안녕하세요 석사과정 대학원생입니다.    migration assay (boyden chamer assay - Fluorometric) 관련 조건 실험을 진행하려고 합니다.    NRK52E (rat epithelial cell)에 chemokine 유발 물질을 처리한 medium 과 U937 (human monocyte cell)으로 chemotaxis 실험이 가능 할까요??        

제목과 같이 assay를 하려고 할 때 staining solution volume과 wash 해주는 용액의 volume을 똑같이 해야한다는데 따로 이유가 있는건가요?

분자량은 460인 powder를 DW에 녹여 100mM의 stock solution을 1mL 만들려고 한다면 얼마의 powder를 DW 1mL에 넣어야하나요?

CCD-986sk로 UV에 의한 노화 연구 계획중인데 UVB irradiation시 CCD-986sk 배지의 FBS를 제거하고 UV를 조사하는 이유가 뭔가요ㅠㅠ너무 기본적인거 물어보는거같아서 민망한데 찾아봐도 안나오고 어떻게 찾아봐야할지도 모르겠고 도와주새요,,,,ㅠㅠ

저희 lab에서 invasion assay를 할 때 matrigel을 직접 transwell에 coating하는데 계속 matrigel이 새서 질문드립니다.    저희는 24well 전용 transwell 바닥에 gelatin 0.1% 10ul 로 coating 한 뒤 RT에서 1시간 말린뒤 배지로 희석한 0.5mg/ml matrigel 60ul를 넣어 coating을 합니다. Matrigel loading 한 뒤  matrigel이 얼마 안돼서 바닥으로 새버립니다. 전에 계셨던 선배들한테 배울때도 matrigel이 잘 새니 loading할때, 건조시킬때 충격이 가지않도록 조심히 하라고 배웠었는데 최근에 하면 10개면 10개 전부다 새버려서 걱정입니다. 혹시 원인이 무엇일지 비슷한 경험 해보신분 계신가요?

안녕하세요 일반 대학원 석사생인데요! invasion assay를 진행하는데 gelatin coating 한 후 matrigel을 넣으면 계속 세서요..ㅠㅠ  원래는 gelatin을 상온에서 30분 incubation 시키면 굳었었는데 어느순간부터 matrigel이 새기 시작합니다... 그래서 gelatin 굳히는 시간을 24시간까지 늘려봤는데 gelatin이 굳긴 하지만 다시해보면 안됩니다.. gelatin을 새로만들어 사용해봐도 동일했습니다! trouble shooting이 안되는 상황이라서 조언 부탁드립니다. 그리고 혹시 gelatin이 coating된 insert를 어디서 살 수 있는지 알려주실 수 있나요??  

GPCR 활성 측정을 위해 다양한 리간드를 농도별로 칼슘어세이 실험을 하고 있습니다. 결과를 prism으로 다음과 같이 분석을 하고 있는데요. 다양한 리간드 농도별 칼슘 형광 측정 후, area under curve 계산 => log [농도]로 transform => normalize (0%= smallest mean each data set, 100% = largest mean each data set) => non-linear regression하여 EC50 값을 구하고 있습니다.   제가 궁금한 부분은, 각 리간드의 efficacy (Emax)도 구하고 싶은데, normalize에서 0%, 100% 기준을 위와 같이 설정하니,  여러 리간드가 각각 모두 100% response에 도달하더라구요.. 그래서 100% 기준을 형광 세기가 가장 높았던 리간드 기준으로 normalize를 하니 EC50 값이 굉장히 다른 값으로 나왔습니다. normalize를 어떻게 설정해야, 혹은 어떤 다른 방식으로 분석해야 efficacy를 정확히 구할수 있을까요?

cell lysis 해서 WCL만드는데 lysisbuffer(cell signaling제품 쓰고있어요)에 PIC 랑 PMSF 넣고 스크래퍼로 긁었어야했는데 lysisbuffer만 넣고 긁었어요.. 긁고나서 PIC랑 PMSF 나중에 넣어줘도 되나요?ㅠㅠㅠㅠ

실험실에서 매일 사용하는 70%에탄올이 있잖아요. 소독원리가 궁금해서 찾아보니깐 비극성의 에탄올분자가 세포막을 통과하고, 에탄올의 OH기와 세포안의 단백질들이 상호작용해서 단백질들이 변성되어 세균들을 죽인다고 하는데.. 저는 장갑안끼고도 손에 많이 뿌리고 그러는데 이러면 피부에 안좋을까요? 표피세포는 좀 더 강해서 괜찮은 건가요? 궁금해서 질문드립니다.

안녕하세요  invasion migration 결과정리에 대해 여쭤보고 싶어 글 남깁니다. migration은 transwell assay로 진행하였습니다. 현재는 well의 정가운데, 위, 아래, 좌, 우 찍어서 cell 개수를 직접 다 세는 방식으로 결과정리를 하고있습니다. invasion, migration assay를 한두번 하는게 아니다보니 너무 힘들어서요.. 혹시 결과정리를 하는 다른 방법이 있을까 해서 여쭤보게 되었습니다.  제가 알고있는 또다른 방법으로는 imageJ 사용한다고 알고있는데, 정확한 방법을 몰라서.. 혹시 imageJ로 결과정리 하시는 분 계시면 말씀 남겨주시면 감사하겠습니다.

바이오 의약품 회사 등에서 cell assay를 한다고 하면 어떤 방식들을 사용하게 되나요??  궁금합니다ㅠㅠ

안녕하세요 primary cell 분리중인데 분리하다 이상한 세포(?)를 봐서 혹시 아시는분 있으실까 하고 여쭤보려 글 올려봅니다.. 한번도 이런거 본적없는데 어느 시점부터 갑자기 이런애들이 보이기 시작했어요. 세포치고 크기가 너무 크고 안에 granule도 보이고ㅜㅜ 혹시 뭔지 아시는 분 계신가요?  

안녕하세요, cell 실험초짜입니다.   dilution 하려고 하는데 stock농도가 1mg/ml인 약물을 0.03, 0.1, 0.3 1ug/ml의 농도로 PBS에 희석하려고 하는데 계산을 어떻게 해야하나요ㅠㅠㅠ농도 계산은 항상 어렵네요...도와주시면 감사하겠습니다.

western blot에서 detection 하실 때 확인하려는 antibody의 datasheet에서 Molecular Weight이 precursor와 mature의 kDa이 다른데 precursor와 mature둘 중에 어떤 band를 확인 하여야하나요? 이 둘의 차이점도 궁금합니다.

안녕하세요 이번에 세포에 LPS 와 약물을 전처리하는 실험을 하게 됐는데요, 예를 들어 1 well 에 총 1 mL 이 들어간다는 가정 하에, 약물 1 uM, LPS 1 ug/mL 이 되도록 처리하려면 약물을 2 uM 으로 제작, LPS 를 2 ug/mL 로 제작한 뒤 각각 500 uL 씩 넣어서 최종 부피 1 mL, 약물 농도 1 uM, LPS 1 ug/mL 을 맞춰줬거든요. 약물 전처리를 1시간 하는 경우까지는 이렇게 했는데,   이번에 약물 전처리 시간을 24시간까지 늘려보려고 하는데 (즉 약물 24시간 처리 후 LPS 24시간 처리 예정) 1) 이 경우엔 약물을 1X 농도, 1 mL로 24시간 처리 한 뒤, 모든 media 와 약물을 제거하고, 다시 LPS 1X 농도, 1 mL로 24시간 처리해야 할까요? (가능하면 약물 전처리 후 약물을 제거하지 않고 LPS와 함께 24시간 더 배양되길 원하거든요...) 약물 전처리를 1 mL 부피에 한 뒤 나중에 LPS 를 10 uL 라도 넣으면, 총 부피가 1.01 mL 가 돼서 어쨌든 최종 농도가 달라지는건데 ㅠㅠ 보통 전처리를 하시는 분들은 어떻게 하시는지 궁금합니다!! (전처리 된 약물 위에 LPS 를 추가적으로 넣으시는지, 그렇다면 부피는 어떻게 맞추시는지)   감사합니다!! 복 많이 받으세요!  

MSC 염색하려고 하는 대학원생입니다. MSC 분화 유도한 다음에 염색하려고 합니다. Cell 실험 처음이라서 궁금한 것 있습니다. Oil red O, Alizarin red, Von kossa 염색한 다음에 cell들이 계속 보관할 수 있는 건가요? 가능하면 보관 조건이 어떻게 되나요?

파이펫팅 연습을 96well plate에 하고나서 분광기에 돌리면 수치 같은게 나오는데 엑셀에서 그 수치로 그래프 만드는게 있거든요 거기서 나오는 R2값이 뭔지 알 수 있을까요?? R2값이 1에 가까울수록 좋다는데 그 이유도 알려주세요!

안녕하세요. mammalian cell 을 키우는 연구실입니다. cell culture 룸에서 나오는 폐기물들 (cell 키우던 dish, 파이펫 등등) bio hazard 해서 autoclave 안돌리고 일반실험폐기물봉투에 넣어서 그냥 버려도 되나요? 전 연구실은 같은 mammalian cell 이었는데 cell culture 룸에 있는 건 다 bio hazard 봉투에 버려서 멸균하고 그걸 일반실험폐기물봉투에 넣어서 버렸습니다. 근데 지금 연구실은 그냥 바로 일반실험폐기물봉투에 버리네요. 괜찮나요?

안녕하십니까, 선배님들. 제약사에서 근무중인 사원입니다. 바이러스 관련 문의를 드리고자 글을 올립니다.   현재 외래성바이러스 부정시험을 담당하여 시험용 양성대조군 바이러스를 직접 생산하고, 역가테스트를 진행하고 있습니다. 관련하여, 시험방법과 동일한 역가시험을 셋팅했는데 방법은 다음과 같습니다.   MRC-5 세포를 seeding 후 confluency가 50% 도달하면, 생산한 H1N1 바이러스를 원액과 희석액(10, 10^2, 10^3, 10^4)으로 각각 접종하고 7일간 배양한 뒤, 배양 상층액을 따서 적혈구와 반응시켜 HA를 확인합니다. 여기서 반응한 가장 높은 희석배수를 선정하여 시험 때 사용합니다.   그런데 시험 결과가 다음과 같이 이상하게 나와서 선배님들께 문의드립니다  MRC-5 <-> H1N1   HA(Haemagglutinin) 반응 시험 결과 구분 원액 10^1 10^2 10^3 10^4 cRBC(chicken RBC) O X O O X gRBC(guinea pig RBC) O X O O X hRBC(human RBC) O X O O X D(-2) Cell seeding -> D0 Virus infection -> D7 HA test   고농도에서 안나오고, 낮은 농도에서 반응성이 더 좋을 수 있는지 궁금합니다. (원액, 10^2 에서는 나왔는데 10에서는 안나옴) 현재 시험은 2회정도 했는데, 비슷한 양상이고 추가적으로 수행할 예정이지만 혹시 도움을 얻을 수 있을까 해서 질문 올립니다. 추가적인 정보 필요하시면 요청주시면 바로 답변드리도록 하겠습니다. 바이러스 관련하여 지식이 많이 부족해 질문올립니다, 감사합니다!  

안녕하세요,,,, C2C12 를 분화시켜서 palmitate로 muscle atrophy를 유발시키는 실험을 세팅하고 있습니다... 논문마다 정확하게는 안나와있어서 저는 sodium palmitate를 D.W로 녹이고 FFA free BSA에 conjucation 시켜서 sotck을 만든 후 media로 최종 희석시켜서 cell에 treatment 하고 있는데요,,, 분화 시킨 2% HS-DMEM에 그대로 사용하고있는데 serum free DMEM을 꼭 사용해야 할까요?? induction이 잘 안되는 것 같아서 질문드립니다ㅠㅠㅠㅠ 도와주세요,,,ㅠㅠㅠㅠㅠ