안녕하세요.   다름이 아니라 얼마전에 다른 연구실에서 cell stock (atcc) 을 분양받아서 풀었는데 세포가 하나도 붙지 않았습니다.   원래 저희 연구실에서고 키우고 있던 세포라 배지 조건때문은 아닌것같은데   마음에 걸리는 점이  세포를 가져다 주실때 1시간 반거리인데 스티로폼 아이스박스에 아이스팩 3-4개 정도 넣어서 stock을 가져오셨더라구요.. 세포가 녹아 있진 않았습니다.   제가 알기론, 드라이아이스나 액체질소에 넣어 이동해야된다고 알고있는데 혹시 이것도 이유가 될수 있을까요..?

안녕하세요 석사과정 대학원생입니다.    migration assay (boyden chamer assay - Fluorometric) 관련 조건 실험을 진행하려고 합니다.    NRK52E (rat epithelial cell)에 chemokine 유발 물질을 처리한 medium 과 U937 (human monocyte cell)으로 chemotaxis 실험이 가능 할까요??        

Horse Serum을 구입하려고 하는데요 Donor가 적어져 있는 serum과 안 적어진 serum의 차이는 무엇일까요? 그리고 custom serum도 있던데 혹시 어떤건지 알려주실 수 있을까요?   도와주세요!

안녕하세요, 저번에 hpeg2 세포가 정전기적 표면처리된 T25 Flask에서 잘 부착되지 않고 뭉치는 문제로 이 게시판에 질문을 남겼었습니다.   그래서 이번에 0.1 mg/ml 농도로 콜라겐을 T25 Flask에 코팅한 후에 세포를 thawing해 보았는데요, 괜찮은 건가요? 비교 사진을 첨부하였습니다. 참고로 사용한 미디어는  MEM 90% + 10 % FBS+ 1% P/S 입니다. 제가 보기에는 콜라겐 코팅 Flask에서 더 잘 부착되어 보이는데... 다른 분들이 보시기에는 어떠신가요 ㅜㅜ?  

안녕하세요 석사과정 2년차 대학원생 입니다ㅠㅠ 지금 3일째 hESC(human stem cell)을 풀었다가 다시 시도하는 것을  반복중입니다.... -80도 deepfreezer에 2017년도에 얼린 cell을 matrigel coating된 well에 풀었습니다.  근데 hESC들이 부착되지 않고 대부분 single colony가 되어  둥둥 떠다닙니다...  부착이 되지 않은 것인지, cell들이 다 죽어서 떠다니는 것인지ㅠㅠ 3일동안 너무 스트레스 받네요ㅠㅠㅠ   stem cell에 대해서 잘 아시는 분 계실까요?

안녕하세요. 데이터 정리 도중에 기본적인 질문이 있어서 올립니다! cell proliferation을 보려고 1,2,3,4일차 cell counting을 하고 cell doubling time을 계산했는데 3->4일차 1반복이 다른 값에 비해서 많이 튄 것을 확인했습니다.  1. 이 값을 빼고 2,3 반복수로만 데이터를 정리할지 고민됩니다.  2. 그래프를 그렸을때 1반복 그래프 모양이 다른 cell proliferation graph와 비슷한 형태를 보여서 이게 더 정확하게 값이 나온것인지,, 다른 2,3 반복수는 1일차에서 seeding한 세포수에 비해 줄어들었지만, 비슷한 그래프 모양을 띠었습니다. 정리하자면, 어떤 데이터를 빼고 어떤 데이터를 써야할 지 모르겠습니다. ㅜㅜ

siRNA 처리 후 6시간 뒤 Media Change 진행 후 48 시간 뒤에 Harvest 하여 진행하였습니다 Havest전 cell morphology상에서 transfection이 확실하게 이루어 진 것은 확인하였으나 westen blot band상에서는 control과 siRNA의 차이가 전혀 없습니다 Media change하고 시간을 48시간 보다 더 두어보는 것이 방법일까요?? 도움 좀 얻고 싶습니다

안녕하세요. 세포 증식 실험을 하던 중 의문점이 생겨 질문 남깁니다. cell counting을 이용해서 cell doubling time을 구하려고 하는데  5000(0h) 4500(24h) 6800(48h) 22500(72h) 44300(96h) 24시간 주기로 세포 수를 counting 했을 때 이렇게 나왔습니다.  1. 0h-> 24h 에서 5000개를 seeding했는데 부착이 되지 않은 세포가 있는지 4500개로 세포 수가 줄었습니다. 이 때, doubling time이 -가 나오는데 이런 경우에는 어떻게 해야되는 지 궁금합니다. 2. cell doubling time을 구할 때, 0->24h, 24h-> 48h, 48h-> 72h, 72h-> 96h 각각의 doubling time을 구해서 평균을 내는 것인지 궁금합니다. 너무 기본적인 내용이지만 답변해주시면 감사하겠습니다!

  안녕하세요. 요즘 실험 열심히 배우고 있는 학생입니다, ㅜㅜ 제가 골세포 분화 실험은 처음해보는데, 연구실에 연구원이 저 한명이라 물어볼 곳이 없어 여기 질문 올립니다.   보통 분화 실험 할 때 조건을 간단하게 적으면 - 24well plate - 5*10^4 cell seeding - 24hr 후 분화유도배지로 교체 - 2~3일 마다 배지 교체하며 2주정도 배양 이렇던데 그러면 저 정도 cell양이면 3일만 지나도 full density가 될텐데 2주동안 계속 subculture 없이 배지만 갈아주면 cell이 미어터지지 않나요? 원래 분화실험 할 때 그 정도로 full density로 진행 하는것인가요...?    기초적인 질문이지만 따듯한 답변 부탁 드립니다,ㅜㅜㅜ

cell을 구입하면, 드라이아이스에 올 때도 있고, 액체질소에 보관되어 올 때도 있는데,  1. 액체질소에서 보관된 것을 드라이 아이스 상에서 장기간 옮겨져도 문제가 없는지 궁금합니다. (온도 변화)  -80도와 -140도에서 cell viability에 대한 어떤 영향을 주나요?   장기 보관시에는 -140도를 유지 해 달라고 저도 그러라고 말은 하고 다니지만 왜 그런지는 몰라서요. 낮으면 무조건 좋은건지. 어느 정도 이하의 온도가 좋은 것인지 궁금해요. 

현재 세포독성실험만 10번은 진행했는데 흡광도가 자꾸 0.7~1.3 정도로 나옵니다ㅠ L929셀을 96well plate에 1×10⁵개/well씩 깔고 다음날 검액 교체했습니다. 그리고 24시간 후에 EZ-cytox(WST assay) 10ul 처리해서 1시간 동안 CO2 incubator에 넣어뒀다가 흡광도 측정하는데요.. 사수분은 항상 흡광도가 0.9~1.1 사이로 나왔고 실험실 프로토콜 상으로도 그 정도 범위에 들어가는 흡광도로 나와야 하는데 저는 암만 해도 그 정도로 안나오네요ㅠ 몇 번이나 실험 말아먹는 중인데 어떻게 해야 흡광도값이 일정하게 나올까요ㅠㅠ

제목과 같이 assay를 하려고 할 때 staining solution volume과 wash 해주는 용액의 volume을 똑같이 해야한다는데 따로 이유가 있는건가요?

protoplast를 추출하고 hemocytometer로 계산하고 있습니다. 계산해야하는 샘플의 양이 많아서 현미경을 오래 보고 있기 힘들더라구요. 혹시 세포를 넣은 hemocytometer 사진을 찍고, 다른 프로그램으로 자동 계수하는 방법이 있을까요? Image J 나 기타 프로그램으로 할 수 있는 방법 알려주시면 감사하겠습니다!

cryo vial을 사용중인데, 동결 시 바이알을 꽉 잠그고 -80도에 보관 후, 액체질소(liquid nitrogen)로 옮깁니다. 동결 후 풀면 세포 상태가 너무 안좋고 붙어있는 셀 양도 별로 없어 질문남깁니다 ㅠㅠ  1. 동결을 풀기위해 액체질소에서 꺼내면 vial안에 액체질소가 들어서 부글부글 끓는 것이 보입니다. 정상인가요..? 그리고 꽉 닫았던 뚜껑들도 뚜껑이 얼어 다 헐렁헐렁해져서 살짝만 힘줘도 열려버립니다...  2. 안에 액체질소가 들어가더라도 세포는 사용이 가능한가요?? 액체질소에 닿으면 세포에 타격이 가나요.. 3. 안에 들어간 액체질소를 빼주고 사용해도 된다면, 뚜껑을 열지않고 엎드리기만해도 액체질소가 빠져나오던데 이렇게 빼주면되나요 아니면 꺼내자마자 뚜껑을 살짝 열어 빼주면 되나요..?   * 저는 액체질소에서 빼내서 실험실로 가져가 바로 37도에 녹입니다. 닫힌상태에서도 증발이 된다면 녹이는 과정이나 들고옮기는 과정에서 다 날라가지않나요..?? 근데도 세포가 이상해서 ㅠㅠㅠ 

안녕하세요. 석사 1년차에 접어들게된 초보 연구자 입니다. 최근에 암연구를 하게 되어 현재 breast, liver, pancreas, stomach cancer에 대해 연구를 하게 되었는데 normal cell line을 한국세포주은행에서 얻을수가 없더라구요.  제가 찾은 cell line은  breast: MCF-10, MCF-10A, MCF-12A, MCF-12F, HBL-100, 184A1, 184A5 liver: Fa2N-4 pancreas: H6c7 stomach: HGaEpC 이렇게 있는데 다른 normal cell line이어도 괜찮습니다. cell line 분양 해주실 수 있다면 연락 부탁드립니다. jmk95@naver.com 010-6899-1058

vero/h 가지고 실험해보는 학생입니다.  6well 96well 에 각각 깔아 plaque assay를 할려고 하는데  6well에는 4x10^5  96well에는 1.5x10^4 으로 well당 깔라고 알려주셨는데 cell counting해보니 1ml당 3.5x10^6이 나왔습니다 DMEM을 섞어 농도를 맞춰주는데 각각 몇씩 추가해주어야 알맞은 농도가 나올까요?.. 계산하는 법도 알려주시면 감사합니다..   초보적인 질문이라 죄송해요 ㅠㅠ