안녕하세요. 탈모관련 실험을 셋팅중입니다. 국내에서 human dermal papilla cell을 2번 구매하였습니다. female과 male 40 years old로 구매를 하였는데, 두 세포모두 minoxidil 10uM을 처리하였을 때, 세포성장인자 (KGF, VEGF 등) 에서 발현이 나타나지 않습니다. primary세포에 minoxidil을 처리하였을 때, 왜 반응이 일어나지 않는지 궁금합니다.   조금이라도 아시는 분들은 답변 달아주세요 ㅜㅜ <trouble shooting 조건> (1) 세포 재 구매 (2) DPC 전용배지로 배양중 (3) minoxidil, finasteride등 positive control 농도별 테스트 진행함    - 발현 변화 없음. (4) primer 변경 등  

안녕하세요  새내기 대학원생입니다.   cell subculture시 trypsin 처리 하고 media로 트립신을 희석시켜서 하는 방법과 trypsin 처리 하고 centrifuge 돌려서 trypsin 제거 하고 media로 resuspension 해주는 경우 중 어떤 것을더 선호하시나요? 선호하시는 것이 있으시다면 그 방법을 선호하는 이유와 만약 첫 번째 방법을 사용하신다면 트립신이 몇 퍼센트까지 괜찮은지 알려주신다면 감사하겠습니다.(예를들면 media 20ml에 트립신 2ml 정도 -> 10%등)   감사합니다.

MCF-7 cell을 받아서 스탁 만들어두고 키우고있습니다. 근데 계속 컨탐되는거 같아요. background가 더럽습니다ㅠㅠ dish를 약간 기울면 하얀색 알갱이? 모래처럼 움직이는게 보입니다. 일단 급한대로 1% PS media를 넣어줬습니다.. 예전 cell도 컨탐되어서 다시 스탁 푼건데 풀때는 괜찮습니다. 풀고 cell 확인하면 잘 붙어있습니다. 계대 한번해도 잘 붙어있는걸 확인합니다. background도 깨끗해요. 근데 3번째 넘어갈때 항상 저렇게 컨탐되네요..이유가 뭘까요?ㅠㅠㅠ 배지도 새로 따고 pbs도 새로 땄는데.. 트립신이 컨탐됬을수도 있을까요? 실험실 사람들과 같은 벤치쓰는데 다른사람들껀 괜찮아 보입니다. 인큐베이터도 같이 사용하고있어요.

그람 양성 박테리아를 culturing하고 있습니다. 포자 유도배지로 진탕배양기에서 4일 배양하는데 Contamination이 일어나서 포자배양을 하지 못하고 있습니다. 공기 중 오염이 의심되는데, 진탕배양기는 헤파필터를 사용하여 공기를  챔버내에 공급하지 않나요? 실험하시는 분들의 경험이나 의견을 구합니다.                

안녕하세요, 저는 한 제약회사에 다니고 있는 사람입니다.  현재 저희는 QC 시험을 위해 긴급히 SK-BR-3 cell (HTB-30) 을 구하고 있습니다.  혹시 임시로 저희에게 제공해주실 수 있으시다면 저희가 구매한 cell 이 입고되는 대로 cell 을 드릴수 있도록 하겠습니다. (아니면 혹시 다른 cell 이 필요하시다면 말씀주세요) 긴급히 내부사정으로 구하게 된 점 양해부탁드리며, 연락 주시면 정말 감사하겠습니다.  제 메일 주소는 아래와 같습니다.  jcho2015@gmail.com   감사합니다.   

1. 실험군 : 그리스 시약 + LPS 처리된 대식세포 상층액(NO가 분비되어 그리스시약과 반응해 선홍색의 아조염료가 생성됨) 대조군(blank) :　그리스 시약 + LPS처리 안한 대식세포 상층액(NO분비 안되어 색변화 없음) 이렇게 설정하는 것이 맞나요??   2. NO standard와 비교해서 NO의 농도를 구하란 말이 질산나트륨 수용액을 이용하여 만든 표준 검정 곡선(NO standard curve)을 통해 아조염료의 흡광도(y값)에 대응하는 NO2의 농도(x값)를 구하면 NO의 양을 정량할 수 있다는 말인가요?   3. NO standard는 대조군이 아닌거죠??  

안녕하세요 이제 석사를 시작하지 얼마안된 학생입니다.. 다름이 아니고 ccd 18co cell 을 키우고있는데 셀들 주변에 아주작은 거뭇거뭇한게 여러개 보이네요... ㅠㅠ  그리고 확대해보면 몇몇 작은 하얀색 덩어리가 꿈틀거리면서 다니는게 보입니다.  혹시 오염인지 그리고 오염이라면 어떤오염인지 알수있을까요..? 선배님들의 답변 감사하게 듣겠습니다

transwell 후 crystal violet으로 staining해서 이미지를 확인했는데 염색이 떡진 것처럼 원래 세포 모양과는 다르게 너무 이상하게 나왔습니다.. 처음 셀 깔고 현미경으로 볼 때는 셀이 있는 걸 분명 확인했는데 염색은 이렇게 되어서 이유를 모르겠어요..ㅠㅠㅠㅠ 혹시 이런 식으로 나오셨던 분 없을까요?  일단 세포는 ID8이라는 Murine ovarian cancer cell입니다. 아래는 ATCC에서 가져온 ID8 Culture 시 사진이에요.. 실험 자체는 cell seeding 후 12시간 처리 -> 4% PFA solution으로 10분 fix -> PBS washing 2번 -> 0.05% crystal violet으로 30분 staining -> PBS washing 2번 -> 면봉으로 unmigrated cell 제거 -> Dry 후 촬영 순서로 하였습니다. 아시는 분은 답변 부탁드립니다! 감사합니다

안녕하세요. 지금 retinoic acid를 이용해서 SH-SY5Y 분화 실험 셋업중인 석사 1학기차입니다.   지금 5mM retinoic acid stock을 만들어둔 상태이고요. (DMSO에 녹였습니다!) media(DMEM)에 희석시켜서 최종 10uM 사용하려고 했는데 RA가 잘 안녹고 떠다니더라구요 ㅠㅠ  그리고 최대한 vortexing하고 처리해봤더니 cell도 다떨어져 죽었습니다.. 같은양의 DMSO만 넣었을땐 안죽는걸로 봐서 RA 때문인거같은데.. 혹시 SH-SY5Y분화실험을 해보셨거나 RA를 완벽하게 녹이는 법을 알고계신분 있을까요..?

  안녕하세요. 대학원 석사생입니다. 세포를 키우는데 어느날 곰팡이가 활짝 피어서 인큐베이터 뒤집고 다시 세포를 풀었는데 세포 상태가 좋지 않아 배지만 갈아주고 다음 날 확인하였습니다. 더 자라지 않고 세포 모양이 변한거 같은 생각이 듭니다. 또 자세히 보니 세포 주변에 이런 것들이 있어서 그런데 세포가 또 오염된걸까요? 원인을 알려주셨으면 합니다. 감사합니다.

안녕하세요. 현재 HUVEC 세포를 키우고 있는데요. 실험에 들어가기 위해서 75T Flask에 0.9 x 10^6으로 seeding을 하였는데요. 다음날 세포 density를 확인하니까, 수가 너무 적다고 생각되서요. 75T Flask에 어느정도 HUVEC을 seeding 해야지 적절한가요? 추가적으로 세포를 seeding 하고 cell starvation을 주려고 하는데, 세포는 적어도 몇 % density를 가지고 있어야 좋을지에 대해 여쭤봅니다. 세포 실험을 배우고 있는 단계라 많은 가르침 부탁드립니다.

안녕하세요 이제 막 HeLa cell을 키우기 시작한 대학원생입니다다다 미디어 필터링도 해주고 인큐베이터 청소+오토클레이브 다 진행하였는데 지속적으로 같은 종류의 컨템이 일어나고 있습니다...ㅜㅜ 이게 무슨 컨템인지 그리고 어떻게 잡을 수 있는지 선배님들의 조언 부탁드립니다...

saos2 cell을 구매해서 키우는 중입니다 세포은행에서 구매했던 세포가 잘 자라지 않아 다른 방법으로 세포를 구했는데 세포가 너무 안 자랍니다.... 보통 100파이 dish에 60만 세포를 깔면, 이틀이면 세포가 어느 정도 많이 자랐었는데 이 세포는 1주일 동안 배지만 갈며 기다려도 세포가 많이 불어나질 않습니다... 배지는 RPMI 1640 (L-glutamine, HEPES) + 10% FBS + 1% P.S 사용하고 있습니다 ATCC에는 15% FBS로 나와있어서 해봤지만 큰 차이는 느껴지지 않습니다   혹시 Saos-2 세포를 키워보신 분이 계시다면 어떻게 하셨는지 도움 부탁드립니다ㅠㅠ 실험이 조금 급한데... 세포가 너무 안 자라서 걱정입니다

세포를 카운팅 해서 10cm dish에 배지 10ml을 넣고 세포를 300ul을 넣을라고 하는데요. 이게 몇대 몇이라고 봐야하나요?... 수학적인데 잘 몰라서 알려주시면 감사하겠습니다.

subculture 마지막에 cell down 시키고 resuspending해서 플레이트에 seeding 해줄 때 resuspending을 wash buffer에 해줘서 seeding 해도 괜찮나요? 아님 꼭 media에 해줘야 되나요?

안녕하세요 생명과학과에 재학중인 학생입니다 이곳에 많은분들께서 잘 알려주신다고해서 가입하고 처음 글 썼습니다 실험결과 해석 도와주실수있나요?

안녕하세요? 전공이 바뀌어 실험을 중단했다가 최근 개인적인 이유로 실험 장비를 조금씩 모으며 실험을 하고 있습니다.   매우 간단한 실험을 해보고 싶은지라, 사무실에서 간단하게 장비를 구비하여 하려고 하는데,   incubator가 없을때 대체할 수 있는 장비가 없을까요? (cell incubator는 가격이 좀 세서... 개인적으로 구비하기는 무리가 있어서요..)   키우는 균주는 S.aureus, E.coli 정도로  잘 자라는 균주입니다.   제가 해본 것은   1. 스티로폼 박스에 전구를 켜서 온도를 유지하였습니다. : 전구로 인해 너무 overheating 이 빠르게 되서,  50~60도 이상 온도가 올라가 실패   2. 전구에 자동 온도 조절 장치를 달아서, 일정 온도 이상 올라가면 전구가 꺼지게 하였습니다. : 37도로 맞춘다고 하면, 온도 조절 장치가 sensitive하지 않아,  30~40도 사이에서 온도가 출렁이니까  세균이 다 죽음.   : 또한, 전구가 위에서 내리 쬐는데, 전구에 가까운 부분은  부분적으로 overheating 되는지, plate에 전구쪽 부분은 다 타죽어서 안자람.   : 위에서 열이 가해져서 그런지, plate를 뒤집었다고 가정하면, 밑바닥 (뚜껑) 부분에 물이 흥건... 하게 참     3. 스티로폼 박스에 팬을 설치하고, 하단에 전구를 설치하여 전구에서 발생된 열이 팬으로 고르게 퍼지게 함.   : 밑부분에서 열이 가해져서 그런지, 또 고르게 균이 자르지 않음. overheating 문제는 여전히 있는 듯...   4. 요구르트 배양기를 사서, 거기에 키워봄. : 요구르트 배양기는 생각보다 뜨겁네요.. 50도 가까이 됨.   5. 계란 부화기 : 이것도 너무 뜨거워서 실패   ------------------   약 수만원 이내의 비용으로 배양기를 DIY로 설치해볼 수 있을까요? 이도저도 안되면 배양기를 구입해야하겠구나 생각하고 있습니다.   

안녕하세요. 실험실에서 Cell culture를 조금 하고있는 일반인입니다. 제가 실수로 DMEM을 만 이틀정도 상온보관해버렸는데 이대로 사용해도 괜찮을지 여쭤보고 싶습니다.... 참고로 아직 FBS도 넣지 않았고 뚜껑도 열지않았습니다... 답변 부탁드립니다ㅠㅠ 감사합니다.

안녕하세요 학부생 신분으로 실험을 배우고 있습니다 배양 진행 중 새 60파이 디쉬에 10% DMEM 3400ul과 셀 600ul을 넣어 용량 4ml를 맞추려 했는데 제가 DMEM을 3000만 깔았는지, 제대로 깔았는지 기억이 불확실합니다ㅜ..만약 3000만 깔았을 경우에 셀이 죽고 실험이 망하게 되나요..이런 경우는 처음이라 막막하네요ㅜㅜ글고 너무 기초적인 질문이라 부끄럽네요

실험이 끝나고나서 뒤늦게 알아차렸는데 셀을 회수해서 셀현탁액 20ml 을 만들었는데 알고보니 그걸 1x pbs 2ml 이 들어있던데에 넣어서 만들었고 그 셀현탁액을 1.5 ml 떠서 total 20 ml 로 T75에 셀을 계대를 했네요... 결국에는 PBS 는 아마 20 ml 중에 많으면 200 ul 정도 있을거같구요...  내일 셀을 보긴할건데 셀에 큰 영향이 있을까요??? 셀을 다룬지 얼마안되서 걱정스러워서 질문남겨봅니다 ㅠㅠ