의뢰 (용역의뢰)하고싶은데, 마땅히 할 곳을 국내에서 못찾겠네요. 대학이든 기업체든 상관 없으니 HPV나 HPV pseudovirus를 이용해서 항바이러스 효능 실험 진행이  가능할 곳 없을까요? 
회원작성글 ldk6407  |  09.28
Q. TCID50, MOI virus titer 측정
안녕하세요.    이번에 virus 감염 실험을 처음 해보게 되었는데요.  ATCC에서 virus를 분양받아서 실험을 하게 되었는데 protocol에는 0.01MOI로 계산해서 감염시키라고 적혀있습니다. 그런데 제공받은 virus titer에는 8.9 x 104 TCID50/mL in 8 days on cells at 37°C with 5% CO2. 이렇게 나와있는데요.  그럼 이게 TCID 50 값인 건가요? 이걸 이용해서 MOI를 계산할 수 있을까요?  MOI는 탁도니까, 탁도계를 이용해서 0.01 맞춘 다음에 감염시키면 된다고 하시는데 그게 맞는건가요?
회원작성글 0315  |  08.30
Q. Virus plaque assay agarose 제거
안녕하세요. 이번에 처음으로 low melting agarose를 이용한 virus plaque assay를 진행했는데요. CMC media를 사용하면 media를 흡입하여 제거하면 끝이지만 agarose는 물리적 충격을 주어서 떨어뜨려야 한다고 배웠습니다. 실제로 진행하니 잘 안되더라구요. formaldehyde로 fixing 한 후에 2hr을 두고, 제거하려다보니 잘 안되어서 suction기로 끝부분을 살짝 띄워서 제거하는 방식으로 진행하였습니다. 혹시 잘 떨어뜨리는 노하우를 가지고 계신분 도와주실 수 있으신가요? 그리고 CMC media보다 agarose를 사용했을 때 plaque 형성 기간이 길어지는 것 같은데 맞는지도 궁금합니다.
회원작성글 rlaeheod  |  08.15
Q. plaque assay 진행중 agar 오염
안녕하세요. Influenza, herpes 등..여러 바이러스로 plaque assay를 진행중입니다. 마지막 단계에서 agar overlay후에 배양하고 며칠 지나면 agar에 세균이 자랍니다ㅜㅜㅜㅜㅜ agar는 당연히 오토클레이브 돌렸구요... agar랑 같이 섞어주는 배지는 필터링 하였습니다. 고정하고 염색해보아도 agar에 난 오염으로 cell이 죽는건지.... plaque는 잘 보이지도 않습니다..ㅡㅜㅜㅜㅜㅜㅜㅜ 혹시 오염나지않게 AA를 첨가했는데 농도를 더 올리면 될런지요..
회원작성글 꼬리빗  |  08.11
Q. Gel running 시 밴드 휨 첨부파일
이런 식으로 gel running을 할 때 계속해서 휨 현상이 관찰됩니다.. 제가 할 때만 그래서 기계 잘못은 아닌 것 같고, 다른 분께서 만들어주신 gel을 이용해도 휨 현상이 발생해서 gel 만드는 법이 잘못되었을 것 같지는 않습니다. 무엇이 문제일까요..
회원작성글 학부연구생  |  07.09
Q. 감염력 낮은 바이러스 키우고있는데,,
제 바이러스가 cell에서 역가는 4.0*104TCID50정도이고 qPCR상의 역가는 4.0*108copies/ml 일 정도로 copy값은 높지만 감염력이 낮아요,, host에 감염됐을 경우에 폐사율은 높긴한데 이렇게 감염력이 낮은 바이러스의 경우 선생님들께서는 어떤것이 중요하다고 생각하시나여?? 감염된 세포 gene발현?이나 그런것들..? ㅠㅠ..  
회원작성글 파란바나나  |  07.04
Q. MOI 계산할 때 total cell기준으로 계산하는건가요?
안녕하세요. 바이러스를 처음 접하게 된 학생입니다. MOI 계산이 생소하여 질문드립니다. cell count했을 때 2.25*10^6cells/ml이 나왔습니다. 5MOI로 계산하면 11.25*10^6 virus/ml이 나오는데, virus stock이 2*10^9 virus/ml이므로 11.25*10^6 virus/ml로 만들어주면 된다고 생각했습니다.  177.77배가 희석해주면 되는것이니까 총 20ml에 0.112ml=112ul를 넣어주면 된다고 생각했는데, 45ul가 정답이었습니다. total cell 기준으로 생각해야하는건가요?헷갈려서 질문드립니다.  
회원작성글 slide  |  06.16
Q. influenza infection 시에 TPCK-treated Trypsin의 역할이 궁금합니다
MDCK cell로  influenza를 plaque assay나 TCID50 test를 할 때 TPCK-treated trypsin을 첨가하는 이유가 궁금합니다. protease로서 a-2, 3 또는 a-2, 6와 결합된 HA1을 끊어준다고 하는데,, 이게 감염에 도움이 된다는데 어째서 그런것인지 궁금합니다.
회원작성글 애월  |  06.07
Q. protein 발현 위한 AcMNPV biosafety level 관련하여
안녕하세요 protein 합성을 위한 여러 모델 중 sf9 등 insect cell과 이를 감염시키는 recombinant AcMNPV baculovirus를 이용하는 시스템을 사용하고자 합니다. 그런데 다른 baculovirus들의 연구는 biosafety level 2가 필요하다고 하는데 AcMNPV는 biosafety level 1에서도 연구가 가능하다고 하는 보고가 있습니다. 혹시 이 시스템으로 단백질을 추출해 보신 분(혹은 가까이서 보신 분)이 계시다면 AcMNPV를 이용한 단백질 합성이 biosafety level 1에서도 가능한지 알려주신다면 감사하겠습니다.
회원작성글 물찌  |  06.07
Q. 바이러스 유전물질 확인
바이러스가 RNA,DNA바이러스로 구분되는 걸로 알고 있습니다 처음 보는 바이러스가 RNA바이러스인지, DNA바이러스인지 어떻게 확인하나요,,?  아무리 찾아도 안 나와요ㅠㅠ
회원작성글 meaow  |  05.29
Q. Eo 가스 멸균법
EO 가스 멸균법에 대해 조사한 후 실험을 진행 하려고 하는데 가스 상태 또는 분무 상태로 분무하여 멸균 한다고 나와 있는데, EO 가스 멸균법은 가스 상태로 멸균 하는거 아닌가요 ? 분무라는게 가스보다는 무거운 느낌의 에어로졸인데 그렇다면 가스 상태와 분무 상태일 때 사용하는 상황이 다른가요 ? 다르다면 어떤 경우에 다른가요 ?
회원작성글 ㅌ ㅐ 태  |  05.24
Q. 포름알데히드 농도 8%
  포름알데히드 농도 8%, 10분에서는 폴리오바이러스만 불활성화 시키나요 ? 아니면 다른 바이러스도 불활성화 시키나요 ? 불활성화 시킨다면 종류는 무엇이 있나요 ? 아무리 찾아봐도 정보가 없어 문의 드립니다 !
회원작성글 ㅌ ㅐ 태  |  05.21
Q. 특정 cell line (293T)에서만 transfection이 안되는 현상이 있습니다.
안녕하세요 virus의 genome에 modification한 후에 pcDNA에 클로닝해서 Mammalian cell에 transfection하여 recombinant virus를 만드는 실험을 하고 있습니다.   기존에 HEK293T와 HeLa에서 모두 바이러스가 잘 나왔었는데요 몇 달 전부터 HeLa에서만 바이러스가 만들어지는데 HEK293T에서는 transfection이 잘 되지 않는 현상이 나타나고 있습니다.   transfection할 때 사용하는 lipofectamine과 DNA의 양은 조건이 잘 잡혀있는 상태입니다. HeLa에서는 정상적으로 transfection이 되기 때문에 plasmid의 문제는 아닐 것이라고 예상하고 있습니다. 혹시 제가 사용하고 있는 HEK293T cell에 문제가 생겼을 가능성이 있나요? overgrowth가 된다거나 했을 때, transfection이 잘 되지 않게 cell line이 변화하는 경우가 있나요?? 다른 연구실에서 HEK293T를 새로 받아서 실험해볼 계획입니다.   미리 감사드립니다!  
회원작성글 크리스12  |  05.10
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