Sphere 형성 관찰 실험하고있는 학부생입니다 날마다 스템셀을 현미경으로 관찰하고 사진을 찍고있는데 어제 찍은 세포와 똑같은 세포를 찾아서 어제와 같은 초점으로 찍기가 너무 어렵습니다ㅜㅜ 스피어 형성하는 걸 사진으로 담아야하는데 똑같은 세포를 찾는 것부터가 힘드네요ㅠㅠ 혹시 팁같은게 있을까요..?

ATCC에서 LX2 cell을 구매하여 stock을 만들었는데 다시 풀어보니 잘 안붙어서 확인 부탁드립니다. 1. cell culture plate media suction 2. PBS washing 1회 후 0.5% trypsin-EDTA 처리 3. 3min incubating 4. 1000rpm, 3~5min cell down 5. 60% media + 30% FBS + 10% DMSO로 Pellet 풀고, cryotube 1ml 분주 6. -20도 6h > -80도 overnight > LN2 stock 조성에 문제가 있는 것 같은데 조언 부탁드려요!

현재 체외 세포 배양 지지체 이용하여 세포를 키우고있는 대학원생입니다.   연구실에서는 1 mm의 두께를 가지는 직육면체 모양의 지지체를 이용하여 cancer cell spheroid를 키우고 있는데요. 최근에 invitrogen사의 live/dead imaging kit를 이용한 염색 결과가 조금 의아하여 질문 남깁니다.   방법은 아래와 같습니다. staining solution : RPMI 1640을 1:1로 섞은 후 지지체를 넣어줍니다. (1.5 mL 튜브) 15분 incubation 후 PBS로 washing 후 이미징합니다.   사진을 보면, 세포가 live/dead 모두 염색된 경우가 있는 이미지가 얻어집니다. 세포 실험으로 경험이 많은 선배님 있으시면 답변 부탁드립니다!

셀 스톡 풀 때 1:2로 풀어도 되나요?

안녕하세요. 현재 약물간의 combination을 통해 최적의 조합을 찾는 실험을 하고 있습니다. combination을 하기 전 각 약물이 in vivo에서 사용되는 용량을 찾고자 하는데 약물 성적서에서는 관련 정보를 찾을 수 없어 문의드립니다. FDA나 특정 사이트에 관련 정보가 있는지 아니면 논문을 통해 자료를 모아야 하는건지 알려주시면 감사하겠습니다. 감사합니다.

세포 분화중에 분화 배지 교체할 때 cell loss가 일어나는데 이게 자연스러운 현상인가요..? 좀 많이 loss가 되는 것 같아서요..

카테고리는 좀 무시해주세용 ㅠㅠ   TSB 배지를 제작하려고 하는데요   분말을 구매해서 제작하려고 합니다   제작 과정에서 고압증기멸균기(오토클레이브)가 필요한데   학교에 오토클레이브가 없어서 무균작업대에서 핫플레이트를   이용하여 배지를 제작해야한다는데    고압증기멸균기에서 121°C로 15분간 멸균하려 했으면   핫플레이트는 어느 정도 온도에서 몇 분 정도 해야하나요?   혹시 시간이 아니라 직접 판단해야한다면   분말이 어떤 상태라고 판단 될 때까지 핫플레이트에서 멸균해야하나요??

LB Plate위에 Liqud TB에 키운 Cell spreading 해도 될까요? LB Plate (+amp)에 Liquid  TB에서 키운 Cell spreading해도 별 문제없죠?   단순히 rich media라 그럴 것 같은데요!

Exoquick TC 이용해서 세포 배지에서 엑소좀 추출을 하였는데, 배지에 바로 ExoquickTC를 넣었습니다. 근데 프로토콜을 보니 세포외 파편 같은 것을 제거하기위해 0.22um filter나 원심분리를 한 뒤 처리하라는 스텝을 보았습니다. 실험 목적은 엑소좀에서 RNA를 뽑으려고 합니다 이런 스텝을 안하게되면 결과에 큰 문제가 생길까요..?

미생물 공배양 실험을 진행하려 하는데 Staphylococcus epidermidis (ATCC 12228)와 Cutibacterium acnes (ATCC 6919)을 공배양할 배지를 결정하지 못하였습니다. ㅠㅠ 어떤 배지를 사용하면 좋을지 조언해주시면 감사하겠습니다.

다름이 아니라 transwell isert를 PTFE 재질로 coculture를 하려고 하는데요,    cell을 insert에 seeding하고 나서 부착이 되었는지 확인을 해보면 전혀 안정적이게 붙은 상태가 아니라서요 ㅠㅠ   insert 안에는 bend3 cell, 6well plate에는 MO3.13 cell을 seeding해서 co-culture를 할 예정입니다.  검색해보니 insert안에 matrigel 같은 것으로 코팅을 하는 경우도 있던데  bend3 cell로 co-culture 해 본 선생님들은 답변 부탁드립니다ㅠㅠ

안녕하세요. 성남 대학교에서 석사 과정을 진행하고 있습니다. 암세포를 가지고 실험을 하고 있는데 HeLa 셀이 필요합니다. 다른 곳에서 셀을 받아왔는데 전혀 살지 않았고 그곳에서 더 세포를 받아오기는 어려운 상황입니다. 혹시 수도권에 계신 분 중에서 HeLa 세포를 조금 나눠주실 수 있는 분이 계실까요? 연락 부탁드립니다. 감사합니다. honeyjar96@naver.com 

cell subculture를 하는데 질문이 있어서 글 남깁니다.  Ba/F3 (suspension cell)을 처음에 1x10^5 cells 을 split해서 서브하였는데, 5일뒤에 counting 해보니 2x10^8 cells이 되었습니다.    cell doubling time이라는게 cell수가 2배가 되는데 걸리는 시간이 아닌가요?  Ex) Ba/F3 cell의 doubling time이 20hr 이라고 하면, 20hr마다 1x10^5 → 2x10^5 → 4x10^5 → 8x10^5 → 1.6x10^6 → 3.2x10^6  → ~~~을 20시간마다 간다는 뜻이 아닌가요???  무조건 저대로는 아니고 오차는 존재하겠지만 몇배도 아니고 몇백배나 차이가 나서 궁금해서 질문드립니다.   

안녕하세요 CHL세포로 염색체 슬라이드를 만드는 실험을 하고 있는데요. 첫번째 사진은 표본이구요.. 두번째는 직접 제작한건데, 보시다시피 염색체도 잘 안보이고 세포도 뭉쳐있는데요.. 이유가 뭘까요? 두어번 해봤는데 저렇게 되서.. 원인을 모르겠습니다ㅜㅜ 조언좀 부탁드리겠습니다.

skeletal muscle cell인데요, cell이 고루게 퍼져있는건 아닌 것 같은데 이상태로 분화시키면 안되나요?

살아있는 세포에 Hoechst와 DCFDA를 염색하려고 합니다. Hoechst는 DPBS에, DCFDA는 HBSS에 녹여 사용합니다. 그러면 염색할 때 Hoechst를 먼저 하고 DCFDA를 염색해야 하나요? 아니면 두개를 한 번에 염색해도 될까요? 염색 농도가 시간은 어느 정도 되는지도 알려주시면 감사합니다. 이전 기록이 없어서 찾아보며 하고 있습니다ㅜㅜ