세포 분화중에 분화 배지 교체할 때 cell loss가 일어나는데 이게 자연스러운 현상인가요..? 좀 많이 loss가 되는 것 같아서요..

skeletal muscle cell인데요, cell이 고루게 퍼져있는건 아닌 것 같은데 이상태로 분화시키면 안되나요?

brdu를 하려고 하는데 1*10^4cell/100ul로 시딩을 해주고 있습니다. seeding 24시간 후에 starvation 24시간하고 treatment를 24시간을 하고 brdu를 합니다.  교수님께서 1*10^4cell/100ul로 시딩하면 실험하는 3일동안 너무 많이 증식하지 않을까 걱정하시더라구요. 근데 시딩 후 24시간후에 보면 20%정도 confluency 합니다.  starvation할때 medium에 1%의 penicillin streptomycin듣어가 있는 medium을 분주하고있습니다. treatment할때도 이 starvation medium에 처리하고 분주하고 있습니다. FBS가 들어가지 않은채로 2일이상있는 건데 cell 증식 할 수 있나요? 아니면 seeding후에 cell이 60% confluency하면 starvation을 하는게 맞을까요?  

alpha-MEM을 사용하는게 맞지만, 실험상 DMEM에서 분화가 된다면 DMEM으로 진행하는게 나은 상황입니다. 혹시 DMEM배지에서도 분화가 문제없이 되는지 해보신 분 있을까요?

chicken 다리 근육에서 얻은 primary cell입니다. sorting은 percoll로 진행하고 있는데요   differentation 실험중에 있는데 Hores serum를 10%, 5%, 2% 로 각각 처리하면서 최적화중에 있습니다. 다른 논문들을 찾아보니 재각각으로 처리하는 논문들이 많고 해서 다양한 농도로 진행하고 있었습니다.   그런데 문제는 P0 즉 바로 얻은 cell에서는 따로 HS를 안쓰고 FBS에서 분화가 자연적으로 발생하는데 P1에서 HS 및 FBS로 분화 유도를 하면 myotube가 형성되기 전에 cell들이 막이 생기면서 바닥에서 떠오르면서 공처럼 뭉치고 있는데 왜 그럴까요?  

기초적인 질문이 될 수도 있지만, 분화 후의 IPS세포는 원래 증식능이 별로 없나요?   대부분의 판매되는 IPS유래 분화세포는 계대가 안된다고 적혀있는게 많은 것 같은데, 알려주시면 감사하겠습니다.

카테고리는 잘 모르겠어서 아무거나 선택했어요 죄송합니다ㅠㅠ   바실러스 튜링겐시스를 배양할 때 LB 배지에서 배양해야한다는 것 외에 잘 모르겠습니다. 자세하게 알려주세요ㅠㅠ 온도나 배양 방법, 배양시 주의 사항, 배양 기간 등등이요!   백강균을 배양할 때는 한천배지를 이용하는 것이 좋다고 알고 있는데요. 24도에서 배양하면 좋다는거 말고는 잘 모르겠어요 마찬가지로 배양 방법이나 배양기간, 배양시 주의사항을 자세하게 알려주세요!! 

제가 cyclophosphamide를 이용해 mouse 면역 반응을 억제하고 control 군과의 NK cell activity를 비교하는 실험을 진행하고 있습니다. spleen을 분리해 조직을 갈고 rpmi 배지에 키운 뒤 48시간 뒤에 yac-1 cell과 co-culture한 군과 splenocyte에 배지만 넣고 키운 단독군에서의 LDH 방출량을 비교를 해보았는데 splenocyte 단독군에서 약간 더 LDH 방출량이 더 높은 결과가 나오게 되었습니다. LDH는 nk cell이 yac-1 cell을 공격해서 yac cell이 터져 죽으며 방출되는 것으로 알고 있는데 어째서 splenocyte 단독군에서 LDH가 방출이 되는 것일까요ㅜㅜ 혹시 이유를 아시는 분 계시면 의견 부탁드리겠습니다!

normal breast cell인 MCF10A에 human APC를 mutation 시켜  b-catenin이 증가되는 것을 확인하여서 ubiqutination을 억제하는지를  확인하고 싶은데 좋은 방법이 있으시면 추천부탁드립니다.  

급하게 잡힌 일정때문에 osteoclast 분화 예정일과 겹쳐서, 다른 lab에 부탁하고 가려고하는데,   혹시 분화된 osteoclast를 media suction이후 plate 그대로 deepfreezer에 얼려두었다가, 며칠뒤에 fixation하고 TRAP staining해도 큰 문제가 없을까요? cell을 버리는것보다 시도해보는게 나을것같아서.. 일단 그렇게라도 해보는게 좋을까요?   fixation까지 부탁하기에는 실험군이 너무 많고, fixation solution을 넣을 때 cell이 잘 떠서 불안합니다

카테고리 분류는 어떻게 해야할지 정확하게 모르겠어 우선 아는 단어를 골랐습니다 죄송해요ㅠㅠ 바실러스 튜링겐시스를 배양할 때 사용할 수 있는 배지는 무엇 무엇이 있나요? 바실러스 튜링겐스시를 배양하여 생물 농약을 만들고자 합니다! 이왕이면 구하기 쉬운 배지로 답변 주세요ㅠㅠ

media 갈아주지않고 냅둔지 4일차입니다 원래 이쯤되면 죽어야 정상이라는데 제껀 왜 두배씩 불어나가는건가요..?   K562 DAY1 2.1*105 DAY2 9.45*105 DAY3 19.5*105 DAY4 32.4*105   NK92 DAY1 2.85*105 DAY2 4.35*105 DAY3 8.4*105 DAY4 19.2*105   둘다 DAY0에 1*105로 seeding했구요 특히 NK92는 이렇게 잘자라지 않는다는데 제가 뭘 잘못한걸까요ㅠㅠ..

분화 배지에 유통기한이 있던데 기한 지나면 실험 결과에 영향을 줄 수 있나요?

세포배양할때 왜 박테리아나 대장균은 알코올램프에서하고 동물세포는 알코올램프가 왜 필요없나요 너무 궁금해요 ㅜㅜㅜㅜ 

안녕하세요  오가노이드를 형성하고 있는 대학원생입니다. 다른 논문들과는 달리, 제가 실험했을 땐 오가노이드가 형성이 되질 않네요 논문에서는 Aggrewell 에 키운 하루 이후면 동그란 오가노이드가 형성이 되던데 저는 그렇질 않네요. 작은 오가노이드 하나는 형성이 되는데 주변에 single cell 이 퍼져있습니다.   D6~D7 동안 페트리디시에 유지하고 있는 오가노이드들은 오가노이드 표면에서 singlecell 들이 떨어지는 현성이 계속 일어나구요.   혹시 저와 같은 문제를 겪어보셨던 선생님들, 해결해보신 분들 계실까요?      

  안녕하세요, 박사과정생으로 이번에 Dendritic cell에 대해 연구를 하게 되었습니다. 기존에 Bone marrow cell을 마우스의 정강이뼈와 대퇴부에서 isolation하여 GM-CSF를 treat하여 BMDM을 만들어 사용하는 실험은 몇번 해보아서 알고 있었고, GM-CSF를 이용한 BMDC 생성법도 알고 있었는데요,   이번에 https://doi.org/10.1016/j.immuni.2020.04.005 라는 논문에서 보게된 Flt3L을 이용한 BM culture방법을 사용하여 DC를 만들고 싶어, article에 있는 methods를 그대로 따라서 해 보았는데.. 완전히 실패하였습니다.   위 논문에 쓰인 protocol을 간단히 설명드리면, BM뽑아서 RPMI (10%FBS, 2mM L-glutamine, b-mercapto, Flt3L)에 3일간 culture후 3일째에 OP9 cell과 합쳐 co-culture하라고 되어 있는데요, 문제는 OP9 cell과 합치기도 전인 3일째에 cell들을 harvest하여 FACs로 확인해보니 대부분의 BMcell이 죽었다는 것입니다. BM cell의 survival에 도움을 주는 GM-CSF가 전혀 들어가지 않아서 그런것인가 추측만 할뿐인데, 논문 저자들은 어떻게 실험을 했는지 알수가 없어서...  1저자 2저자 연락처를 찾아보려고 노력도 했는데 도저히 연락할 방법이 없더군요. 3일째에 그래도 얼마 안되는 cell이라도 살아있으니까 OP9 cell과 합쳐 보았는데, 오늘 5일째 FACs를 확인해보니 조금 살아있는 cell이 늘긴 했습니다만 이 역시 너무 적습니다. 이렇게 되는게 정상인것 같지도 않고요... 혹시 이 실험방법과 관련하여 경험이 있으시거나 지식이 있으신 분이 계시다면 조언을 해주시면 정말 감사하겠습니다.   긴 글 읽어주셔서 감사합니다. 좋은하루 되세요.