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 카테고리: 전체 > Cell Biology > Viability
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Q. live imaging
APC gene mutation 된 MACF10를 ctl 10A와 비교하여  b-catenin 의 nuclear translocation을 confocal로 live image 찍으려고 합니다. cell이 살아 있는 상태여야해서 fix는 안될 것 같은데 Ab가 nucleus안까지 들어갈까요? cell에는 damage 주지않으면서  Ab를 넣는 방법 뭐가 있을까요?   의견 부탁드립니다.
회원작성글 새슬  |  08.08
Q. melanoma cell culture 중에 찍은 사진입니다 첨부파일
흰색 가느다란 줄 같은게 보이는데 문제가 있는건가요? 배지를 갈아줘야하나요?
회원작성글 단치  |  08.06
Q. cell density 와 시약의 독성관련문의
96 well plate에 같은 양의 cell을 seeding 하고 농도를 다르게 해서 시약을 처리하였습니다.  plate를 한개는 10,000 cells/well, 다른 한개는 100,000 cells/well로 10배 차이나게 해서 두 plate를 깔고 시약의 처리농도는 각 plate마다 같게 하였고 24시간 처리 후 CCK-8 assay를 하였습니다. 시약의 농도가 높아질 수록 viability가 감소경향을 보이는 것 같기는한데요,  문제는 cell이 10배 높게 seeding 된 plate에서 viability 감소경향이 더 가파릅니다.  10,000 cells per well plate에서는 비처리군과 가장 높은 처리군의 차이가 10%가 안되는데, 100,000 cells per well plate에서는 30% 정도 차이가 날정도로 가파르게 감소합니다.  제가 생각할때는 cell이 10배나 차이가나는데 만약 시약에 독성이 있다고 하더라도 cell이 더 적은 쪽에서 급격한 감소를 보일 것이라고 생각했는데 그반대라 오히려 납득이 안되서요..   이런경우가 가능할지.. 혹시 아신다면 왜 그런지 알려주실 수 있으실까요..  
회원작성글 판돌판돌  |  08.04
Q. LIVE/DEAD™ Cell Imaging Kit 염색 문제 첨부파일
LIVE/DEAD™ Cell Imaging Kit 이용하여 셀 염색 진행하고 있습니다.   petri dish에 cell suspension (DMEM) + 염색약  -- 1:1 15분 염색 후 관찰하는데, live/dead 색이 동시에 보이는 세포가 존재해서요.   dead cell 같은 경우에, raw data에서 너무 보이지 않아 형광 이미지가 잘 보이도록 스케일을 조절해준 결과입니다. 그 스케일을 live cell의 이미지에도 적용했습니다! (HaCaT cell 입니다!)
회원작성글 motherscof..  |  07.28
Q. H2O2 세포 보호능 볼때 CTL 의 생존률이 계속 달라지는 이유
현재 SW1353 세포에 H2O2 와 샘플을 처리해서 샘플의 H2O2에 대한 보호능을 보고 있습니다. 그런데 문제가, 같은 농도의 H2O2를 같은 시간 처리해도 CTL 군에서 어떨땐 20% 정도의 생존률이 나오다가 어떨땐 40% 대의 생존률이 나오는 등 재현성이 잘 안나타나네요. 이런식이면 샘플의 효능 측정도 일정하지 않을텐데 말이죠. 이런경우를 겪어보신 분이나 원인을 알고 계신 분이 계실까요?
회원작성글 AGCT  |  07.27
Q. microplate reader로 흡광도 측정시
CCK-8을 이용한 cell viability 측정에서 microplate reader기로 흡광도를 측정하는데요. 적정 CCK-8 incubation time을 정해야 해서 연달아 찍어봐야 하는데 이럴때 뚜껑을 씌우고 reading 하면 안될까요? 이 실험만 하면 잠깐 열고 찍어도 되겠는데, 불행히도 같은 plate 내에 다른 실험군이 있어서 몇일 더 culture 해야 해서 가급적이면 뚜껑을 안열고 싶네유.. ㅠㅠ    
회원작성글 오구오구  |  07.27
Q. NK cell activation 실험을 진행시 어떤 nk cell을 사용하는지 궁금합니다.
저는 현재 NK cell을 activation 시키는 추출물을 찾는 실험을 하고 있는 대학원생입니다. 현재 그 추출물이 NK cell을 activation 시키는지 확인하기 위해 recombinant IL-15과 비교하려고 treat하였습니다. 근데 제가 현재 사용하고 있는 NK cell은 IL-2가 들어가지 않는 NK-92MI 입니다. 이미 활성화가 되있는 것인지 recombinant IL-15를 넣어도 control(IL-15를 넣지않은 군)과 차이가 나지 않습니다. NK cell activation 실험에 NK-92MI을 사용하는게 맞는지 궁금합니다.. 
회원작성글 감자돌이33  |  07.26
Q. MTT assay 실험때
polydopamine (PDA) 와 Indocyanine green(ICG) 약물의 역할은 무엇인가요? 자료를 검색해도 잘 나오지 않아서 질문드립니다.
회원작성글 poiwue  |  07.25
Q. cell viability 할때 시료 주입할때요
well 에 시료 주입할때 팁을 배지에 닿게 하시나요 아니면 well 벽면으로 주입하시나요? 보통 팁으로 액체를 따면 지정량보다 좀 더 많이 들어가잖아요? 배지에 직접 주입하면 실험 결과가 부정확하겠죠?
회원작성글 AGCT  |  07.14
Q. 비전공자가 실험 가능한 항균 능력과 세포생존율
안녕하십니까 치과 보건학 전공자입니다. 현재 치과재료에 항균 능력과 세포생존율을 보려고 합니다. 비전공자라 여러 실험 방법을 찾아보고 알아보고 있는데,   제가 여러 관련 논문을 알아본 결과 할 수 있는 방법 중 Disk diffusion method 으로 알아보려고 합니다. 비전공자인 제가 직접 실험 해볼 수 있는 그 외에 까다롭지 않은 실험방법이나 실험 방법 관련된 자료를 공유해 주실수 있으실까요?
회원작성글 dova  |  07.10
Q. 기초적인 질문입니다. hemocytometer 에서 12.5 UL를 넣는다고 알고있는데 이 이유는 무엇인가요?
기초적인 질문입니다. hemocytometer 에서 12.5 UL를 넣는다고 알고있는데 이 이유는 무엇인가요?
회원작성글 건빵맨  |  07.09
Q. MTT assay
MTT assay 0.5%로 쓰고 있는데 약물을 treat하고 현미경으로 IC50가 대충 요정도겠구나 예상하고 결과를 찍어보면 제가 예상한것보다 약 2배 높은 농도에서 IC 50가 잡히는데 이유가 뭘까요?
회원작성글 문어체  |  07.07
Q. Ethanol 처리시 cell이 죽지않는 이유
Mtt로 간암세포의 viability를 확인하고 있습니다. 1. Hepg2 cell을 96well에 씨딩, 24시간 배양 2. 에탄올 처리하여 24시간 배양 3. mtt 처리 의 순서로 진행 중입니다 6%의 높은 농도까지 사용했는데도 viability가 떨어지지 않습니다.. 이론상 말이 안되는 것 같은데 무엇이 문제일까요..? Culture 및 희석에는 MEM 배지 사용하였고, 6% etoH로 처리하고자 하는 경우에는 100% absolute ethanol을 60%로 희석하여, MEM배지 180ul + 60% etoH 20ul 처리하여 최종적으로 6%가 들어가게 하였습니다. 도움 부탁드리겠습니다ㅜㅠ
회원작성글 Jdjdidde  |  06.29
Q. FACS 분석시 세포 보관방법
안녕하세요 제가 있는 곳에는 FACS (유세포분석기) 장비가 없어서  다른곳으로 이동하여 분석을 해야 합니다.   샘플은  당일 들어온 사람의 조직에서 세포를 추출하여  이 세포를 가지고 안티바디 염색 + FACS 를 찍어야 하는데 분석장비실에서는 라이브셀과 PFA고정된 세포랑 결과가 다를수 있기 때문에 라이브셀을 권장합니다.   문제는 장비예약은 미리 해두어야 하고 그날에 샘플이 들어올지 미리 알 수 없다는 것입니다 그렇다면 2-3일전에 샘플이 들어온다면 이 세포를 미리 추출해서 최대한 고정없이 분석날까지 살려둘수 있는 방법은 뭘까요?    
회원작성글 allison  |  06.29
Q. 세포실험 물질 처리 시 pH 문제
안녕하세요. 세포주를 이용한 기능성평가 실험 중 문제가 생겨 문의드립니다. 시험물질 처리 시 최종 농도에서 pH가 11까지 올라가는 경우 pH를 7.4 수준으로 맞춰줄 수 있는 방법이 있을까요?? 버퍼를 사용하여 stock을 만들면 어느정도 완충이 될까하여 물질을 PBS에 녹여서 처리해보기도 하고, 세포배양배지에 바로 녹여서 처리해봐도 pH가 너무 높아요..  이 경우 HCL을 이용하여 적정을 해야할까요? 좋은 아이디어나 경험이 있으시면 조언 부탁드립니다.
회원작성글 글씨야  |  06.23
Q. DAPI staining 염색 안 될 때
안녕하세요. Contamination 여부 확인 목적으로 DAPI staining을 처음 해 본 학부생입니다. 오늘 확인 결과 staining이 안 돼서 안 보이던데 어떤 문제였을까요..? Protocol은 다음과 같습니다. 1. Media suction 2. PBS 1 ml로 wash 후 suction 3. 4% PFA 1 ml로 fixation 4. 상온에서 15분 대기 후 PFA suction 5. PBS 1 ml로 wash 후 suction 6. DAPI solution 두 방울 넣은 후 slide plate에 glass를 둠 7. 호일로 감싼 후 10분 대기 8. 물기 제거 후 detection   감사합니다.
회원작성글 eunseuli  |  06.23
Q. Cell viability 또는 Proliferation 측정 실험을 디자인하고 있습니다.
안녕하세요 Starflower입니다. MBMEC cell을 이용하여 특정 약물을 처리하는 그룹과 대조군의 cell viability와 proliferation을 확인하는 실험을 디자인하려 하는데, 이 특정 약물을 사용했을 때 cell viability가 좋아지는 경우에도 CCK-8 assay를 사용해도 될까요?   이전에 다른 세포지만 CCK-8을 이용해서 IC50값을 구하고 그런 실험은 한 적 있는데 반대적인 상황이라서 질문 드립니다.   혹시 좋은 방법이 아니라면 또 다른 실험방법이 있을까요? 감사합니다.
회원작성글 Starflower  |  06.21
Q. mtt assay trouble shooting 도와주세요 첨부파일
사진의 세포들은  viability 를 증가시키는 약물을 처리한 사진입니다.  제 생각대로라면 웰에 존재하는 모든 세포들이 mtt solution에 의해 formazan을 생성해야하는데, 모든 웰도 아닌 몇몇 웰에서 (조건과는 관계 없이) 사진과 같은 세포는 있으나 formazan이 생성되지 않은 상태가 반복적으로 관찰됩니다.    이유가 무엇일까요? mtt solution의 양이 적게 들어가서 그런 것은 아닌 것 같습니다.. 포르마잔 생성 안된 세포 모양이 좀 뾰족한데 관련 있을까요..
회원작성글 haempa  |  06.17
Q. MIC 농도 임의로 지정할 때
MIC 실험 후 관심있는 농도를 세분화 해서 다시 하려고 합니다. 그래서 농도를 임의로 지정하게 된다면 dilution 할 수 없는데 그럴때는 항생제 계산을 하나하나 다시해야하나요? 아니면 다른 방법이 있나요?
회원작성글 gguanssi  |  06.17
Q. MIC50 계산 질문합니다
안녕하세요 MIC test 실험은 처음이라 여쭙니다. MIC test 실험을 한 후 MIC50를 구하려고 합니다. Levofloxacin 0.125ug/ml에 대해서 OD가 0.688이 나왔고, 생존률 74% Levofloxacin 0.25ug/ml에 대해서 OD가 0.1이 나왔고, 생존률 11%가 나왔습니다.   이 사이에 대한 MIC 50값을 프로그램이 없어 엑셀로 구하려고 하는데  어떻게 구해야 하나요?
회원작성글 gguanssi  |  06.16
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