기본 lb broth 포도당 넣은 lb broth 젖당 넣은 lb broth 이렇게 세가지 배지에서 키운 대장균을 분광광도계로 생장곡선을 비교해볼 생각인데 기본 배지 조성을 1L의 LB medium 기준으로 10g의 트립톤과 5g의 효모 추출물, 10g의 NaCl 라고하면 포도당과 젖당은 어느정도 첨가해야 적절할까요?

imageJ로 세포 형광 정량하려고 하는데, 저같은 경우는 colocalization을 한거라, 같은 위치에서의 두 형광 시그널을 받아 비율을 보려고 하는데, (red대비 blue의 형광을 보려고합니다) Split channels->Threshold 설정-> Analyze particles를 사용하면 red와 blue의 point가 다릅니다.  저 위의 사진은 20x에서 찍은 셀을 제가 직접 누끼(?)딴건데 교수님께서는 정량하려면 최소 150 cell 직접 따거나 10x 5장으로 정량하라고 하십니다.   혹시 같은 위치에서 2가지 채널의 시그널을 정량할 수 있는 방법이 있을까요? 제가 일일히 따야하는걸까요? 도와주세요..

brdu를 하려고 하는데 1*10^4cell/100ul로 시딩을 해주고 있습니다. seeding 24시간 후에 starvation 24시간하고 treatment를 24시간을 하고 brdu를 합니다.  교수님께서 1*10^4cell/100ul로 시딩하면 실험하는 3일동안 너무 많이 증식하지 않을까 걱정하시더라구요. 근데 시딩 후 24시간후에 보면 20%정도 confluency 합니다.  starvation할때 medium에 1%의 penicillin streptomycin듣어가 있는 medium을 분주하고있습니다. treatment할때도 이 starvation medium에 처리하고 분주하고 있습니다. FBS가 들어가지 않은채로 2일이상있는 건데 cell 증식 할 수 있나요? 아니면 seeding후에 cell이 60% confluency하면 starvation을 하는게 맞을까요?  

alpha-MEM을 사용하는게 맞지만, 실험상 DMEM에서 분화가 된다면 DMEM으로 진행하는게 나은 상황입니다. 혹시 DMEM배지에서도 분화가 문제없이 되는지 해보신 분 있을까요?

암세포에 어떤 특별한 장치 (의뢰한 회사에서 제공)를 설치하여 암세포의 사멸정도를 확인하려는 실험을 하고 싶은데 대행 또는 용역 업체가 있나요..? 

안녕하세요 cell culture를 하는데 매번 cell이 한 쪽으로 쏠리는 경향이 자꾸 생기네요.. 이걸 differentiation 해도 되는건지 싶습니다. 한쪽은 60% 정도인데 한 쪽은 80~90% 정도 되어보이고.. 그냥 기다려야할지 고민이네요..

APC gene mutation 된 MACF10를 ctl 10A와 비교하여  b-catenin 의 nuclear translocation을 confocal로 live image 찍으려고 합니다. cell이 살아 있는 상태여야해서 fix는 안될 것 같은데 Ab가 nucleus안까지 들어갈까요? cell에는 damage 주지않으면서  Ab를 넣는 방법 뭐가 있을까요?   의견 부탁드립니다.

chicken 다리 근육에서 얻은 primary cell입니다. sorting은 percoll로 진행하고 있는데요   differentation 실험중에 있는데 Hores serum를 10%, 5%, 2% 로 각각 처리하면서 최적화중에 있습니다. 다른 논문들을 찾아보니 재각각으로 처리하는 논문들이 많고 해서 다양한 농도로 진행하고 있었습니다.   그런데 문제는 P0 즉 바로 얻은 cell에서는 따로 HS를 안쓰고 FBS에서 분화가 자연적으로 발생하는데 P1에서 HS 및 FBS로 분화 유도를 하면 myotube가 형성되기 전에 cell들이 막이 생기면서 바닥에서 떠오르면서 공처럼 뭉치고 있는데 왜 그럴까요?  

이번에 ROS 측정을 하려고 protocol을 확인중에 black plate clear bottom을 쓰라고 되어있더라구요   근데 랩실에서는 막힌거만 있고, 현재까지 FL 측정시에 문제 없었거든요 suspension cell 가지고 실험할거라서 clear bottom으로만 측정해야하나요?   다른랩에서 하는 걸 보니, clear bottom을 막아서 측정하시는 분도 계시던데.. bottom reading 하는게 아니면 clear를 안써도 되는 건가요? plate의 종류 때매 너무 헷갈리네요

고등학교 학생인데 젖당 오페론이 작용할 때와 억제될 때의 차이를 농도에 따라 비교해보려고 합니다 원래 대장균은 젖당이 아니라 포도당을 에너지원으로 쓰지만 포도당이 없을 때 오페론이 작동하여 젖당을 분해하는거니까 포도당만 있는 배지와 젖당만 있는 배지에 각각 대장균을 배양하여 젖당 오페론의 작용을 확인하고 두 에너지원 중 어떤 것이 더 효율적인지 실험을 통해 확인하고 싶습니다 (아마 포도당이겠죠?) 만약 포도당만 있는 배지에 있는 대장균과 젖당 대장균의 콜로니를 평판계수법으로 비교하면 더 콜로니가 많은 쪽이 에너지원으로 효율적이라고 볼 수 있는가요?

바실러스 튜링겐시스와 백강균을 액체 배양 하려고 하는데요.   진탕배양과 정치배양이 있잖아요   이 둘 중 어느 배양이 더 빠르고 안전한가요?   모두 호기성 미생물로 알고 있는데   호기성은 진탕배양이 맞다고 하는데    정치배양은 아예 안 되나요? 시간이 오래걸려서 안 되는건가요?   그럼 정치배양을 할 때 걸리는 시간을 어느정도 인가요?   진탕배양을 하면 또 미생물의 성상이 변한다는 말도 있어서   정확하게 알고 싶습니다ㅠㅠ

1. 유산균을 37도~40도에서 4시간동안 중탕으로 증식시킨 우유를 희석해서 mrs 배지에 spreading 평판 도말법을 이용해서 도말하고 뚜껑 닫히는 부분에 진공그리스를 바른 락앤락에 배지를 넣고 48시간 기다릴 계획입니다. 쓸 예정인 동결건조 유산균 제품은 유산균 100%로 혐기성, 호기성 유산균이 둘 다 있다는데요 제가 알기론 혐기성은 산소를 차단해줘야 하고 호기성은 산소 있어도 괜찮다고 알고있는데 진공그리스 발라서 산소 차단해줬으니까 배양 가능할까요… 2. 락앤락에 진공그리스를 어떻게 얼마나 무엇으로 발라야 할까요 정확하게 알 수 있었으면 좋겠습니다 3. 우유에 유산균 넣어서 요거트 만들 때 꼭 일반우유를 사용하라고 하는데 칼슘 우유나 저지방 우유 멸균 우유 유당분해우유 등은 발효가 잘 안된다고만 나와있고 그 이유 원인은 무엇인지 찾을 수가 없어요. 잘 아시는 분 설명해주시면 정말 감사하겠습니다. ㅠㅠㅠ 4. 유산균을 접종한 직후의 우유와 4시간 중탕 후의 우유를 도말할 계획인데 나중에 colony 수를 세어서 어떤 그래프나 표로 비교 분석하는 게 좋을까요 탐구의 목적은 유산균이 가장 많이 증식한 우유와 가장 증식하지 못한 우유를 찾고 그 우유의 다른 우유와의 차이가 되는 성분이 뭔지 조사해서 증식에 도움이 되는/억제가 되는 요소를 예측? 하려합니다.

배지가 굳어서 갈라진건가요? 배지를 새로 갈아줘아하나요?

흰색 가느다란 줄 같은게 보이는데 문제가 있는건가요? 배지를 갈아줘야하나요?

카테고리는 무시해주세요!!   바실러스 튜링겐시스와 백강균을 배양했을 때 각각 액체 배지인 LB 배지   MCM 배지에 배양하여 혼합하려고 하는데 혼합했을 때 서로의 배지가 영향을   주지는 않나요?

실험 관련 내용은 아니지만 여쭙고 싶은게 있습니다 암세포는 성장인자 같은 외부 신호가 없어도  G1기 검문 지점을 지날 수 있나요? 만약 그렇다면, 역으로 암세포가 G1기 검문 지점을 통과할 수 없게 만드는, 즉 G0 성장 정지 상태에 계속 머물게하는 외부 신호를 찾는 연구를 통해서 암세포가 분열할 수 없게 만들 수 있지 않을까요? 혹시 이러한 원리를 가진 항암 요법이 사용되고 있나요? 

안녕하세요.  Skin에서 primary Endothelial cell 연구하고 있는 학생입니다.  Endothelial cell만 배양하고 싶은데 Fibroblast를 어떻게 제거 해야하는지 모르겠습니다.  계대하게 되면 Fibroblast가 우세하게 자라 문제가 되는 상황입니다. 배지는 Endothelial cell 전용배지로 키우고 FBS는 들어있지않습니다.  부착 시간으로 dish 옮겨도 보고, TE를 통해서 진행 해봐도 계속 Fibroblast는 남아있어요 ㅜㅜ MACS 통해서 분리해봐도 (밀테니 회사- 조언받아가면서 진행) 전혀 분리되지 않습니다.  이럴때 방법이 있을까요?

사람 조직에서 콜라겐 처리해서 세포 프렙 중인데요 세포 카운팅 시 RBC와 세포 구분이 잘 되나요?   트립판 블루 염색해서 카운팅 할때는 항상 동그랗고 살짝 노랗고 투명하고 빛나는? 모양이 세포라 생각하고 카운팅을 하는데 막상 디쉬에 깔아보면 비슷한 세포 수라도 디쉬에 붙어있는 세포가 확 차이가 나던데요 제가 카운팅한 세포에 RBC가 많이 포함이 돼서 그런걸까요? 모양으로 구분이 가능한가요 원래?

안녕하세요, 식품회사에서 계속 필름배지로 실험을 하다가 agar로 넘어왔는데, 일반세균과 진균은 괜찮은데 대장균군 실험이 애매하더라구요 ,,,,ㅠㅠ LB 배지 제조 시 한천가루를 섞어서 고체배지를 만들어서 공중낙하균 및 각종 미생물 검사를 하려고 하는데,  공중낙하균은 무조건 고체배지로 실험을 해야하는데 다른 세균이 섞이면 골라낼 수 있는지요, 혹은 공중낙하균 검사 장소를 피펫스왑해서 해야하는지,,,ㅋㅋ; 아무튼, 대장균군 외 다른 세균이 LB 고체배지에서 에서 자라거나 이를 골라낼 수 있는지 질문드립니다.

안녕하세요 이번에 제가 암세포 배양과 관련된 실험을 했습니다. 근데 제가 다니는 학교가 과학고나 영재고가 아니라서 실험 기구 등 제약이 있어서 원하는 결과를 얻지는 못했습니다. 실험의 실패 원인을 분석하는 와중에 혼자서 해결하기는 어려운 의문이 들어서 질문 올립니다.  실험의 내용은 대략 약물(영양제)이 배양된 암세포에 미치는 영향을 관찰하는 것입니다. 암세포는 동결되지 않은 상태의 MDA-MB-453 세포를 사용하였고, 세포 배양 방법은 계대배양과 비슷한 방식으로 cell culture flask에 배양했습니다. 질문의 내용은 다음과 같습니다. 1. 이산화탄소를 공급해줘야 하는 이유가 배양액의 pH 농도를 일정 수준으로 유지하기 위함이라고 알고 있습니다. 배양액의 pH 농도 변화가 세포의 생존을 크게 좌우하나요? 2. 배양 과정에서 너무 적은 부피의 conical tube를 사용한 탓인지 원심분리 후 pellet이 눈에 보이지 않았습니다. 그래서 불가피하게 ‘상층액을 suction하고 새로운 medium을 넣어 pipetting’하는 과정을 생략하고 바로 culture flask에 새로 제조한 배양액과 넣었습니다. - 원심분리 후 상층액을 제거하고 새로운 medium을 다시 넣어 재현탁 과정을 거치는 특별한 이유가 있을까요? - 2번 내용이 암세포가 flask에 자리 잡는 데에 큰 영향을 미쳤을까요? 3. 약물 투여 방식과 시점이 적절하지 않았던 것 같습니다. 정제를 직접 빻아 사용했기 때문에 크고 거친 입자가 배양액에 충분히 용해되지 않았습니다. 논문을 찾아보니 실제 연구에서는 동결 건조 분말 상태의 약물을 배양액에 용해한 후 사용한 것을 확인할 수 있었습니다. 보완해서 실험을 다시 설계해보고 싶습니다. 약물 투여 시 분말 형태의 약물을 사용하는 것 이외에는 다른 방법이 없을까요? 결과를 얻기 위해 약물 투여 시점은 어떻게 설정하는 것이 좋다고 생각하시나요?  4. 4번은 실험과는 상관없는 질문이긴 한데  암세포, 종양은 인체 내에서 혈관을 생성한다던가 아니면 다른 부위로 전이된다던가 해서 조직과 상호작용? 을 많이 하면서 성장하는 것으로 알고 있는데 암세포 관련 in vitro 실험에서는 in vivo 실험에 비해 생체 조직과의 관계성이나 어떤 작용 매커니즘을 알기에는 어려움이 있지 않나요? 그저 '암세포'자체 와의 관련성을 확인하는 것인가요? 제 질문 내용이 미흡할 수 있겠지만, 답변해주신다면 정말 큰 도움이 될 것 같습니다. 감사합니다!