16S PCR을 하는데 어제는 밴드가 떴는데 좀 희미하게 떠서 오늘 다시 진행했는데 밴드가 하나도 안떠요.   DNA는 colony 따서 chelex에 풀어서 사용하고, 어제 2ul 넣었다가 잘 안떠서 10ul로 다시 실험 진행했는데 샘플 전부 밴드가 안떠요 다른 reagent는 양 맞게 넣었고 다시 여러번 확인해봐도 뭐가 문제인지 모르겠어요ㅜㅠ  

R2A에서 1/100 dil 후 원래 od 0.3까지 4-5시간이면 자랐던 E. faecium이 어떤 방법을 써도 O/N을 해도 0.2까지밖에 안자랍니다... 이 이유를 아시는 분 혹시 있을까요? 벼래별 용은 다 썼는데 growth가 회복되지 않습니다.... 도와주세요 1. 신선한 R2A 사용 2. stock을 agar에 긁은 후 콜로니 뜨면 broth에 키운 후 dilution 3. stock을 broth에 키운 후 broth에 dilution 4. airation 잘 될수있게 큰 플라스크에 배양 위 방법등을 모두 써도 전처럼 그로스가 돌아오질 않습니다....ㅜㅜㅜㅜㅜㅜ   추가로 BHI라는 고영양 배지에서 배양했을 시 OD값은 높아지긴한다만,  원래는 3시간이면 자라던 게 지금은 6시간 이후부터 반응이 올 정도로 느리게 자랍니다..... 이유를 아시는 분 계시면 알려주세요 ㅠㅠㅠㅠ  

아래자료로 더블링 타임 구하면 16.3 시간이 나오는거 맞나요?? 36시간 300 48시간 500 60시간 800 72시간 900   단위 콜로니 수   점들 그래프에 찍고 접합직선계산하니 0.43이 나왔습니다

1. 일반적으로 혐기성 여드름균 더블링 타임이 얼마로 나오나요..?   2. 고등학생이 콜로니 수 대략적으로 새서 더블링 타임 구해보는거 괜찮을까요?

벡터에 클로닝 한뒤에.. 컴셀 키워서.. LB agar +엠피실린 100ul/ml 배지에 (일주일 전 미리 만들어놓았기 때문에.. 잘 굳어있는 상태) 500ul컴셀.. 넣고 도말했습니다.. 새 엠피실린으로 만들었어요.(엠피실린 맛 간 건 아닐것 같습니다,,) 다음날 아침에 콜로니를 관찰하려 하니 파일 첨부한것 처럼 뿌얀 무언가 덮여있고.. 콜로니가 아예 없어요..  잘 안보이는 저 콜로니같은것들은 콜로니가 아닌.. 도말하면서 밀렸던 배지 찌꺼기? 입니다.. 도와주십시요 ㅠㅠ

안녕하세요. 대학 진학을 앞둔 3학년입니다. 마지막 동아리 실험 보고서를 작성 기획중입니다 . 현재 곰팡이와 미생물을 한천 배지에 배양하고 그 위에 항생제 디스크를 올려서 4종의 항생제 중 어느 것이 효과적인지 지름의 길이를 통해 구하는 실험과 항생제 감수성 디스크에 포비든 요오드 용액과 소독용 알콜, 과산화수소수를 농도에 따라 다르게 3종으로 나눠서 소독제의 원리에ㅡ대해서 배운 내용을 적용하여 용액의 농도에 따른 효과를 비교해보는 추가적인 실험을 하려고 합니다. 이때 이러한 디스크들을 얼마나 올려놓아야할까요? 시간 제약이 있는 지라 지속적인 관찰이 불가능하여서 이렇게 질문 드립니다. 관련된 내용을 아셔서 답변해주시면 감사하겠습니다.

안녕하세요. 발효 커피에서 카페인을 추출하는 실험하고 있는 고등학생입니다. 생두를 발효한 후 DCM을 이용해서 카페인을 추출했는데요, 발효한 생두와 발효하지 않은 생두를 비교했을 때 발효한 생두의 카페인 함량이 낮게 나오는 것이 이론적으로도 맞고 실험도 잘 진행이 되었는데 왜 발효를 하면 커피의 카페인 함량이 줄어드는지 모르겠습니다. 왜 발효 커피에서 카페인 함량이 낮게 나오는 것인가요?? 친절한 답변 부탁드립니다ㅜㅜ

시중에서 구입한 유산균 분말의 효능을 알아보고자 디스크 확산법에 활용하기 위해 배양액으로 만들려 합니다.   실험이 먼저 유산균 분말을 생리식염수에 희석하고 mrs 고체 배지에 도말해서 배양시킨 후, 다시 균을 따서 액체 배지에 배양시키고 원심분리 후 상등액만 사용하려는데 방법이 옳은가요? (원심분리는 불필요한가요..?)   고등학생으로서 조사하면서 배우고 있어 꼭 도움 부탁드립니다.틀린 부분이 있으면 집어주시면 감사하겠습니다ㅠㅠ

안녕하세요, 고등학교에서 미생물의 DNA를 추출하는 실험을 진행하고자 해서 관련 자료들을 찾아보았는데, 실험에 쓰이는 Washing buffer 1, 2에 대한 정보를 찾을 수가 없어서 이를 알고 싶어 질문드립니다.

안녕하세요 실험을 준비하고 있는 학생입니다. 아는것이 많이 없어 최대한 조사하면서 공부하고 있는데 많이 막막해서 의견을 여쭤봅니다.. 저희가 시중에 판매하고 있는 유산균(분말, 캡슐 형태)을 활용해서 실제 썩힌 음식에서 채취한 식중독균을 억제할 수 있는지를 실험하고 싶습니다. 원래는 김치와 같은 식품을 쓰려 했는데 그 속에 유산균 말고도 다른 세균이나 등등이 영향을 줄 수 있다고 해서 시중의 최대한 순수한 유산균 가루를 쓰려고 합니다. (음식으로 해도 가능할까요?)   1. mrs 배지에 판매하고 있는 유산균 가루를 멸균수에 희석해서 도말해서 배양 2. 실제로 썩힌 음식을 멸균수에 넣어서 상등액을 일반 배지에 도말해서 배양 그리고 나서 디스크 확산법을 활용해 배양시킨 유산균이 일반 배지의 균을 억제하는지 확인을 하고 싶은데요...방법을 아무리 찾아봐도 정확히 모르겠습니다 ㅠㅠ Q. 1)여기저기 찾아보니까 mrs 배지에 유산균을 배양시키고 원심분리기 를 이용해서 상등액만 사용해라..는 말이 나오는데 액체 mrs 배지를 사용하는건가요..?? 배양액이 액체 상태의 mrs 배지인가요..? 2)배양시킨 유산균을 어떻게 액상으로 해서 식중독균에 실험하는지 잘 모르겠습니다. 3) 무균 상태 대신 알코올 램프로 대신해도 가능한가요? 4) 원심분리기가 없으면 가만히 오랜 시간동안 두고 상등액만 쓰는 건.. 너무 비과학적인 거겠죠?ㅠㅠ 5) 디스크 확산법에서 한 배지에 여러 유산균을 한 번에 여러 디스크로 테스트해도 되나요? 성장 억제 지대가 서로 막 겹치고 그렇진 않죠..?  너무나 기본적인 내용이라 죄송합니다...! 

아래에 제시된 reference에 따라, Sudan black B를 이용한 PHA생산 균주 스크리닝을 진행했습니다. 첨부한 사진의 결과가 positive인지 몰라서 질문드립니다.  이 결과 positive라고 볼수있을까요? Narayanan, M., Kandasamy, S., Kumarasamy, S., Gnanavel, K., Ranganathan, M., & Kandasamy, G. (2020). Screening of polyhydroxybutyrate producing indigenous bacteria from polluted lake soil. Heliyon, 6(10), e05381.Narayanan, M., Kandasamy, S., Kumarasamy, S., Gnanavel, K., Ranganathan, M., & Kandasamy, G. (2020). Screening of polyhydroxybutyrate producing indigenous bacteria from polluted lake soil. Heliyon, 6(10), e05381.

안녕하세요 아직 초짜 학부생입니다 50ng/ul 농도의 DNA 1ul를 transformation 시켰는데 항생제가 들어있는 plate에 분주하여 spreading 할때 보통 얼마로 분주하면 될까요…? 저는 10ul를 분주했는데 너무 적게 했다라고 말씀만 해주시고 얼마를 넣어야되는지 알려주시지를 않으셔서요 또한 integration된 primer, copy수가 많은 primer 들이 효율이 좋기때문에 양을 더 적게 분주하는걸로 알고있는데 맞을까요? 공식이라던지 짐작할수 있는 방법이 있으면 알려주실수 있을까요?

특정 유전자를 deletion시킨 e.coli를 comcell로 만들어서 prl27을 transformation시켜서 spreading 하고 있습니다 control에 50람다씩 spreading하면 콜로니가 20-30개 밖에 나오지 않습니다 어쩔때는 한두개밖에 나오지 않아서 효율이 너무 안좋은것같습니다 ㅜㅜ 어떤부분을 바꾸어 봐야 할까요?

안녕하세요 박테리아 상등액을 회수하여  thiocillin물질을 분석하려 고하는데 아래의 solvent에 녹이면 층이 두개로 나뉘더라구요.. 이거 층을 합칠 수 있는 방법이 없을까요? solvent A: 0.1% TFA in water solvent B: 0.1% TFA in acetonitrile

균주의 chromosome을 CRISPR-Cas9으로 point mutation 시키려고 합니다. 이전에 유전자 하나를 knockout 시킬 때에는 mutation 후 colony PCR로 1차 스크리닝 후 sequencing을 하여 확인을 하였는데  point mutation의 경우 DNA 크기 차이가 나지 않아, 균주 하나하나를 다 sequencing을 보내야 할 것 같습니다. 이 방법은 너무 비효율적인 것 같아 다른 방법이 있는지 질문드립니다.   이전에 유전자 상에 있는 nucleotide 하나를 mutation 시킬 때에는 유전자 전체를 knockout 시키고, point mutation 시킨 유전자를 다시 knockin 하여 진행하였는데, 이번의 경우는 유전자 상이 아니라 promoter 쪽 부위여서 막 건드릴 수가 없을 것 같습니다 ㅠㅠ

방선균 사진입니다. 어떤종류의 방선균인지 알고 싶습니다.